Galectin-2在妊娠期糖尿病患者中的表达及其与胰岛素抵抗的关系

禤文婷 陈丽霞 黎美金

摘要：目的  探讨半乳糖凝集素-2（Galectin-2）在妊娠期糖尿病（GDM）患者中的表达情况，分析其与胰岛素抵抗的关系及临床意义。方法  选择2018年1月～2019年12月在我院定期产检和住院分娩的GDM患者50例作为观察组，另选取我院同期健康孕妇35例作为对照组，比较两组血清和胎盘组织中Galectin-2 mRNA和蛋白的表达水平，并分析Galectin-1表达与胰岛素抵抗的关系。结果  GDM组血清中Galectin-2 mRNA相对表达量为（0.621±0.105），高于对照组的（0.152±0.089），差异有统计学意义（P<0.05）。GDM組胎盘组织中Galectin-2蛋白表达阳性率为90.00%，中表达占40.00%，高表达占30.00%，高于对照组的77.14%、20.00%、14.29%，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关分析显示，Galectin-2的表达水平与胰岛素抵抗指数呈正相关（r=0.605，P=0.043）。结论  Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盘组织中的表达增高，且与胰岛素抵抗密切相关，提示其可能参与妊娠期糖尿病的病理过程。

关键词：Galectin-2;妊娠期糖尿病;胰岛素抵抗

Abstract：Objective  To investigate the expression of Galectin-2 （Galectin-2） in patients with gestational diabetes （GDM）， and to analyze its relationship with insulin resistance and its clinical significance.Methods  50 patients with GDM who received regular check-ups and hospitalized deliveries in our hospital from January 2018 to December 2019 were selected as the observation group， and 35 healthy pregnant women during the same period in our hospital were selected as the control group，the expression levels of Galectin-2 mRNA and protein in serum and placental tissues of the two groups were compared， and the relationship between Galectin-1 expression and insulin resistance was analyzed.Results  The relative expression of Galectin-2 mRNA in the serum of the GDM group was （0.621±0.105）， which was higher than that of the control group （0.152±0.089），the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of Galectin-2 protein expression in placenta tissue of GDM group was 90.00%， medium expression accounted for 40.00%， high expression accounted for 30.00%， which was higher than 77.14%， 20.00%， 14.29% of control group，the difference was statistically significant （P<0.05）.Spearman correlation analysis showed that the expression level of Galectin-2 was positively correlated with insulin resistance index （r=0.605，P=0.043）.Conclusion  The expression of Galectin-2 in serum and placenta tissues of patients with gestational diabetes was increased， and it was closely related to insulin resistance， suggesting that it may be involved in the pathological process of gestational diabetes.

Key words：Galectin-2;Gestational diabetes;Insulin resistance

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指既往无糖尿病的孕妇在妊娠期间首次发生的糖代谢异常。GDM严重危害母婴健康，不仅可导致巨大儿、胎儿窘迫、产后出血等多种不良妊娠结局的发生，并显著增加孕妇及其子代罹患肥胖、糖尿病等代谢性疾病的风险[1]。GDM发病机制尚未阐明，目前普遍认为胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗是其发病的重要环节和特征。Galectin-2属于半乳糖凝集素（Galectins）家族成员，可通过糖识别结构域与β-半乳糖苷残基结合，参与细胞生长、分化和免疫反应等生物学过程。近年研究发现Galectins与糖尿病、高脂血症等代谢性疾病密切相关。Galectin-2在GDM患者中的表达及其作用的研究报道较少。基于此，本研究旨在探究Galectin-2在GDM患者血清和胎盘组织中的表达情况及临床意义，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选择2018年1月～2019年12月在南方医科大学附属东莞人民医院产检并住院分娩的GDM患者50例作为观察组，年龄23～39岁，平均年龄（28.89±2.91）岁;分娩孕周34～39周，平均分娩孕周（37.13±3.01）周;体重指数（BMI）19～26 kg/m2，平均BMI（22.51±1.52）kg/m2;初产妇22例，经产妇28例。另选取同期年龄、孕周相匹配的健康孕妇35例作为对照组，年龄21～38岁，平均年龄（27.35±4.11）岁;分娩孕周35～39周，平均分娩孕周（38.52±1.52）周;BMI 19～24 kg/m2，平均BMI（20.15±1.23）kg/m2;初产妇16例，经产妇19例。两组年龄、BMI、分娩孕周比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经南方医科大学附属东莞人民医院伦理委员会审核批准，所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。

1.2纳入及排除标准  纳入标准：①单胎妊娠;②观察组患者均符合2010年国际糖尿病与妊娠关系研究协会（IAPSG）制定关于GDM诊断标准：空腹血糖<5.1 mmol/L，餐后1 h血糖<10.0 mmol/L，餐后2 h血糖<8.5 mmol/L;其中1项达到或者超过上述界值，即可诊断为GDM。排除标准：既往糖尿病、先天性心脏病、肝炎、甲状腺功能异常或其他自身免疫性疾病者。

1.3方法  血液样本：在孕早期（8～12周）产检当天空腹采集静脉血，测定血糖和胰岛素水平，根据稳态模型法计算胰岛素抵抗指数;分离血清，置于-80 ℃冻存备用。胎盘样本：孕产妇分娩后取出胎盘，立即用生理盐水冲洗，近脐带附着处取组织2块，其中一份组织置于-80 ℃冻存备用，另一份组织加入10%中性福尔马林固定24 h，梯度脱水后石蜡包埋备用。RT-PCR法检测Galectin-2 mRNA表达：使用RNAiso Plus提取总RNA。使用RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA。PCR反应条件：94℃预变性5 min，94 ℃变性1 min，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共30个循环，72℃延伸10 min。PCR引物序列：Galectin-2（上游引物：5-GAAGATCACAGGCAGCATCG-3，下游引物：5-ACAGGTGATCTTCCCGTTGT-3）、β-actin（上游引物：5-AGAGCTACGAGCTGCCTGAC-3，下游引物：5-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3）。PCR产物经过1.5%的琼脂糖凝胶电泳后，采用凝胶分析仪扫描分析。免疫组化染色法检测Galectin-2蛋白表达：胎盘石蜡包埋组织切片经脱蜡、水化后，使用PBS磷酸盐缓冲液进行抗原修复;加入2% H2O2，室温孵育15 min;加入美国Abcam公司生产的小鼠抗人Galectin-2多克隆抗体（1∶500稀释），4 ℃孵育过夜;PBS漂洗3次，10 min/次;加入HRP标记羊抗小鼠二抗，室温孵育25 min，DAB显色。

1.4结果判读  由2名经验丰富的病理医师采用双盲法进行阅片。采用文献报道的评分方法[2]，结合阳性细胞比例（无=0，<10%=1，10%～50%=2，51%～80%=3，>80%=4）和染色强弱（无=0，弱=1，中=2，強=3）的乘积进行免疫反应评分（IRS），按照评分的分值判断为阴性（0～3分），低表达（4～6分），中表达（7～9分）和高表达（9～12分）。

1.5统计学方法  采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理。计量资料以（x±s）表示，采用t检验;计数资料以（n）表示，采用？字2检验;采用Spearman相关分析Galectin-2表达状态与胰岛素抵抗指数的关系;以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1两组Galectin-2 mRNA相对表达量比较  RT-PCR检测结果显示，GDM组血清Galectin-2 mRNA相对表达量为（0.621±0.105），高于对照组的（0.152±0.089），差异有统计学意义（t=13.171，P<0.05），见图1。

2.2两组Galectin-2蛋白相对表达量比较  免疫组化染色结果显示，Galectin-2蛋白主要表达于胎盘滋养叶细胞的细胞膜和细胞质，见图2。GDM组胎盘组织中Galectin-2蛋白表达阳性率为90.00%，中表达及高表达占比均高于对照组，差异有统计学意义（？字2=36.026，P<0.05），见表1。

2.3 Galectin-1表达与胰岛素抵抗的关系  GDM患者胎盘组织中Galectin-1蛋白的免疫反应评分与胰岛素抵抗指数呈正相关关系（r=0.605，P=0.043），见图3。

3讨论

GDM是妊娠常见的并发症，其发病率在不同地区、不同人群中存在较大差异，变化范围在9.3%～25.5%之间[3]。近年来，随着人们生活方式改变和高龄孕妇日渐增多，我国GDM的发病率有逐年增加的趋势。北京地区的流行病学调查显示，2005～2012年GDM的发病率从14.7上升至19.7%[4]。GDM临床过程复杂，容易造成多种不良妊娠结局，增加母婴远期心血管和代谢性疾病患病风险[5-8]。GDM孕妇产后5～16年内发展为糖尿病的累积发病率可高达36%，与孕期血糖正常的孕妇相比较，GDM孕妇未来发生糖尿病的几率增加7倍。因此，深入研究GDM的发病机制，寻找早期诊断的生物标志物具有重要意义。

GDM的病因和发病机制目前尚未完全阐明，GDM患者存在不同程度的胰岛素抵抗、胰岛素分泌不足和炎症反应状态[9]。Galectin-2是一种β-半乳糖苷结合蛋白，参与调节机体的炎症免疫反应、葡萄糖和脂肪代谢等多种生物学过程[10]，其中Galectin-2表达于多种炎症免疫细胞，通过诱导细胞迁移、激活和释放炎症因子发挥重要的免疫调节作用;Galectin-2参与葡萄糖和脂肪代谢过程，其基因多态性已被证实与高空腹胰岛素水平和心血管疾病发生风险密切相关。另外，Galectin-2可与淋巴毒素-α（LTA）相结合并调节LTA的表达，下调Galectin-2表达可降低LTA细胞外的水平，同时降低炎症反应和冠心病发生风险。本研究结果发现，GDM组血清Galectin-2 mRNA相对表达量高于对照组（P<0.05），说明将血清Galectin-2 mRNA表达作为GDM早期诊断生物标记物具有可行性。另外，GDM组胎盘中Galectin-2蛋白表达水平高于高于对照组（P<0.05），而且GDM患者胎盘组织中Galectin-2蛋白的免疫反应评分与胰岛素抵抗呈正相关（P<0.05），说明GDM患者胎盘组织中Galectin-2蛋白表达随着胰岛素抵抗程度的增加而升高，提示Galectin-2可能通过调控胰岛素抵抗参与GDM的发病，临床可通过靶向干预Galectin-2表达，减轻胰岛素抵抗，可能成为GDM药物治疗研究的新方向。 综上所述，Galectin-2在妊娠期糖尿病患者血清和胎盘组织中的表达增高，且与胰岛素抵抗密切相关，提示其可能参与妊娠期糖尿病的病理过程。

参考文献：

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[9]于成华，张硕.妊娠期糖尿病患者产后胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能变化及其影响因素[J].中国生育健康杂志，2020，31（3）：215-218.

[10]Hepp P，Unverdorben L，Hutter S，et al.Placental Galectin-2 Expression in Gestational Diabetes：A Systematic，Histological Analysis[J].Int J Mol Sci，2020，21（7）：2404.

收稿日期：2020-05-22;修回日期：2020-06-01

编辑/杜帆