气相色谱法测定葛根素衍生物有机溶剂残留量*

逯素珍，戴淑琴，宋 敏

(1.宁夏第五人民医院二部，银川 753000； 2.宁夏石嘴山市第一人民医院，石嘴山 753000 ； 3.陕西中医学院，咸阳 721046)

葛根素衍生物是以葛根素为原料合成的药物，用于治疗心脑血管病，由于在合成过程中引入了乙醇、乙酸乙酯和吡啶3种有机溶剂，从临床用药的安全性角度考虑，需对本品进行有机溶剂残留量的测定[1]。

1 仪器与试药

Agilent 6890 N气相色谱仪，带FID检测器；Agilent 7694型顶空自动进样器，Agilent chemstation工作站。乙醇、乙酸乙酯、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺为色谱纯。葛根素衍生物样品(陕西中医学院药学系自制，批号100403、100425、100508)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱(30 mm×0.53 mm)，载气：N2；流速：2.0 ml/min；柱温：40 ℃保持3.5 min，再以15 ℃/min升至180 ℃保持5 min；进样口温度：200 ℃；检测器温度：250 ℃；进样量：1 ml；分流比:10∶1；瓶温：120 ℃；定量环温度：130 ℃，传输管温度：140 ℃。

2.2溶液的制备

2.2.1混合对照品溶液的制备 精密称取乙醇1.001 6 g、乙酸乙酯1.006 3 g、吡啶0.042 8 g分别置于100 ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液备液；取2.5 ml于50 ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得上述3种试剂的混合对照品溶液。

2.2.2对照品溶液的制备 精密称取乙醇1.001 6 g、乙酸乙酯1.006 3 g、吡啶0.042 8 g分置于3个不同的100 ml量瓶中，分别用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，再分别取2.5 ml于3个不同的50 ml量瓶中，分别用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得3种试剂的对照品溶液。

2.3专属性试验 按上述色谱条件，分别精密量取N,N-二甲基甲酰胺、混合对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液各5 ml，置顶空瓶中，立即密封，在120 ℃恒温平衡30 min后进样，色谱图见图1。

1.乙醇 2.乙酸乙酯 3.吡啶

2.4线性关系试验 分别量取混合对照品溶液储备液0.1、2.0、2.5、3.0和10.0 ml，置50 ml量瓶中，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液的系列浓度，各精密量取5 ml，置顶空瓶中，按上述色谱条件检测，分别以各色谱峰面积为纵坐标(Y),以各自的浓度(μg/ ml)为横坐标(X)，按最小二乘法进行线性回归，结果见表1。

表1 回归方程与线性范围试验结果

2.5精密度试验 精密量取上述混合对照溶液6份各5ml，分别置6个顶空瓶中，按上述色谱条件检测各对照溶液峰面积，并分别计算RSD，结果乙醇、吡啶、乙酸乙酯的RSD分别为1.0%、1.5%和1.3%；试验结果表明上述3种对照溶液精密度均良好。

2.6检测限试验 取对照品溶液，用N,N-二甲基甲酰胺稀释信噪比3∶1时，测出3种对照溶液的检测限为：乙醇0.012 μg/ml、吡啶0.02 μg/ml、乙酸乙酯0.025 μg/ml。结果表明，混合对照溶液中3种溶剂的浓度均高于检测限，说明上述检测方法是可靠的。

2.7定量限试验 取对照品溶液，用N,N-二甲基甲酰胺稀释信噪比10∶1时，测出3种对照溶液的定量限为：乙醇0.036 μg/ml、吡啶0.06 μg/ml、乙酸乙酯0.075 μg/ml。结果表明，混合对照溶液中3种溶剂的浓度均高于定量限，说明上述检测方法是可靠的。

2.8回收率试验 取批号为100403的样品约0.5 g共3份，精密称定，分别置3 个顶空瓶中，再精密量取80%混合对照品溶液5 ml，分别置上述3 个顶空瓶中，密封瓶口，作为80%回收的供试品溶液；取批号为100403的样品约0.5 g共3份，精密称定，分别置3 个顶空瓶中，再精密量取100%混合对照品溶液5 ml，分别置上述3 个顶空瓶中，密封瓶口，作为100%回收的供试品溶液；取批号为100403的样品约0.5 g共3份，精密称定，分别置3 个顶空瓶中，再分别精密量取120%混合对照品溶液5 ml，置上述3 个顶空瓶中，作为120%回收的供试品溶液。 以精密度试验中混合对照品溶液作对照；按规定色谱条件测定回收率，记录色谱图，按外标法以峰面积计算回收率，结果乙醇、吡啶、乙酸乙酯的平均回收率分别为99.3%、98.8%和99.1%，由试验数据可知，该方法的回收率良好。见表2。

表2 回收率试验结果

2.9残留溶剂测定 分别取批号为100403、100425、100508的样品各约0.5 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入空白溶液5 ml，密封瓶口，作为供试品溶液。 依照上述色谱条件下，连续进样，测定结果见表3。结果3批样品残留溶剂均符合规定。

表3 葛根素衍生物残留溶剂测定结果

3 讨论

上述3种溶剂能与N,N-二甲基甲酰胺任意比互溶，葛根素衍生物在水中的溶解度小，本试验采用N，N-二甲基甲酰胺作为残留溶剂测定用的溶剂，结果表明完全能满足残留溶剂限度检查的要求，且不干扰待测溶剂的测定。

本试验待测溶剂为3个，数量虽少，但极性方面差异较大，选用中极性色谱柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚氧硅烷为固定液的毛细管色谱柱，并采用顶空进样系统程序升温法，结果各溶剂分离较好。

通过对3 个温度(100、120和140 ℃)进行试验，发现吡啶峰面积变化不大，而乙醇和乙酸乙酯的峰面积随温度升高明显增大，故选择120 ℃作为平衡温度。

对顶空瓶的平衡时间(20、30和40 min)进行试验，结果乙醇、乙酸乙酯30 min后峰面积变化不大，但30 min比20 min峰面积响应值明显增大；吡啶20 min与30 min峰面积变化不大，但40 min后峰面积反而变小。所以选择30 min作为平衡时间。

1 中国药典.二部.2005：附录54