黄芪保心汤对急性心肌缺血大鼠的干预作用

曹 敏 王福波 于 玲 王清华 尚 云

1上海中医药大学附属龙华医院（上海200032）

2上海中医药大学（上海200000）

3上海市浦东新区光明中医医院（上海200000）

中医药防治冠状动脉粥样硬化性心脏病 （CHD）有一定作用。以往研究表明，中药复方黄芪保心汤可有效清除自由基［1］、提高缺血心肌中降钙素基因相关肽（CGRP）水平［2］、改善内皮细胞功能［3］等，而起到保护心肌的作用。本课题在原有实验的基础上，探讨黄芪保心汤抗心肌缺血的疗效和作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠48只，体质量（230±20）g，由上海中医药大学实验动物中心提供。

1.2 药物及试剂 黄芪保心汤：由黄芪30g，丹参15g，白芥子15g，胆南星 12g，蒲黄 12g，水蛭 12g，三七 3g，山楂 15g 组成，药物在上海中医药大学中药学院加工制备，相当于含生药1.5g/mL。复方丹参滴丸：天津天士力制药股份有限公司生产，25mg/丸。

1.3 主要仪器 DH-150型动物人工呼吸机，浙江大学医学仪器厂。Powerlab 8/30生理记录仪，AD Instrument，澳大利亚。戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F2008117），配成3%水溶液。肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）、一氧化氮（NO）试剂盒均购于南京建成生物工程有限公司提供。

1.4 分组和给药 实验前先进行动物筛选，心电图检查无异常者进入实验。将48只大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、复方丹参滴丸组、黄芪保心汤组 （每组12只）。黄芪保心汤组以1mL/100g灌胃，复方丹参滴丸组将滴丸按300mg/kg用量比例用饮用水融化，1mL／100g灌胃，假手术组和模型组以lmL/100g生理盐水灌胃，各组均每日给药1次，共14d。

1.5 模型制备 大鼠心肌缺血模型制备 最后1d灌胃后30min除假手术组外各组均行冠脉结扎。用3%戊巴比妥钠（45mg/kg）行腹腔注射麻醉大鼠，用18号静脉留置针行气管插管，连接动物呼吸机行人工呼吸 （呼吸比为1∶2，潮气量20~22mL/min），四肢皮下连接心电图电极，记录Ⅱ导联心电图。胸骨左侧剃毛，于剑突上1.0cm，旁开约0.5cm切开皮肤，逐层钝性分离皮下组织、肌肉，剪断第3根肋骨，剥离心包膜暴露心脏，在动脉圆锥和左心耳之间，左心耳下方约1～2mm，用0/5号带线缝合针，进针深度控制在0.1cm左右，宽度为0.1～0.2cm之间结扎冠状动脉左前降支，结扎。结扎后迅速清除胸腔内多余血液，观察心电图变化，以心电图J点明显抬高（>0.1mV）并稳定15min以上，心尖部心肌呈灰白色为模型制备成功标志。假手术组用同样大小的带线缝合针从左心耳下缘右侧进针。从肺动脉圆锥左侧出针，进针深度及宽度同上，但缝合针不打结，其余操作同上。1.6 大鼠肢体Ⅱ导联心电图 PowerLab生物信息采集系统记录大鼠心电图Ⅱ导联结扎前后J点位移变化（mV）。

1.7 标本采集与检测 冠状动脉结扎60min后，腹主动脉取血，5mL放入普通试管中，立即于4℃，3000r/min离心10min，分离上清，血清于-20℃保存，留待测血清CK、LDH、AST、NO含量。

1.8 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件进行数据统计分析。所有资料均以）表示。符合正态分布的多组样本间比较采用oneway ANOVA检验；不符合正态分布的均数比较用非参数检验。所有检验均以P＜0.05作为显著性检验标准。

2 结 果

2.1 大鼠一般情况 实验大鼠共48只（每组12只），因手术意外死亡（结扎后严重心律失常或灌流过程中死亡）的有5只，死亡率约10.4%。其中假手术组无死亡，模型组1只，复方丹参滴丸组2只、黄芪保心汤组2只。

2.2 各组结扎前后J点位移变化 结扎前，各组心电图J点均无显著差异（P＞0.05），结扎后，模型组与假手术组比较J点显著抬高（P＜0.01），与模型组相比，在结扎后各时间点，各治疗组均优于模型组（P＜0.01）。与复方丹参滴丸组相比较，在结扎后各时间点，黄芪保心汤组在 10、30、60min 降低明显（P＜0.05），但在20min两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 各组血清CK、LDH、AST含量 模型组与假手术组比较心肌酶显著升高（P＜0.01），与模型组相比，各治疗组心肌酶水平均低于模型组（P＜0.01）。与复方丹参滴丸组相比较，黄芪保心汤组CK、LDH水平降低明显（P＜0.05），而AST两组比较无统计学差异（P＞0.05）。 见表 2。

表1 各组结扎前后心电图J点位移变化

表1 各组结扎前后心电图J点位移变化

与模型组比较*P＜0.01；与复方丹参滴丸组比较，△P＜0.05。下同。

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表2 各组大鼠CK、LDH、AST的比较

表2 各组大鼠CK、LDH、AST的比较

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2.4 血浆NO含量 见表3。模型组血浆NO与各组比较，显著降低（P＜0.01）；但假手术组、复方丹参滴丸组、黄芪保心汤组各组间无显著差异（P＞0.05）。

表3 各组血浆NO含量 （umol/L

表3 各组血浆NO含量 （umol/L

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3 讨 论

黄芪保心汤由黄芪、丹参、生蒲黄、自芥子、胆南星、水蛭、三七、山楂组成，具有益气活血化痰之功效。药理研究表明，黄芪中黄芪皂苷能改善心肌能量代谢，保护细胞结构特别是线粒体结构，提高细胞内SOD活性，减轻氧自由基对心肌细胞膜的损伤，从而增强心肌收缩力，改善心肌缺血［4-6］；而丹参具有抗血小板聚集、抗血栓形成、调脂、改善冠脉循环、抗氧化及抗动脉粥样斑块形成等作用［7-8］，近来报道丹参还可抑制心肌缺血时的细胞凋亡［9］；蒲黄也具有增加冠脉流量、降低心肌摄氧率和心肌耗氧量、限制心梗范围、抗血小板聚集等作用［10-11］；白芥子水解物能刺激胃黏膜，反射性引起支气管分泌增加而发挥祛痰作用［12］；水蛭的有效成分水蛭素，有防止动脉粥样硬化的作用；三七总皂苷通过抑制自由基的生成，起保护心肌缺血损伤，具有非常明显的抗血小板聚集作用；山楂可显著增加冠脉血流量，降低心肌氧耗量和耗氧指数。

大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型中，J点的位移值可视为心肌缺血模型成功的一个重要指标，J点上升或下降0.1mV即可视为心肌缺血［13］。有研究表明，缺血30min时，ECG的改变最为明显［14］。本实验在进行造模时，发现大鼠冠脉结扎后10min，心电图J点即发生明显抬高。模型组在缺血30min左右时出现明显的J点升高，可达0.1mV以上，甚至S-T段与T波融合成抛物曲线。黄芪保心汤组对这种改变有明显改善作用，与模型组、复方丹参滴丸组比较均有意义。

血管内皮细胞通过释放NO松驰血管平滑肌和抑制内皮细胞增殖，同时释放内皮素（ET）收缩血管和促使内皮细胞增殖。在病理情况下，NO释放减少和内皮素释放增加，可导致血管舒缩功能失调、血小板凝聚和内皮细胞增殖，是引起一系列疾病的基础。调节血管舒缩功能（NO），可从多方面发挥其对心肌缺血性损伤的保护作用，减轻心肌的缺血性损伤，避免心肌细胞不可逆性坏死。本实验研究表明，黄芪保心汤可升高血浆NO水平，同时能降低心肌酶水平，说明黄芪保心汤对缺血性心脏病有一定的疗效，可能与提高血浆NO水平有关。

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