高效液相色谱法测定米诺地尔搽剂中米诺地尔的含量

范玉峰 胡守莲

1 河南省信阳职业技术学院附属医院（464000）

2 河南省信阳市食品药品检验所（464000）

米诺地尔搽剂是信阳职业技术学院附属医院的自制制剂，临床外用治疗斑秃[1]、雄激素性脱发[2]等常见病症。通过对现有文献[3-5]的调研发现，米诺地尔的含量测定方法多为紫外分光光度（UV）法。为了更有效、快速、准确的控制产品质量，本试验应用准确度较高的高效液相色谱法检测米诺地尔搽剂中米诺地尔的含量，结果显示此方法快速、操作简便、分离效果好，具有广泛的推广价值，现报道如下。

1 仪器与试剂

日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A可进紫外检测器，C-R6A色谱数据处理机。

甲醇为一级色谱纯，水为纯化水，其他化学试剂均为分析纯。米诺地尔对照品（中国生物药品检定所，批号080429618），米诺地尔（江苏金坛市天华化工新技术研究所，批号 080621，药用规格），米诺地尔搽剂 （河南省信阳职业技术学院附属医院制剂室，20080421、20080511、20080624）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（Nova-PaKC18色谱柱 150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（70∶30）；流速：1.0mL/min；检测波长：285nm；柱温：室温；进样体积：10μL。在此色谱条件下，测得米诺地尔对照品，米诺地尔搽剂样品色谱图，见图1。在图1中，米诺地尔保留时间约9.5min，理论板数7500，与其相邻峰的分离度＞1.5。

2.2 对照品溶液的制备

对照品溶液：精密称取105℃干燥至恒重的米诺地尔对照品10mg，用甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，精密量取稀释液1mL，置100mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得米诺地尔对照品储备液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取样品5mL，置100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取稀释液1mL，置100mL容量瓶中，用甲醇定容置刻度，摇匀，即得供试品溶液。

图1 色谱图

表 1 精密度试验结果

2.4 线性关系考察

精密量取该对照品储备液适量，用甲醇稀释成2.5、5、7.5、12.5、17.5、20mg/L系列浓度样品，分别取10μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以峰面积均值X（n=3）对进样浓度Y（mg/L）线性回归，得方程：Y=18.838X-0.296，r=0.9999。实验证明，米诺地尔在2.5～20mg/L范围内浓度与峰面积比呈现良好的线性关系。以最低浓度峰与基线噪音峰比值为1∶3倍计算，测得最低检出浓度为0.5mg/L。

2.5 精密度试验

分别取线性试验项下的供试品储备液，用流动相甲醇配成浓度分别为5、15、20mg/L标准溶液，在1d内分别重复进样5次，分别于1d内测定，计算得日内RSD（n=3）分别为1.67%、1.73%、1.51%。连续5d测定，计算得日间RSD（n=3）分别为2.01%、1.66%、1.70%。重现性良好，结果见表1。

2.6 稳定性试验

取浓度为125μg/mL的对照品溶液和128μg/mL的供试品溶液，密封室温放置4、8、12、24h后进样测定，米诺地尔含量RSD分别为1.77%和1.90%，表明溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号样品，精密称取5份，按上述方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定米诺地尔搽剂中米诺地尔的含量，结果米诺地尔平均含量为98.2%，其RSD=1.83%（n=5）。

2.8 回收率试验

精密称取米诺地尔对照品按米诺地尔搽剂处方制备5份回收样品。按样品测定项下方法测定含量，求得平均回收率为99.5%，RSD为1.85%。

2.9 样品测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录米诺地尔色谱峰面积，外标法计算含量。样品含量应为标示量的90%～110%。结果5批样品中米诺地尔含量分别是95.4%、96.3%、100.8%、102.3%、100.3%。

3 讨 论

米诺地尔具有扩血管、增加局部血供作用，能刺激毛囊上皮细胞的增殖与分化，能通过拮抗细胞内钙离子通道，抑制表皮成长因子生成；最终促使毛发生长[6]。因此，米诺地尔仍是目前治疗各种原因引起脱发的主要手段。因此，严密监测米诺地尔产品的含量对于患者用药安全具有重要意义，而随着科学技术的发展，米诺地尔的定量方法也可由原质量标准中的分光光度法提高为高效液相色谱法。此方法能够更加严格控制产品质量，保证药品的安全性、有效性。随着高效液相色谱仪的普及，此方法亦可作为药品生产的常规检验方法[7]。本次试验结果证明，检验用溶剂和辅料成分对米诺地尔的测量没有干扰，表明本法专属性强，操作简单，结果准确可靠，可满足米诺地尔搽剂中米诺地尔的含量测定的要求。故本法可作为米诺地尔搽剂质量控制的有效测定方法。

[1]许岚,杨新建.2%米诺地尔搽剂治疗斑秃临床观察[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2009,8(2):104.

[2]陈声利,孙建方.米诺地尔治疗脱发的药理与临床研究[J].国外医学皮肤性病学分册,2004,30(5):276-278.

[3]郭燕萍,陈珍凤,郑基蒙.复方米诺地尔溶液中米诺地尔的含量测定[J].中国临床药学杂志,2005,14(3):52-53.

[4]莫玉芳,叶延武.紫外分光光度法测定米诺地尔洗剂中米诺地尔的含量[J].广东药学,2004,14(5):18-20.

[5]周敏,顾宜,张三奇,等.氮酮对人参皂苷Rg1和米诺地尔透皮吸收的影响[J].第四军医大学学报,2004,25(10):958-960.

[6]Han JH,Kwon OS,Chung JH,et al.Effect of minoxidil on proliferation and apoptos is in dermal papilla cells of human hair follicle[J].J Dermatol Sci,2004,34(2):91-98.

[7]康自华,阳小成,陈婷.高效液相色谱法在药物分析中的应用[J].广东微量元素科学,2006,13(8):18-22.