酸碱处理去除血液制品中热原工艺的探索

2019-06-01 07:35闵朝
智富时代 2019年4期
关键词:热原免疫球蛋白血液制品

闵朝

【摘 要】酸碱去除血液制品中热原的工艺,操作方便、简单,一直在血液制品领域广泛使用。可以说,处理血液制品中热原是一个非常重要且复杂的问题。多年来,很多单位都在利用各种方法对热原进行处理,都在积极探索酸碱处理去除血液制品中热原的工艺,通过调整高热原制品的PH、离子强度、蛋白浓度等参数,来实现在不同的温度条件下来观察热原的种种变化。通过研究表明:酸碱处理是去除血液制品中热原较为科学、有效的方法。

【关键词】酸碱处理;血液制品;热原;免疫球蛋白

一、引言

各种人血浆蛋白制品统称为血液制品,其中包括人胎盘血白蛋白、人血白蛋白、静脉注射用人免疫球蛋白、肌注人免疫球蛋白、组织胺人免疫球蛋白等等。健康人血浆是血液制品的原料,人血浆中的水份占有92%左右,而蛋白质则占有7%-8%,蛋白质通过分离提纯制成了血液制品。自然环境中普遍存在热原质,这也是目前很多大规模血液蛋白分离技术和方法,容易受到热原污染,进而产生热原反应的原因。热原作为一种药理活性很强的毒性反应物质,对血液制品有很深的影响。

二、方法

去除污染细菌毒素有很多方法,一般是根据血液蛋白相对分析的不同质量来去除细菌内毒素,常用的有超滤、分子筛等方法,这些方法主要适用于一些分子含量较低的输液药品中,比如生理盐水和葡萄糖水等。【1】此外还有层析法,应用的较为广泛,但是由于设备成本较高,因此处理量并不大。而酸碱处理方法,在血液制品和其化学条件相对稳定的条件下,则也有较为明显的变化。把生理盐水在注射前,平均分成均等的两份,分别用lmol/LHCI或lmol/LNaOH调pH至4.0±0.5、10±0.5,分别加入一定量的标准内毒素,使内毒素浓度为4EU/而,除菌过滤后分成4份,分别放在57±0.5℃、37±0.5℃、20±0.5℃、(2—8)±0.5℃的温度条件下孵放,分成不同的时间段,在相应的时间内进行取样,然后對毒素含量进行测量。【2】

三、酸碱处理热原的处理方法

血液作为人体的液体组织,有着一定的碱性,正常人的血液会将血液酸碱度保持一个相对恒定的状态,通常是以PH值作为衡量标准,其范围一般在7.35~7.45,而人体的生命活动耐受的最大变动的那个范围是6.9~7.8,酸碱度对机体有着较为明显的作用。一般情况下,酸碱度对神经肌肉组织的兴奋程度可以产生一定的影响。当血液酸碱度变化不明显时,说明人的血液酸碱度是正常的,这是由于人的血液中有着抗碱和抗酸的物质,能够对人体系统形成一定的缓冲作用,对肾脏排泄、肺呼吸等都有一定的影响。一旦出现身体疾病或者其他不良的反应,身体就会出现酸碱失衡,导致系统紊乱,我们在临床上把这样的现象称为酸碱中毒。结合我们日常酸碱处理的热原方法,我们进行以下分析和论述。

(一)酸孵放

静脉注射免疫球蛋白中内毒素在酸孵放中会产生影响,5%的低pH(pH4±0.2)静脉注射丙种球蛋白中,分别按5SEU/ml及2.5EU/ml的量加入内毒素,摇匀,采用家兔法来对热原取样进行监测,另将样品于24±1℃孵放24d,同样用家兔法检测热原。

(二)碱处理

利用家兔法和鲎试法对热源的合格度进行检测,将20%的人血白蛋白制品利用注射盐水或者其他水进行稀释,将其稀释成10%的浓度,用1mol/L的Na0H把PH调到10.0±0.2,之后加入一定量的标准内的毒素,分解成3份,每份浓度变成4EU/mL,其中两份的Na十浓度调为40mol/L,进行除菌过滤,然后放于37±0.5℃、57±0.5℃孵放。而另外一份则将Na十浓度调为160mol/L,除菌过滤后则在37±0.5℃孵放,在不同的时间段来取样进行测试,利用鲎试法来测量内毒素含量,并观察其样品外观。

四、结果

内毒素浓度为4EU/mL的生理盐水样品,在不同PH(4、10)及不同的温度下进行孵放。同时在不同的时间段,利用鲎试法进行检测,检测出的结果是:pH4,经不同温度孵放24小时之内,内毒素含量均下降较快,至35h均降到1(EU/mL;PH10,孵放温度越高内毒素下降越快,57℃孵放35h降为阴性,37℃孵放76h降为阴性,而20℃、28℃下%h内毒素浓度只下降到1EU/mL,见图l、图2。

五、结语

随着血液制品分离纯化工艺的发展,血液制品的种类在不断增加,其适应症也在不断被发现,这些使得用于临床疾病治疗的血液制品数量显著上升。根据国家食品药品监督管理总局发布的相关指导原则,生产工艺要具有一定的去除/灭活部分病毒能力,生产过程中应有特定的去除/灭活病毒方法,以提高血液制品的安全性。通过上述酸碱处理的方法可以看出,酸碱处理的血蛋白制品,其检测的热原都符合我国相关生物制品的要求和规范,并且在酸孵化后的样品(少了碱处理),高浓度的内毒素样品都和孵放前后有着明显的浓度差异。【3】同时,碱处理的3份高热原人血白蛋白制品,进行检测后均热原合格,符合我国的关于生物制品的规格和要求。

【参考文献】

【1】李军英. 生物制品中常用灭活剂的研究进展[J]. 中国生物制品学杂志, 2018, 31(09):117-120.

【2】耿军晓, 赵红星. 血液制品二次包装工艺分析与研究[J]. 中国包装工业, 2014(24):6-7.

【3】苏峰, 孔冬冬, 周海云,等. 血液制品中病毒去除和灭活方法概述[C]// 中国输血协会输血大会. 2014.

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