高效液相色谱法测定急肝退黄胶囊中盐酸小檗碱含量

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(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.长春中医药大学，吉林 长春 130117)

急肝退黄胶囊为茵陈、黄柏、板蓝根、白茅根、苍术、郁金、秦艽、蒲公英、车前草、黄芩、麦芽、大黄、栀子诸药组成的复方制剂，用于急性黄疸型肝炎。该制剂收载于卫生部药品标准中成药制剂第2册,无含量测定方法[1-2]。本文采用高效液相色谱法测定该制剂中黄柏的盐酸小檗碱含量，结果表明，本法简便、迅速、结果准确。

1 仪器与试药

2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津),Class-vp工作站，SPD-M10AVP型紫外可见检测器(日本岛津)；KQ-50B超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号110713-200208供含量测定用)；急肝退黄胶囊(贵州省安康)；乙腈为色谱醇，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)[5];流动相：乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)；流速：1.0 mL/min;检测波长：264 nm;柱温：30 ℃；进样量：10～20 μL。理论塔板数按盐酸小檗碱峰记不低于4 000。盐酸小檗碱与相邻的杂质峰的分离度为1.54。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取在100 ℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含盐酸小檗碱0.1 mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物约3 g,精密称定，置锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)混合溶液50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)40 min,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，蒸干，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 按急肝退黄胶囊处方比例称取缺黄柏的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法提取阴性对照溶液。

2.5 干扰试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定，结果样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间(tR=19.2 min)的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无此峰，说明急肝退黄胶囊的其他成分对盐酸小檗碱的测定无干扰。

2.6 线性关系考察 精密吸取对照品储备液(每1 mL含0.0 966 mg)4、6、8、12、16、20 μL注入色谱仪，以上述色谱条件测定峰面积值，以峰面积为纵坐标，盐酸小檗碱的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=-168 112.656 1+362 288 5.366X，r=0.999 7，结果表明线性关系良好。线性范围为0.386 4～1.932 0 μg。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，每次20 μL，按上述色谱条件测定峰面积。得峰面积平均值27 892 03(n=7)，RSD为2.75%，表明供试品在24 h内稳定。

2.8 精密度试验 取同一供试品溶液，重复进样6次，按上述色谱条件测定峰面积，测得平均峰面积为29 441 87(n=6)，RSD为1.87%。

2.9 重复性试验 取同一批号供试品6分，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行测定，并计算含量，结果盐酸小檗碱平均含量为0.203 mg/粒。

2.10 回收率试验 采用加样回收试验，精密称取已知含量的样品6分(各约1.5 g)，精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.096 6 mg/mL)10 mL，按照供试品溶液制备项下方法处理,依上述色谱条件依法进行测定盐酸小檗碱的含量，并计算回收率，结果平均为98.20%，RSD为1.41%。

2.11 样品测定 取5个批号的样品，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件进行测定，每批测定2次，结果见表1。

表1 5批样品含量结果 mg/粒

3 结论

3.1 检测波长的选择 取盐酸小檗碱对照品的甲醇溶液，在190～370 nm范围内扫描，其定测定波长为264 nm。

3.2 流动相的选择 经多种流动相选择，认为乙腈-[水-冰醋酸-三乙胺(64∶1∶1)](25∶75)为最佳。

3.3 提取方法的选择 采用盐酸-甲醇(1∶100)为溶剂超声处理30 min的提取方法良好，且操作简便[3-4]。

[1]唐德智.HPLC法测定急肝退黄胶囊中绿原酸含量[J].中国药师,2009(10):60.

[2]李伯军,白岩,李铁强,等.高效液相色谱法测定急肝退黄胶囊中黄芩苷的含量[J].中国药事，2006(11):39.

[3]丁海昕,王效民,梁玉景.HPLC法测定抗饥消渴片中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药，2008(3):42.

[4]袁常青,邢亮,李长富,等.用高效液相法测定肾特康胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].中国职业药师，2011(9):51.