紫外可见分光光度法检测聚维酮K30中的肼

谭冬梅 张育胜 段仙绒

（1.浙江全金药业股份有限公司，浙江 杭州 310019；2.西安科力康医药科技有限公司，陕西 西安 710000）

肼是一种剧毒物质，同时也是一种比较强的还原物质，聚维酮K30中的肼来源于其偶氮类引发剂，偶氮类引发剂也是毒性物质，因此检测并控制聚维酮K30中肼的含量，有助于提高聚维酮K30的安全使用，提高以聚维酮K30为辅料药品的稳定性，保证人民群众的用药安全。目前，我国药典尚未要求对聚维酮K30中的肼进行检测和控制，而《欧州药典》和《美国药典》对聚维酮K30中的肼采用薄层色谱法，样品在薄层色谱上展开后，以水杨酸嗪为对照品，与肼的显色色斑目视比色，限量为不得过百万分之一，此法只能作限量判定，而不能作定量检测，且分析过程中用到甲醇，甲苯等强毒性试剂，本文尝试使用紫外分光光度法检测此样品中的肼，分析快速准确，重现性较好，且能定量分析，灵敏度高，同时避免了使用强毒性试剂，效果较好。

1 主要仪器与试剂

TU-1810紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）

对二甲氨基苯甲醛，盐酸，95％乙醇，硫酸肼（均为分析纯），聚维酮K30（河南博爱新开源制药有限公司，批号：3DY101229086）

原理：样品中的肼与对二甲氨基苯甲醛作用，生成对二甲氨基苄连氮，在酸性条件下，形成醌式结构的黄色化合物，在457nm处有最大吸收，在测定范围内黄色深度与肼含量成正比，可以定量测量。

2 标准溶液的配制

肼标准贮备溶液：称取0.4060g硫酸肼（N2H4·H2SO4），加水溶解，并用水稀释为1000mL。此溶液1.0mL含100ug肼。

肼标准溶液：吸取1.0mL肼标准贮备溶液，用水稀释为100mL，此溶液为1.0μg/mL肼标准溶液，此溶液应临用新配。

对二甲氨基苯甲醛溶液：称取4.0g对二甲氨基苯甲醛，溶于200mL 20％乙醇及15mL盐酸中，存放于棕色瓶中。

3 波长的选择

（1）取5.0mL肼标准溶液（1.0μg/mL），相当于5.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀，5min后，以相同试剂为空白，上机作光谱扫描。

（2）称取1.0g K30，加适量水溶解，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀5min后，以除显色剂外的相同量的样品和试剂为空白，上机作光谱扫描。

（3）称取1.0g K30，加适量水溶解，加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀，5min后，以除显色剂外的相同量的样品和试剂为空白，上机作光谱扫描。扫描如图1：

图1 波长扫描

扫描结果显示：肼经显色反应后，在457nm处有最大吸收，且无其它吸收峰影响，故以此波长为检测波长。

4 时间扫描

取5.0mL肼标准溶液（1.0μg/mL），相当于5.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀后，以相同试剂为空白，在457nm作时间扫描。

图2 时间扫描

可见自开始扫描至60min期间吸光度一直稳定，可以在此时间段内测定（本试验未对60min后的稳定性作考察）。

5 盐酸量对吸光度的影响

于6支25mL容量瓶中各加入0.1860g对二甲氨氨苯甲醛（相当于10mL显色剂中的对二甲氨基苯甲醛）、6.8mL乙醇（10mL显色剂中含有1.8mL，另加5mL）和5.0mL肼标准溶液（1.0μg/mL），分别加入0.0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，0.9mL盐酸，用水稀释至25mL，摇匀，放置5min，以相应量的试剂为各自空白（6个空白），在457nm检测吸光度，得如表1的数据。

表1 盐酸的量对吸光度的影响

可见，加入的盐酸量在0.2～0.8mL间吸光度A随盐酸量增加而增大，超过0.8mL，则有下降趋势，盐酸量在0.6～0.9mL范围内的A值相对稳定。盐酸可以加入于显色剂溶液中，随显色剂的加入一起进入待测溶液中。按4.0g对二甲氨基苯甲醛，溶于200mL 20％乙醇及一定量浓盐酸中，此盐酸的加入量应在12.9～19.4mL之间，本文取15.0mL。

6 显色剂量的选择

称取一定量对二甲氨基苯甲醛，各溶于6.8mL乙醇及0.7mL盐酸中，加入5.0μg肼，用水定容至25mL，以相应量的试剂为各自空白（7个空白），放置5min在457nm检测吸光度，得如表2的数据。

表2 显色剂的量对吸光度的影响

可见对二甲氨基苯甲醛溶液取10mL时，A有最大值。

7 乙醇量对吸光度的影响

取5.0mL肼标准溶液（1.0μg/mL），相当于5.0μg肼，加入不同量乙醇，加10mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀，以相应量的试剂为各自空白，5min后在457nm检测吸光度，数据如表3。

表3 乙醇的量对吸光度的影响

可见乙醇量在5mL时吸光度已经趋于稳定。

8 标准曲线

取一系列肼标准溶液，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀，5min后，在457nm检测吸光度.结果如表4。

表4 标准曲线系列

用上述数据进行线性拟合，得图3。

图3 标准曲线

可见本法中，肼在0～20μg范围内有良好的线性，相关系数达到0.9994（本文未做20μg以上的线性）。

9 样品检测及回收率实验

样品组：于6个25mL容量瓶中精确称取1g K30样品，加适量水溶解，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀。5min后，以除显色剂外的相同量的样品和试剂为空白，在457nm检测吸光度。

回收率实验：于6个25mL容量瓶中精确称取1g K30样品，加适量水溶解，加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀。5min后，以除显色剂外的相同量的样品和试剂为空白在457nm检测吸光度。

对照样：取25mL容量瓶加入2.0μg肼，加入5.0mL乙醇，加10.0mL显色剂，用水稀释至25mL，摇匀。5min后，以相同量试剂为空白，在457nm检测吸光度。

经计算得如表5的数据。

表5 样品检测结果及回收率实验

样品中肼检测结果的相对标准偏差RSD为3.7％，可见此法有较好的重现性和回收率。

10 讨论

（1）通过上述实验，此法对于聚维酮K30中肼的检测优于薄层色谱法，能准确定量，重现性好。

（2）对于日常检测，可以不做标准曲线，而采用与样品中肼含量相近的肼标准溶液（须在线性范围内）作单点对照。

［1］GB 18061-2000.水源水中肼卫生标准［S］.

［2］中国药典2010年版二部［S］.2010：294.

［3］欧洲药典EP5.0［S］.2005：1999.