HPLC-柱后光化学衍生法检测芝麻酱中黄曲霉毒素B1

基金项目：山西省青年科学研究项目（202203021212443）。

作者简介：李二冬（1989—），男，山西孝义人，硕士，工程师。研究方向：食品检测。

摘 要：本文建立了HPLC-柱后光化学衍生-荧光检测器测定芝麻酱中黄曲霉毒素B1的方法。结果表明，黄曲霉毒素B1在0.077 4～1.934 5 ng·mL-1线性关系良好，线性系数为0.999 9，加标回收率为100.81%～105.46%，相对标准偏差为0.48%，定量限为0.029 μg·kg-1，检出限为0.01 μg·kg-1。该方法的前处理过程简单方便，结果准确，可用于芝麻酱中黄曲霉毒素B1的批量快速检测。

关键词：高效液相色谱法；黄曲霉毒素B1；芝麻酱

Determination of Aflatoxin B1 in Sesame Paste by HPLC-Post-Column Photochemical Derivatization

LI Erdong

（Shanxi Inspection and Testing Center （Shanxi Institute of Standardization and Metrology Technology），

Taiyuan 030032， China）

Abstract： A method for the determination of aflatoxins B1 in tahini paste by HPLC-post column photochemical derivation-fluorescence detector was developed. The results showed that aflatoxins B1 had a good linear relationship between 0.077 4 ng·mL-1 and 1.934 5 ng·mL-1， the linear coefficient was 0.999 9， the standard recovery was 100.81%～105.46%， relative standard deviation was 0.48%， and the limit of quantition was 0.029 μg·kg-1. The detection limit was 0.01 μg·kg-1. The pretreatment process of this method is simple and convenient， the result is accurate， and it can be used for batch rapid detection of aflatoxin B1 in tahini paste.

Keywords： high performance liquid chromatography; aflatoxin B1; Sesame paste

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是一种真菌次级代谢物，能使人体或动物的免疫功能丧失，对人体和动物具有强烈致畸、致癌和致突变作用[1-4]。

近年来，芝麻酱的销售量逐渐攀升，而在市场上出现并使用的芝麻酱有的出自正规食品厂商，有的出自小手工作坊，质量参差不齐，有检出AFB1的风险。因此，检测芝麻酱中的AFB1就非常必要[5-8]。《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》（GB 5009.22—2016）（第三法）[9]中规定了高效液相色谱-柱后衍生法测定黄曲霉毒素的方法。基于此，本研究参照GB 5009.22—2016建立了HPLC-柱后光化学衍生，经荧光检测器测定芝麻酱中AFB1的分析方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

某品牌芝麻酱，购自某超市。

黄曲霉毒素B1标准品（96.726 μg·mL-1），A Chemtek Inc；氯化钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司；甲醇，乙腈均为色谱纯，迪马科技；实验用水为超纯水。

1.2 仪器与设备

LC-20A高效液相色谱仪（配备荧光检测器），日本岛津公司；XS204电子天平（精度0.1 mg），梅特勒托利多公司；MS105DU电子天平（精度

0.01 mg），梅特勒托利多公司；Mili-Q超纯水机；超声波清洗机，苏州纳森超声科技有限公司；免疫亲和柱，北京美正公司；0.45 μm微孔滤膜。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液配制

（1）标准储备溶液的配制。取经校准的10 mL容量瓶，准确吸取黄曲霉毒素B1标准品0.1 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成黄曲霉毒素B1标准储备溶液（967.26 ng·mL-1）。

（2）标准中间液配制。取经校准的10 mL容量瓶，准确吸取黄曲霉毒素B1标准储备液0.5 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成黄曲霉毒素B1标准中间液（48.363 ng·mL-1）。

（3）标准使用液配制。取经校准的25 mL容量瓶，准确吸取黄曲霉毒素B1标准中间液1 mL于其中，用甲醇定容至刻度，配制成为黄曲霉毒素B1标準使用液（1.934 5 ng·mL-1）。

（4）标准工作液配制。分别精密移取黄曲霉毒素B1标准使用液0.20 mL、0.25 mL、1.00 mL、

2.00 mL、3.75 mL和5.00 mL于5 mL容量瓶中，用流动相定容，得到浓度分别为0.077 4 ng·mL-1、

0.096 7 ng·mL-1、0.386 9 ng·mL-1、0.773 8 ng·mL-1、

1.450 9 ng·mL-1和1.934 5 ng·mL-1的系列标准工作液。

1.3.2 试样处理过程

取50 mL具塞离心管，准确称取质量约5 g（精确到0.001 g）的试样于其中，加20 mL 70%甲醇，涡旋混匀，于摇床振荡20 min，用玻璃纤维滤纸过滤，过滤后取上清液备用。

准确吸取上述过滤后的上清液4 mL于50 mL具塞离心管中，加入23 mL PBS溶液后摇匀。将在低温下保存的免疫亲和柱放至室温，弃去小柱内的液体，再将加入PBS溶液的全部样液分批次全部通过免疫亲和柱，再用20 mL水淋洗亲和柱，抽干亲和柱，最后取下亲和柱后加入2 mL甲醇洗脱，将洗脱液全部收集在试管中。用氮吹仪在50 ℃条件下将试管中的试液吹至近干后加入1 mL初始流动相，涡旋30 s，过0.45 ?m微孔滤膜，上机检测。

1.4 液相色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；检测器：荧光检测器；激发波长：360 nm；发射波长：440 nm；流动相：甲醇+乙腈（50+50）∶水=35∶65，等度洗脱；流速：1 mL·min-1；柱温：40 ℃；进样量：50 μL。

2 结果与分析

2.1 线性考察

分别将系列标准工作溶液按照1.4条件上机，以黄曲霉毒素B1浓度（x）为横坐标，测得的相应色谱峰峰面积（y）为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到曲线方程为y=232 398x+664.66，R2=0.999 9。结果表明，黄曲霉毒素B1在0.077 4～1.934 5 ng·mL-1呈现良好的线性关系。

2.2 准确性与精密度

分別准确称取9份阴性芝麻酱样品约5 g，编号为1～9，向1～3号试样中准确添加0.25 mL浓度为1.934 5 ng·mL-1的黄曲霉毒素B1标准使用液，4～6号试样中添加0.5 mL浓度为1.934 5 ng·mL-1的黄曲霉毒素B1标准使用液，7～9号试样中添加2.5 mL浓度为1.934 5 ng·mL-1的黄曲霉毒素B1标准使用液，按照1.3.2所述过程对样品进行前处理操作，按照1.4条件进行上机，可计算出该方法的加标回收率。由表1可知，芝麻酱中AFB1的回收率为100.81%～105.46%。

将添加2.5 mL浓度为1.934 5 ng·mL-1的黄曲霉毒素B1标准使用液的9号样品上机平行测定6次，考察精密度。由表2可知，相对标准偏差为0.48%。由此可见，该方法的准确性和精密度均符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[10]的规定，适用于芝麻酱中黄曲霉毒素B1的测定。

2.3 检出限和定量限

准确称取5 g阴性芝麻酱样品，加入0.08 mL浓度为1.934 5 ng·mL-1的黄曲霉毒素B1标准溶液，按照1.3.2所述方法进行样品前处理，并上机测定，色谱峰响应值大于3倍信噪比，由此可计算出检出限为0.029 μg·kg-1。方法的定量限为0.01 μg·kg-1。

3 结论

本研究参照GB 5009.22—2016建立了HPLC-柱后光化学衍生-荧光检测器测定芝麻酱中黄曲霉毒素B1的方法，经验证，使用批次的免疫亲和柱能实现对黄曲霉毒素B1的有效分离，经荧光检测器可以进行高灵敏度的定性定量。通过验证，发现此方法有着良好的线性关系，准确性和精密度也符合相关规定要求，检出限和定量限也满足相关检测要求，可用于快速批量检测芝麻酱中黄曲霉毒素B1。

参考文献

[1]徐梦文，王荣荣，王爱灵，等.食品中黄曲霉毒素B1与赭曲霉毒素A检测方法的研究进展[J].中国食品工业，2023（20）：81-84.

[2]李爱学，王鹏飞.基于电化学传感器检测农副产品黄曲霉毒素B1的研究进展[J].农业工程学报，2023，39（22）：258-269.

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[5]魏茂琪，蒋玉佳，龚娇，等.昆明市食品加工企业花生酱、芝麻酱加工过程卫生安全专项监测结果分析[J].中国初级卫生保健，2023，37（6）：90-94.

[6]赛平，崔瑞霞，宋润娜，等.QuEChERS净化法测定芝麻酱中黄曲霉毒素B1的含量[J].现代食品，2021（18）：

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[7]董靖，张潇，刘越，等.2种高效液相色谱仪测定芝麻酱中黄曲霉毒素B1的不确定度评定[J].食品安全质量检测学报，2020，11（7）：2190-2196.

[8]廖君.专项抽检：武汉5企业芝麻酱黄曲霉毒素超标[J].广西质量监督导报，2016（3）：7.

[9]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定：GB 5009.22—2016[S/OL].（2016-12-23）[2024-01-09].https：//www.doc88.com/p-

1953533855323.html.

[10]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S/OL].（2008-05-04）[2024-01-09].https：//www.doc88.com/p-5784428119240.html.