洋葱组培中应注意的几个问题

潘美红，陈振泰，杨海峰，薛萍，孙桂乐

（江苏连云港市农业科学院，222000）

洋葱是百合科葱属植物，近年来组织培养技术在洋葱育种上的应用得到了迅速发展。经多次试验，在洋葱组培过程中，形成了以下几个观点。

1 打破休眠

洋葱在夏季收获后，即进入1.5～2.5个月的休眠期，期间鳞茎不萌发，用此期的洋葱进行组织培养会大大影响效果。一般从大田取回的洋葱球可通过赤霉素处理或低温处理来打破休眠。具体方法有：①赤霉素处理，将取回的洋葱球放入5～10mg/L赤霉素溶液中处理18～24 h；②低温处理，在大田选择理想的洋葱球，取回实验室，置于4～5℃冰箱中冷藏3～4周。

但是，赤霉素处理对洋葱组培效果的影响有待进一步研究；低温处理方法简单易行，且无副作用。

2 消毒方式

由于洋葱鳞茎生长在地下，带菌量多，本着既能有效消毒，又要不杀死材料的原则，通过试验比较，较为有效的消毒方式为：将冷藏后的洋葱球剥除外皮至直径为2～3 cm，用自来水冲洗干净，拿至超净工作台，用75%酒精浸泡1 min（摇晃），然后用0.1%HgCl2溶液浸泡15min（摇晃），再用无菌水冲洗5次后，准备接种。

3 外植体形式

将消毒好的洋葱鳞茎放入已消毒并放有吸水纸的培养皿中，用吸水纸将鳞茎表面水分吸干，用手术刀将鳞茎切至鳞茎盘为1～2 mm厚，贴近鳞茎盘的鳞茎为（4～5）mm×（4～5）mm，高 0.5～1 mm 的外植体，再用刀片在鳞茎表面做“井”字形划痕，刀深2～3mm，打破顶端优势，利于侧芽发生。

4 影响增殖的因素

试验发现，不同品种洋葱在同一个培养基上的增殖效果不同，特别是在启动不定芽萌发时表现尤为明显，因此要针对不同品种，采用不同组分的培养基。

①通过多次试验证明，不同品种的洋葱在以MS和以花宝（Hyponex，美国花宝公司生产）为基础的培养基上增殖，其效果不尽相同。

②在合适的基础培养基上，添加合适的生长调节剂类型，并配以合适的浓度和配比，是影响增殖的关键。

③继代过程中，在MS培养基中加入适量的多效唑，可以提高增殖率，但是多效唑不能连续使用，否则可能会起到负效果。

5 继代过程

经过多次继代，洋葱组织材料出现老化现象；不少组培苗会出现严重的玻璃化现象，试验发现，继代3～4次后，在增殖培养基中加入适量的间苯三酚，可以适当地缓解或减少组织材料老化、玻璃化现象。但是，间苯三酚也不能连续使用，最好间隔3～4次后再用，但是，该方法不能彻底解决问题。另外，洋葱经过多次继代后，由于组培苗体内激素的累积或消耗程度未知，培养基中的生长调节剂的量和配比不好控制，一直沿用同样的培养基配方，效果都比早期的差。试验发现，洋葱多次继代后，在增殖培养基中也能生根，影响了增殖效果，因此，进行洋葱组培时，继代一定时间后最好就注入新的外植体，以保证组培的质量。但是，洋葱继代几次能获得最好的增殖效果，有待于进一步研究。