公猪精液的保存三法

2011-08-15 00:44于长春
中国猪业 2011年10期
关键词:保温瓶超低温枣庄市

于长春 韩 慧 陈 芳

(1山东省枣庄市台儿庄区涧头集镇农业综合办公室,山东省枣庄市 277415;2山东省枣庄市山亭区农业局,山东省枣庄市 277200)

公猪精液的保存三法

于长春1韩 慧2陈 芳2

(1山东省枣庄市台儿庄区涧头集镇农业综合办公室,山东省枣庄市 277415;2山东省枣庄市山亭区农业局,山东省枣庄市 277200)

公猪精液保存的原则是抑制精子活动,降低其代谢速度,以便达到延长精子存活时间的目的。本文分别阐述了保存精液的三种方法及其注意事项,对猪的人工授精工作具有较强的指导意义。

公猪;精液;保存方法

公猪精液的保存原则是抑制精子活动,降低其代谢速度,以便达到延长精子存活时间的目的。为了抑制精子活动,降低其代谢水平,普遍采用的保存方法是降温,随着温度的降低,精子趋于静止,其能量消耗也大为减少。精子降温保存犹如动物的冬眠一样,精子并未丧失生命力,一旦温度升高,环境适宜,精子就会重新活动起来。保存精液的方法如果按温度来分,可分为常温保存、低温保存和超低温保存3种。从保存期限来看,前两种保存期较短,为1~7天,后一种保存期较长,可达数月至数年。

1 常温保存

1.1 保存温度

指精液稀释后保存在一般温度下,如室温下、冷水中、保温瓶中或地窖中。常温保存的温度一般在10~25℃之间。在这种温度下,精子运动虽明显减弱或消失,但其代谢过程并未停止,只是有所降低。因此,只能在一定限度内延长精子存活时间,一般可保存3天左右。此法因为不需要低温设备,在实际生产中具有一定实用价值。在常温下保存的精液,易孳生微生物,故在稀释液中必须加入一定量的抗生素(稀释液配方为葡萄糖6g、柠檬酸钠0.35g、乙二胺四乙酸钠0.37g、碳酸氢钠0.12g、链霉素10万单位、青霉素3万单位、蒸馏水100mL),稀释比例为精液︰稀释液=1︰0.5)。

1.2 冷水保存法

在农村没有冷源条件时,可用冷水保存精液,常用的两种方法为保温瓶保存和水井保存。

1.2.1 水井保存法

将精液瓶用塑料袋装好密封,放在底部穿孔的竹筒或竹篮等容器内,再把竹筒或竹篮连同精液瓶一起放到井底保存,用时从井下取出。

1.2.2 保温瓶保存法

将新鲜的井水装入广口保温瓶(也叫冰壶)内,精液瓶装在塑料袋里,将塑料袋浸在冷水中,每天换水1次。

2 低温保存

指在常温下进一步降低温度,使接近冰点,但使精液不致结冰。方法是把稀释的精液(精液稀释应在精液采出后尽快进行,而且精液与稀释液的温度必须调整到一致,一般是将精液与稀释液置于同一温度中进行稀释,稀释比例为精液︰稀释液=1︰0.5。常用的猪精液稀释液配方有葡柠稀释液——葡萄糖5g、柠檬酸钠 0.5g、蒸馏水100mL和葡柠乙液——葡萄糖5g、柠檬酸钠0.3g、乙二胺四乙酸 0.1g、蒸馏水100mL)放在冰箱内或装有冰块的保温瓶中,温度一般控制在0~5℃之间(精液在低温保存之前,需经预冷平衡,从30℃降至 0~5℃大约需要 1~2小时完成降温全过程,以每分钟降温0.2℃左右为宜)。在这种温度下,精子运动完全停止,代谢显著降低,故保存时间长于常温保存(一般能保存6~8天)。精液使用前,要镜检精子的活力,活力低于0.6或死精多的不要使用。此方法在超低温冷冻猪精液未应用于生产之前,在猪人工授精工作中起到了重要作用。

3 超低温保存

此方法是目前最先进的保存方法,是将精液的温度降到冰点以下,使精液冻结后保存。

3.1 保存温度

超低温保存的温度一般为-196℃(液氮)。在此温度下,精子的代谢完全停止,保存时间较长,经数月甚至数年后仍可应用。冷冻精液使用最普遍的冷源是液氮。应用超低温保存法,须保证冷源(液氮)的供应不能中断。在应用液氮罐保存时,应隔一段时间加一次液氮。

3.2 稀释冷冻

当精液采集后,在30~32℃的温度条件下,静置半小时,或对全份精液离心处理 10分钟,转速为1500~2000转/分钟,进行浓缩,除去精清。而后用1号稀释液稀释(1号稀释液为等温的脱脂乳,按精液︰稀释液=1︰0.5的稀释比例稀释),经1小时温度降至15℃, 平均每 10分钟下降 2.5~2.8℃;之后再用同温的2号稀释液进行第二次稀释(2号稀释液为蔗糖卵黄液,其配方是:12%的蔗糖液:卵黄液=75︰25,按原精液量1︰1的稀释比例稀释),再经2~3小时,温度降至8℃,平均每10分钟下降0.47℃,最后再用3号稀释液稀释(3号稀释液为等温含甘油的蔗糖卵黄液,其配方是:12%的蔗糖液︰甘油︰卵黄液=75︰5︰20,按原精液量1︰1的稀释比例稀释),再静置0.5~1.0小时,待温度降至5℃时,按一定程序进行颗粒滴冻。滴冻的方法是,用5mL的注射器吸取稀释好的精液,在盛有液氮的铝盒内进行滴冻,每粒0.1mL。

3.3 温水解冻

冷冻精液在使用时,需进行解冻。解冻时取1mL解冻液(解冻需要使用解冻液,同时也是精液再次稀释的过程,解冻液常用的配方为:葡萄糖3.7g,二水柠檬酸钠0.6g,乙二胺四乙酸0.125g,碳酸氢钠0.125g,氧化钾0.075g,青霉素10万单位,链霉素0.1g,加蒸馏水至100mL),装入小试管内,放在40~55℃的温水中,使解冻液升温,然后放1粒精液到解冻液中,由温水中取出小试管,并不停的摇动,使之融化。解冻后的颗粒精液,经显微镜检查合格后,应立即给母猪输精。

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