刺玫果不同提取物对Ⅱ型糖尿病大鼠影响实验研究

杜佳林， 顾晓颖， 包玉龙， 崔明昊， 刘 禾， 李显华， 宋达夫

(1.辽宁省中医药研究院，辽宁沈阳110034;2.辽宁中医药大学，辽宁 沈阳110032)

我们在临床应用刺玫根治疗糖尿病患者获得较好疗效的基础上，对刺玫果进行动物实验，采用高脂饲料喂养联合腹腔内一次性注射小剂量链脲佐菌素的方法，造成Ⅱ型糖尿病大鼠模型，初步观察了刺玫果3种不同提取物对实验性糖尿病大鼠血糖等多项指标的影响。现报道如下。

1 材料

1.1 受试药物 刺玫果正丁醇提取物(1号提取物)、刺玫果乙酸乙酯提取物(2号提取物)和刺玫果水提取物(3号提取物)，辽宁省中医药研究院药学室提供。参芪降糖颗粒，鲁南厚普制药有限公司，批号:0807515。

1.2 受试动物 清洁级♂性Wistar大鼠，体重100～120 g，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供，动物许可证号:SCXK(吉)2007-0003。

1.3 仪器设备 瑞特RightestTM血糖仪，华广生技股份有限公司。Eos Bravo Plus全自动生化分析仪，意大利产。JJ200型精密电子天平，常熟双杰测试仪器厂。

1.4 试剂 链脲佐菌素(STZ)，批号:081125，美国Sigma公司产品;瑞特血糖检测条，批号:1181071，华广生技股份有限公司提供;血清胰岛素试剂盒，批号:I615883，日本东朝株式会社提供;游离脂肪酸试剂盒(NEFA)，北京九强生物技术有限公司，批号:153186;糖化血红蛋白试剂盒(HBA1C)，北京九强生物技术有限公司，批号:08-1205;果糖胺试剂盒(FRU)，北京九强生物技术有限公司，批号:08-09169。

1.5 实验环境 辽宁省中医药研究院实验动物中心 许可证号:SYXK(辽)2007-0010。温度22～23℃ 湿度 55% ～60%。辽宁省中医药研究院中药药理实验室:国家中医药管理局三级实验室。

2 方法

2.1 高脂饲料的制备 在普通标准饲料中加入20%的脂肪(50%的猪油、50%的蛋黄粉)和20%的蔗糖。由饲料厂加工制作。

2.2 Ⅱ型糖尿病大鼠模型的制备 取Wistar大鼠，适应性饲养1周。随机取10只作空白对照组，喂普通标准饲料。余下大鼠喂高脂饲料，8周后，按30 mg/kg剂量一次性腹腔内注射链脲佐菌素(溶于0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液，pH 4.4)。48 h后测空腹血糖值和灌胃20%葡萄糖溶液(2 g/kg)后30、60、120 min的血糖值，即葡萄糖耐量。选择空腹血糖大于等于7.0 mmol/L或灌胃葡萄糖耐量试验后2 h血糖大于等于11.1 mmol/L的大鼠作为Ⅱ型糖尿病大鼠模型［6］。

2.3 分组给药 将造模成功上述糖尿病大鼠按血糖值分组，分为空白对照组、模型对照组、1号提取物组、2号提取物组、3号提取物组、参芪降糖颗粒组。除空白对照组给普通标准饲料外，其余各组继续给高脂饲料。空白对照组和模型对照组每天灌胃蒸馏水，其余各组开始灌胃给药，连续给药4周。

2.4 指标测试 灌胃给药期间每2周称体重、测摄食量、饮水量。给药4周后，禁食12 h，各组大鼠尾尖采血，测空腹血糖、空腹血清胰岛素、葡萄糖耐量及曲线下面积。腹主动脉采血，测糖化血红蛋白、糖化血清蛋白及游离脂肪酸含量。

3 结果

3.1 各组药物治疗后体重、摄食量、饮水量的比较

造模后大鼠摄食量、饮水量和尿量明显增加，体重明显下降，出现“三多一少”症状，见表1。给药2周内，个别大鼠死亡，推测由于胰岛素分泌功能下降，血糖没有得到及时控制，出现糖尿病酮症酸中毒而死亡。刺玫果不同提取物在给药二周及四周时摄食量和饮水量与模型组比较均有所改善。

表1 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型体重、摄食量、饮水量的影响(¯x±s，¯x)

3.2 各组药物治疗后空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)的比较

给药4周后，模型组大鼠空腹血糖值与空白对照组比较呈明显升高，两组相比差异有显著意义(P＜0.01)。而刺枚果乙酸乙酯提取物组空腹血糖值与模型组相比呈明显下降，两组相比差异有显著意义(P＜0.05)。

刺玫果不同提取物对高血糖模型大鼠血清胰岛素水平基本无改善，看出该实验性高血糖大鼠的胰岛细胞基本被破坏。胰岛细胞已经无法接受刺激增加胰岛素的分泌量。推测刺玫果提取物对糖尿病小鼠血糖水平的改善并不只依赖于刺激胰岛细胞而增加胰岛素分泌的作用机制。见表2。

3.3 各组药物治疗后葡萄糖耐量及其曲线下面积(ACU)的比较

给药4周后，模型组葡萄糖耐量及曲线下面积与空白对照组比较呈明显升高，两组相比差异有显著意义(P＜0.01)。而刺玫果乙酸乙酯提取物组葡萄糖耐量值与模型组相比呈明显下降的趋势，曲线下面积与模型组相比呈明显下降，两组相比差异有显著意义(P＜0.05)。见表3。

表2 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型FBG、FINS的影响(±s)

表2 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型FBG、FINS的影响(±s)

注:与空白对照组比较，△△P＜0.01;与模型对照组比较，※P＜0.05。

组别 剂量/(g药材/kg)动物数/个FBG/(mmol/L)FINS/(mmol/L)空白对照组- 10 3.89± 0.52 0.33±0.02模型对照组 - 10 10.08±7.68△△0.31±0.03 1号提取物组 9 9 12.36±8.54 0.28±0.02 2号提取物组 9 9 4.38±1.17※ 0.30±0.03 3号提取物组 9 9 10.44±8.31 0.28±0.05参芪降糖颗粒组 1.62(g/kg)9 7.83±5.46 0.32±0.06

表3 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型葡萄糖耐量及ACU的影响(¯±s)

表3 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型葡萄糖耐量及ACU的影响(¯±s)

注:与空白对照组比较，△△P＜0.01;与模型对照组比较，※P＜0.05。

组别 剂量/(g药材/kg)动物数/个0 min/(mmol/L)30 min/(mmol/L)60 min/(mmol/L)120 min/(mmol/L)ACU/(mmol/L)空白对照组 - 10 3.89±0.52 8.11±1.68 6.43±0.83 5.33±0.6512.52±1.53模型对照组 - 10 10.08±7.68△△ 25.62±4.10△△ 20.04±6.23△△ 16.33±6.19△△ 38.53±9.77△△1号提取物组 9 9 12.36±8.54 30.26±5.85 24.82±7.91 20.93±8.77 42.57±20.20 2号提取物组 9 9 4.38±1.17※ 23.31±5.89 16.13±7.25 12.26±5.99 27.88±12.51※3号提取物组 9 9 10.44±8.31 27.87±6.36 20.03±7.95 16.17±7.84 39.65±11.43参芪降糖颗粒组 1.62(g/kg) 9 7.83±5.46 28.77±4.49 24.27±4.97 22.52±5.92 41.22±16.51

3.4 各组药物治疗后糖化血红蛋白(HBA1C)、糖化血清蛋白(FIU)、游离脂肪酸(NEFA)的比较

给药4周后，模型组糖化血红蛋白、糖化血清蛋白含量与空白对照组比较呈明显升高，两组相比差异有显著意义(P＜0.001)。而刺玫果正丁醇提取物组、刺玫果乙酸乙酯提取物组、刺玫果水提物组和参芪降糖颗粒组的糖化血红蛋白含量均明显下降，与模型组比较差异均有显著意义(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05)。刺玫果乙酸乙酯提取物组、刺玫果水提物组糖化血清蛋白含量均明显下降，与模型组比较差异亦有显著意义(P＜0.05)。各组游离脂肪酸含量无明显改变。见表4。

4 讨论

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种具有遗传倾向的葡萄糖代谢和内分泌障碍继而引起全身性代谢紊乱的临床综合征，主要有Ⅰ型糖尿病(T1DM)和Ⅱ型糖尿病(T2DM)两种类型。针对Ⅱ型糖尿病的发病机制，目前很多西药有明显疗效，但是用于改善胰岛素抵抗的药物较少。西药有一定的局限性和较多的不良反应，若使用不当，常易引起严重的毒副作用。中药能够弥补西药的这些不足，并且能够从整体出发标本兼治。因此在治疗上具有很大的潜在市场。

辽宁省中医药研究院郭振武主任医师在临床治疗Ⅱ型糖尿病过程中发现，中药刺玫根对于Ⅱ型糖尿病患者的临床症状有明显的改善作用。基于此，我们从药材刺玫的不同部位作为切入点展开了药学和药理学研究。

表4 刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型HBA1C、FIU、NEFA的影响(¯x±s)

本实验研究了刺玫果不同提取物对II型糖尿病大鼠模型的药理作用，研究结果显示，刺玫果三种不同提取物9 g药材/kg剂量均有调整II型糖尿病大鼠模型摄食量、饮水量过高的作用趋势;刺玫果乙酸乙酯提取物9 g药材/kg剂量可以改善II型糖尿病大鼠模型的空腹血糖及葡萄糖耐量;刺玫果乙酸乙酯提取物9 g药材/kg剂量、刺玫果水提物9 g药材/kg剂量均可以降低II型糖尿病大鼠模型的糖化血红蛋白及糖化血清蛋白的含量;刺玫果正丁醇提取物9 g药材/kg剂量可以降低II型糖尿病大鼠模型的糖化血红蛋白的含量;有文献报道，刺玫果乙酸乙酯提取物的有效成分为黄酮类物质，黄酮类物质具有预防和治疗高血脂、血栓所致对心脑血管疾病的功效，刺玫果水提物和刺玫果正丁醇提取物的有效成分为三萜类物质，三萜类物质具有抗肝炎作用。但关于刺玫果的降血糖、改善糖化血红蛋白及糖化血清蛋白的作用未见报道。在试验期内刺玫果不同提取物对血清胰岛素水平的影响并不明显，无法改善糖尿病大鼠的血清胰岛素水平，这一方面说明模型大鼠的胰岛B细胞遭到链脲佐菌素的破坏;另一方面说明刺玫果不同提取物降低血糖、改善糖耐量的作用是通过调节机体糖代谢、促进肝糖原合成、减少肝糖原分解引起的，而非通过刺激胰岛B细胞分泌胰岛素来作用的。本研究是对刺玫果的初步探讨，关于刺玫果治疗糖尿病的药理作用机制有待于进一步研究。

［1］南京中医药大学.中药大辞典(上册)［M］.上海:上海科学技术出版社，2006:3，1837-1838.

［2］黑龙江省药品监督管理局.黑龙江中药材标准［S］.2001:114.

［3］江苏新医学院.中药大辞典(上册)［M］.上海:上海科学技术出版社，1985.

［4］俞作仁，王文莉，吕娟涛.刺玫果化学成分及药理作用研究进展［J］.中草药，2002，33(2):188-189.

［5］王 群，陈雅研.山剌玫果研究进展［J］.中国中药杂志，1997，22(3):132-133.

［6］何清华，周迎生，王 征，等.2型糖尿病大鼠模型制备的影响因素及其特点［J］.中国实验动物学报，2007，15(6):426.