保健食品荣骨胶囊中蛋白质含量测定

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(1.长春中医药大学研发中心，吉林 长春 130117；2.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；3.长春市食品药品检验所，吉林 长春 130021；4.白城市中医院，吉林 白城 137000)

荣骨胶囊是以鹿茸为原料加工而成的胶囊制剂。鹿茸为雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，是我国传统名贵中药，具有壮肾阳，益精血，强筋骨，调冲任，托疮毒等作用。研究表明[1-3]，鹿茸中含有大量的胶原蛋白、多胺、酸性黏多糖等类成分，其胶原蛋白具有治疗骨质疏松的作用[4-7]。荣骨胶囊制剂主要成分为胶原蛋白，胶原蛋白是以黏多糖作为侧链的蛋白质之总称，其侧链的黏多糖和核心蛋白在治疗骨质疏松方面各自的作用目前尚不清楚，因此，对其质量标准研究时，我们选用蛋白质含量作为质量控制指标之一。

1 实验材料

752紫外光栅分光光度计；对照品标准牛血清白蛋白(批号9048- 46-8)购自Sigma公司，对照品纯度均为99%。所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

蛋白质含量测定中所需的试剂甲、试剂乙为本实验室配制。试剂甲(A)：10 g碳酸钠、2 g氢氧化钠和0.25 g酒石酸钾钠加蒸馏水配成500 mL溶液，试剂甲(B)：0.5 g硫酸铜溶解于100 mL蒸馏水中，每次用时将50分(A)与1分(B)混合为试剂甲。试剂乙：在1.5 L容积的磨口回流瓶中加入100 g钨酸钠、25 g钼酸钠及700 mL蒸馏水，再加50 mL 85%磷酸，100 mL浓HCl充分混合，接上回流冷凝管以小火回流10 h。回流结束后，加入150 g硫酸锂，50 mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15 min以驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色。稀释至1 L，过滤，滤液于棕色瓶中保存，用前稀释1倍即为试剂乙。

2.1 对照品溶液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重牛血清白蛋白对照品，置量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL含牛血清白蛋白308 μg)。

2.2 标准曲线的制备 取牛血清蛋白标准溶液0、0.4、0.8、1.6、2.0 mL加入5个试管中，标准溶液补水至2 mL，加入5 mL试剂甲，摇匀，静止10 min，然后加入0.5 mL试剂乙，立即振荡摇匀，静止30 min后，以标准溶液第1管为对照，照分光光度法(《中国药典》2005版附录VA)，在660 nm波长处测定吸收度，以牛血清白蛋白μg数对应的吸收度，计算回归方程。

2.3 测定方法 精密称取供试品配置成溶液浓度为626 μg/mL，作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液0.8、1.6 mL加水至2 mL,照标准曲线制备项下自“加入5 mL试剂甲”起，依法操作，测定吸收度，由回归方程计算蛋白质含量。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 按照含量测定的方法制订标准曲线，牛血清白蛋白浓度308 μg/mL，见表1。

表1 蛋白标准曲线数据

2.4.2 稳定性试验 取样品按正文含量测定方法，显色后每隔10 min测其吸收度,吸收度在显色后30 min内稳定，30 min以后吸收度降低，故正文规定应在显色后30 min内进行测定，结果见表2。

表2 蛋白稳定性考察结果

2.4.3 精密度试验 取样品定容后，连续测定5次，计算其RSD值，结果见表3。

表3 蛋白精密度考察结果

结果表明，RSD=0.61%，所用仪器精密度良好。

2.4.4 重现性试验 取样品5分，按含量测定项下方法进行测定，结果见表4。

表4 蛋白重现性考察结果

结果表明，RSD=0.33%,该方法重现性很好。

2.4.5 回收率试验 精密称取已知蛋白含量为29.13%的样品，配成0.5 mg/mL，精密吸取5分，每分0.1 mL，分别加入对照品溶液(浓度：50 μg/mL)、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 mL。按含量测定项下方法操作，以测得的含量减去样品中蛋白含量，除以已知对照品加入量，得回收率，结果见表5。

表5 蛋白回收率试验结果

结果表明，本法平均回收率为98.80%，RSD=1.84%，表明本法回收率良好，准确度较高。

3 结论

3.1 结果 本实验结果表明，此含量测定方法准确，可靠，并依照此方法对4批样品进行含量测定，结果4批样品蛋白含量分别为29.14%、29.15%、29.13%、29.17%。

3.2 结论 鹿茸中的胶原蛋白类成分是鹿茸中比较大量和特殊的成分，多做为组织和细胞的重要组成成分和细胞间信息传递的成分，显示了多方面的药理作用。我们曾对这些成分进行过研究，发现其在治疗老年痴呆(动物模型)、贫血和骨质疏松等方面都具有一定的活性。与鹿茸的强筋健骨、补益气血的传统作用相一致。荣骨胶囊是以鹿茸为主要功效的保健品，因此，控制其中蛋白质的含量是必要的。本文报道的含量测定方法操作简便，结果稳定，适合作为荣骨胶囊生产的质量标准。

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