高效液相色谱-四级杆/飞行时间高分辨质谱法检测保健食品中非法添加药物

吴竹莲 蔡甜

作者简介：吴竹莲（1988—），女，湖北襄阳人，硕士，实验师。研究方向：环境和食品安全检测。

摘 要：建立高效液相色谱-四级杆/飞行时间高分辨质谱法检测保健食品中非法添加药物西布曲明和酚酞的分析方法。通过保留时间对西布曲明和酚酞进行定性分析，通过标准曲线法对保健食品中西布曲明和酚酞进行定量分析。结果表明，2种药物标准品的溶液浓度与检测响应具有良好的线性关系，其相关系数（R2）均大于0.99，该方法简单、快速、准确，适合用于保健食品中非法添加物的筛查。

关键词：高效液相色谱；四级杆/飞行时间高分辨质谱法；保健食品；非法添加药物

The detection of Illegally Added Drugs in Health Food Products Using High-Performance Liquid Chromatography-Quadrupole/Time-of-Flight High-Resolution Mass Spectrometry

WU Zhulian， CAI Tian

（School of Chemistry and Chemical Engineering， Southwest University， Chongqing 400715， China）

Abstract： An analytical method for the detection of unlawfully added drugs， sibutramine and phenolphthalein， in health food products was established using high-performance liquid chromatography coupled with quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry. Qualitative analysis of sibutramine and phenolphthalein was conducted based on retention time， while quantitative analysis of these two drugs in health food products was performed using the standard curve method. The results showed that a strong linear correlation was observed between the concentrations of the standard solutions of the two drugs and the corresponding detection response， with correlation coefficients （R?） greater than 0.99. This approach is simple， rapid， and precise， indicating its suitability for the screening of illegally added substances in health food products.

Keywords： high-performance liquid chromatography; quadrupole/time-of-flight high-resolution mass spectrometry; health food products; illegally added drugs

在追求健康與形体美的时代背景下，减肥保健食品逐渐成为消费者日常生活中的重要选择。然而，部分不法商家为追求短期利益，违法添加西布曲明和酚酞等药物成分到减肥保健食品中，严重侵害了消费者的权益。西布曲明作为中枢神经抑制剂，长期摄入可能导致心率异常、血压波动，甚至引发严重的心脑血管事件，对消费者的生命安全构成极大威胁[1-2]。酚酞常作为泻药使用，但长期或过量摄入可能导致电解质紊乱、肠道功能失调，甚至增加患癌风险[3]。因此，对减肥保健食品中的非法添加药物进行准确、高效检测至关重要。

传统的检测方法，如高效液相色谱法[4-5]和拉曼光谱法[6]，在保健食品非法添加物的检测中虽有一定应用，但受限于其灵敏度和分辨率，难以满足对微量复杂成分的精确检测需求。相比之下，高效液相-高分辨质谱检测以其高灵敏度、高分辨率和快速分析的特点，在非法添加物检测领域展现出显著优势[7-8]。

该方法不仅能够实现对微量成分的准确检测，还能够获得分析对象的分子量和碎片离子信息，进而实现一次检测即可同时确证结构，为监管部门提供有力的技术支持。本文探讨了高效液相色谱-四级杆/飞行时间高分辨质谱法在定性定量分析减肥保健食品中西布曲明和酚酞方面的应用，可为减肥保健品里非法添加药物的检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

甲醇（LC-MS纯，上海麦克林生化科技有限公司）；乙腈（LC-MS纯，阿拉丁试剂有限公司）；甲酸（分析纯，Fisher Scientific）；氢氧化钠（电子级纯，Sigma-Aldrich）；西布曲明（分析纯，坛墨质检标准物质中心）；酚酞（分析纯，阿拉丁试剂有限公司）；异丙醇（LC-MS纯，Sigma-Aldrich）；水为超纯水。

Agilent 1290 infinity II超高效液相色谱仪；Bruker Impact II四级杆-飞行时间质谱仪，精天FA2004B万分之一分析天平；KQ5200B超声波仪。

1.2 实验条件

（1）液相色谱条件。色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；流动相：含0.1%甲酸的水溶液（A）和甲醇（B）；流速：

0.2 mL·min-1；进样量：2 μL；柱温：30 ℃。采用梯度洗脱方式，梯度变化如表1所示。

（2）质谱条件。采用电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式；电喷雾电压：4 500 V；雾化气压力：0.24 bar；干燥气流量：8.0 L·min-1；干燥温度：220 ℃；扫描范围（m/z）： 50～1 500。

1.3 标准溶液及校正液配制

（1）标准溶液配制。精确称取盐酸西布曲明、酚酞适量，用甲醇溶解并配成1 000 mg·mL-1的储备液，各取适量储备液，用甲醇稀释为50 μg·mL-1的混合溶液。取混合溶液适量，用甲醇逐级稀释成质量浓度为0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.25 μg·mL-1、

0.50 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1和5.00 μg·mL-1的系列标准溶液。

（2）甲酸钠校正液配制。异丙醇和水按1∶1混合并加入0.2%甲酸作为溶剂。取1 mL 1 mol·L-1 NaOH和99 mL溶剂混匀配制成10 mmol·L-1甲酸钠校正液。

1.4 實际样品处理

取适量市售样品，研细，准确称取1.000 g粉末，置于50 mL具塞离心管中，加入20 mL甲醇，涡旋1 min，超声提取10 min，10 000 r·min-1离心

5 min，上清液用0.22 μm微孔滤膜（有机相型）过滤，收集滤液，作为样品原液。

取1 mL样品原液到15 mL具塞离心管中，加入9 mL甲醇，涡旋1 min，超声提取10 min，

10 000 r·min-1离心5 min，上清液用0.22 μm微孔滤膜（有机相型）过滤，收集滤液作为样品待测液。

2 结果与分析

2.1 西布曲明和酚酞定性分析

按照上述色谱和质谱条件对西布曲明和酚酞标样（5 μg·mL-1）进行液质联合分析，得到总离子流谱图，实验数据采用Data Analysis 4.4处理。在50～

1 500质荷比范围内，通过高分辨全谱扫描模式，以精确质量数提取目标化合物，得到西布曲明和酚酞的保留时间分别为5.1 min和4.7 min（图1），此为二者定性的依据。分析二者的质谱图（图2和图3），如表2所示，西布曲明和酚酞的测量分子量与实际分子量偏差较小（≤5×10-6），同位素模式拟合小于50 mSigma[9]，表明该测试方法准确度高，可用于后续分析测试。

2.2 西布曲明和酚酞定量分析

分析一系列标准样品的测试结果，以目标物的浓度为横坐标（x），色谱峰积分面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，拟合校正曲线，建立回归方程，计算相关系数。实验结果如表3所示，在浓度为0.05 ～ 5.00 ?g·mL-1时，西布曲明和酚酞均呈现良好线性关系，相关系数R2大于0.99。

在空白样品中添加低浓度的西布曲明和酚酞，将信噪比（S/N）为3时的浓度定义为方法的检出限，信噪比为10所对应的浓度定为方法的定量限。经过实验，得到方法的检出限和定量限见表3。

2.3 实际样品检测

用本方法对实际样品进行测试分析，按定性分析数据处理方法未得到西布曲明和酚酞的信号，即表明该实际样品为阴性样品，西布曲明和酚酞含量可忽略不计。

3 结论

本研究建立了基于高效液相色谱-四级杆/飞行时间高分辨质谱仪检测减肥保健品中西布曲明和酚酞的定性定量分析方法，该方法简便快速，准确可靠，灵敏度高，并用于实际样品检测，未检出西布曲明和酚酞。

参考文献

[1]林春芳，孙音，林晓岚.减肥食品中非法添加西布曲明检测的研究进展[J].食品工业，2023，44（4）：260-263.

[2]储蓉，陈丽波，张斌，等.84批减肥类保健食品中非法添加化学物质的数据分析[J].中国现代应用药学，2020，37（16）：1973-1976.

[3]张宜，张秀娟.滥用泻药可致生命危险[J].首都医药，2005（15）：35.

[4]李静，李倚云，闻琍毓.HPLC法检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞和盐酸西布曲明[J]天津药学，2015，27（2）：17-18.

[5]王静文，黄湘鹭，曹进，等.超高效液相色谱法同时测定减肥类保健食品中非法添加25种药物[J].色谱，2014，32（2）：151-156.

[6]李想，谭丽丽，刘吉成，等.TLC原位拉曼光谱法快速检测减肥类保健食品中非法添加的四种成分[J].光谱学与光谱分析，2018，38（3）：830-836.

[7]徐晓楠，叶刚，张楠，等.液相色谱-串联质谱法测定减肥降脂通便类保健食品中38种非法添加药物[J].食品安全质量检测学报，2020，11（17）：6075-6085.

[8]段琼，马春艳，赵振霞，等.飞行时间高分辨质谱法分析红曲类食品中他汀类物质[J].河北师范大学学报（自然科学版），2024，48（2）：160-166.

[9]HOFFMANN T，KRUG D，BOZKURT N，et al.

Correlating chemical diversity with taxonomic distance for discovery of natural products in myxobacteria[J].Nature Communications，2018（9）：803.