转录共激活因子在肺癌组织中表达及其与患者预后的关系

田 佳 王 敏 刘英超

1.山东省聊城市第二人民医院病理科，山东聊城 252600；2.山东省聊城市第二人民医院检验科，山东聊城 252600

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，2022 年我国新发肺癌病例及新增肺癌死亡病例均处于较高水平[1]。非小细胞肺癌是最常见的肺癌病理类型，占比可达85%[2]。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）如不能早期诊断、早期治疗，一般预后较差。研究发现，转录共激活因子（transcriptional co-activator，TAZ）是Hippo 通路的下游效应分子，是Hippo 通路的主要成员，其在多个肿瘤组织中高表达，在促进癌细胞增殖、浸润中发挥了重要作用[3-4]。近年来，陈鹏等[5]研究发现NSCLC 组织中TAZ 蛋白呈高表达，参与了肺癌的发生、发展过程。其他研究者也认为TAZ高表达与肺癌发生、发展有关，但TAZ 表达对患者预后的影响，目前报道较少[6]。本研究旨在通过观察肺癌组织与癌旁组织TAZ 表达情况，探讨其与患者预后的关系，进一步探究肺癌发生、发展机制，为促进患者早期诊断及改善预后提供新的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集山东省聊城市第二人民医院2019 年1 月至12 月收治的118 例NSCLC 患者的癌组织及其配对癌旁组织标本。NSCLC 患者年龄32～77岁，平均（59.73±9.19）岁；男60 例，女58 例；腺癌77 例，鳞癌41 例；吸烟62 例，不吸烟56 例；中低分化90 例，高分化28 例；TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期73 例，Ⅲ期45 例；术后接受化疗患者58 例。

纳入标准：①行肺叶切除，术后病理明确为NSCLC；②手术切除组织标本保存完好；③临床资料完整；④知情同意并接受随访。排除标准：①合并其他肿瘤或继发性肺癌；②严重肝、肾功能损害或合并严重基础病；③术前进行放化疗及免疫治疗。本研究通过山东省聊城市第二人民医院伦理委员会审核批准[【2018】医伦审第（28）号]。

1.2 免疫组织化学染色

手术切除肺组织经福尔马林固定24 h，石蜡包埋进行切片，厚度4～6 μm。对组织切片常规进行脱蜡、水化处理，滴加H2O2浸泡10 min，枸橼酸缓冲液浸泡高压修复15 min，PBS 缓冲液冲洗3 次，然后滴加兔抗人TAZ 一抗（美国Abcam 公司，1∶100 稀释），放入4 ℃冰箱孵育过夜。次日PBS 缓冲液冲洗后，滴加辣根过氧化物酶标记二抗（美国罗氏公司，1∶1 000 稀释）室温下孵育60 min，DAB 染色5 min，最后用苏木精进行复染后封片。

1.3 免疫组织化学结果判读

由2 名经验丰富的病理医师双盲阅片，以高倍镜下（400 倍）下出现棕黄、棕褐色显色判定为阳性细胞。根据染色强度和阳性细胞占比的乘积判断TAZ表达情况：0～3 分为阴性，≥4 分阳性[7]。其中染色强度记分：无着色0 分、浅黄色1 分、棕黄2 分、棕褐色3 分；阳性细胞占比计分：0～10%记0 分；＞10%～25%记1 分、＞25%～50%记2 分；＞50%～75%记3分；＞75%～100%记4 分[8]。

1.4 随访

对患者进行随访，记录患者生存情况。患者总生存期（overall survival，OS）为患者诊断明确到死亡或终止随访日期之间的时间间隔，单位为月；随访期间患者死亡或截至2023 年6 月30 日随访终止。

1.5 统计学方法

应用SPSS 27.0 统计软件进行分析。计数资料采用例数和百分比表示，比较采用χ2检验；Kaplan-Meier 生存曲线和log-rank 检验分析NSCLC 患者预后情况；Cox 回归分析影响NSCLC 患者预后不良的危险因素。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺癌组织与癌旁组织TAZ 免疫组织化学表达情况

TAZ 主要表达于细胞质，见图1。118 例癌组织中70 例TAZ 阳性表达，占比59.32%；癌旁组织中41 例TAZ阳性表达，占比34.75%，癌组织中TAZ 阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（χ2=14.304，P＜0.05）。

图1 肺癌组织TAZ 表达情况（免疫组化染色，400×）

2.2 TAZ 表达与肺癌患者预后的关系

随访期间患者死亡72 例，总死亡率为61.0%；其中70 例癌组织TAZ 阳性表达患者死亡51 例，48 例TAZ 阴性表达患者死亡21 例，TAZ 阳性表达患者死亡率高于阴性表达，差异有统计学意义（χ2=10.142，P＜0.05）。Kaplan-Meier 生存曲线和log-rank 检验分析结果显示，TAZ 表达阳性患者总生存率低于表达阴性（χ2=10.393，P=0.001）。见图2。

图2 Kaplan-Meier 生存曲线分析TAZ 表达情况与NSCLC 患者预后的关系

2.3 临床病理特征与肺癌患者累计生存率的比较

肿瘤直径≥3 cm、淋巴结转移、术后复发、TNM Ⅲ期及TAZ阳性表达的患者累计生存率低于肿瘤直径＜3cm、淋巴结无转移、术后无复发、TNM Ⅰ+Ⅱ期及TAZ 阴性表达的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 临床病理特征与肺癌患者累计生存率比较

2.4 Cox 回归分析影响NSCLC 患者预后的独立危险因素

以NSCLC 患者预后情况为因变量，以患者肿瘤直径（≥3 cm=1，＜3 cm=0）、淋巴结转移（有转移=1，无转移=0）、TNM 分期（Ⅲ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0）、TAZ 表达（阳性=1，阴性=0）为自变量，建立Cox 回归分析模型，得出模型系数的Omnibus 检验表（-2 对数似然比=582.16，χ2=48.07，P＜0.01），表示模型成立。统计分析结果显示：TAZ 阳性表达、肿瘤直径≥3 cm、淋巴结转移、TNM Ⅲ期是影响患者预后的独立危险因素。见表2。

表2 Cox 回归分析影响患者预后的危险因素

3 讨论

目前放疗、化疗及手术治疗等多种手段已应用于肺癌，但肺癌如不能早期诊断，预后较差，5 年生存率也比较低[9-10]。研究表明，肿瘤的发生、发展及转移、浸润与多种细胞因子及信号传导通路有关[11-12]。因此，寻找与肺癌预后相关的新的生物学标志物，进而对改善患者预后提供理论支持和帮助，具有重要的意义。

TAZ 又称含WW 域转录调控因子，是Hippo 通路的主要成员和重要效应分子[13-14]。Hippo 通路在动物器官生长发育及再生过程中发挥着重要作用，并且在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用[15-16]。研究发现，TAZ 作为Hippo 通路重要组成及效应分子，在多个肿瘤组织中高表达，并通过与多种调控因子相互作用，在促进癌细胞增殖、浸润发挥了重要作用[17]。近年来，TAZ 表达与肺癌的相关研究也越来越多。Malik 等[18]研究发现，肺癌组织中TAZ 蛋白表达显著高于正常肺组织；Mui 等[19]认为Hippo-TAZ 与其他通路协同作用，是引起NSCLC 的重要分子机制，并且与较差的患者预后有关；张久荣等[20]研究发现TAZ 在NSCLC 中异常高表达，与患者的TNM 分期及淋巴结转移情况有关，认为TAZ 可能成为NSCLC 患者的诊断标志物及治疗靶点；周建宏等[21]通过免疫印迹法检测癌组织TAZ 蛋白，发现显著高于癌旁组织，认为TAZ 参与了肺癌的发生、发展。综上，多项研究结果表明，TAZ 在肺癌的发生和发展过程中发挥了重要作用，但针对TAZ 表达与NSCLC 患者预后关系的相关研究，报道较少[22-23]。

本研究通过收集NSCLC 患者的临床及病理资料，进行免疫组织化学实验观察癌组织与癌旁组织TAZ 表达，结果显示肺癌组织TAZ 阳性表达高于癌旁组织（P＜0.05）；TAZ 参与了肺癌的发生、发展，提示TAZ 高表达与肿瘤的生长、浸润、转移有关；通过分析TAZ 表达与患者预后的关系，结果显示，TAZ 阳性表达患者总生存率低于TAZ 阴性表达患者；Cox 回归分析结果显示，TAZ 表达阳性、肿瘤直径≥3 cm、淋巴结转移、TNM Ⅲ期是影响患者预后的独立危险因素。本研究进一步提示TAZ 参与了肺癌的发生、发展，是影响患者预后的独立危险因素。

鉴于TAZ 对肺癌发生、发展及预后的重要作用，针对TAZ 靶向治疗肺癌的相关研究已有文献报道。Cheng 等[24]研究证实NDFIP1 能够通过外泌体分选限制细胞TAZ 表达，进而抑制NSCLC 细胞增殖；徐萌博等[25]研究发现miR-185 能够通过靶向调控TAZ 基因，进而抑制非小细胞肺癌H1299 细胞增殖、迁移和侵袭；Papavassiliou 等[26]认为靶向YAP/TAZ 免疫检查点，抑制TAZ 活性，可以治疗NSCLC。相信随着研究的进一步深入，针对TAZ 靶向治疗肺癌的治疗方案能应用于临床，为更多的患者提供帮助，改善预后。

利益冲突声明：本文所有作者均声明不存在利益冲突。