金柑总黄酮解酒功效的体外活性试验初探

陈则夷，王仁才，黄红芳，刘吉凯

（湖南农业大学园艺园林学院，湖南 长沙 410128）

利用天然植物活性成分解酒功效的研究在葛花[1-2]、枳椇子[3]、橄榄[4]等先后得到证实，但有关金柑解酒功效的研究尚未见报道。金柑作为传统的药食同源果实，具有疏肝醒酒的功效。乙醇脱氢酶（ADH）[5]是参与乙醇在体内代谢的主要酶，在乙醇代谢中具有加快乙醇代谢，降低血醇浓度，减轻其对机体的伤害等重要作用。试验主要研究了不同成分提取液对金柑总黄酮提取差异，以及金柑总黄酮的剂量对乙醇脱氢酶活性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为浏阳金柑（金弹），采自浏阳官渡金柑种植园。

1.2 金柑总黄酮的制备

选取20个金柑，清洗干净，剥皮，将金柑皮放在托盘中，烘箱中50℃烘干，中药粉碎机打粉。取金柑皮干粉3份，分别称重5.00 g，用脱脂纸包好置于3个索氏提取器中（编号为A、B、C）。分别加入200 mL分析纯石油醚，在80℃下脱脂至无色，过滤，去滤渣，在A中加入200 mL 80%的乙醇溶液，在80℃下回流提取2.5 h，过滤，回收乙醇提取液；在B中加200 mL正丁醇，在80℃下提取2.5 h，过滤，回收正丁醇提取液；在C中加入200 mL乙酸乙酯，在80℃下回流提取2.5 h，回收乙酸乙酯提取液。

1.3 黄酮含量的检测及金柑黄酮的体外酶激活测定

黄酮含量的检测：采用紫外分光光度计测定黄酮含量，分别取80%乙醇提取液、正丁醇提取液、乙酸乙酯提取液各20 mL，真空旋干，用10 mL 30%乙醇溶液溶解于25 mL容量瓶中，加5%的NaNO2溶液1.0 mL，摇匀，放置6 min后加入10%的Al（NO3）3溶液 1.0 mL，摇匀，放置 6 min 后加入4%NaOH溶液10.0 mL，用30%乙醇定容，摇匀，以空白为对照，10～15 min后于510 nm处测定吸光度A。

金柑黄酮的体外酶激活测定：采用瓦勒—霍赫（Valle&Hoch）改良法检测乙醇脱氢酶活性。在带塞试管中加入焦磷酸钠缓冲液1.5 mL，NAD+1.0 mL，乙醇0.5 mL，分别加入3种金柑提取液0.1、0.2、0.3、0.4 mL，混合 37℃下加盖温育 5 min。温育后的带塞试管中立即加入乙醇脱氢酶0.1 mL，对照管中以蒸馏水代替乙醇脱氢酶，摇匀，37℃温育5 min，用722型分光光度计测定吸光度（A340）值，以后每隔30 s读数一次，连续测定5 min。以对照管调定零点，计算出每分钟的平均吸光值ΔA/min。

乙醇脱氢酶活性计算法：

抑制（激活）率计算：

抑制（激活）率（%）=酶活性无药对照组－酶活性加药测定组/酶活性无药×100

2 结果与分析

2.1 标准曲线的确定

芦丁标样品的标准曲线方程为y=1.072 3 x－0.010 2，R2=0.999 5，其中 y为吸光度，x为芦丁标准品浓度，表明芦丁浓度与吸光度具有良好的线性关系。

图1 芦丁标准曲线

2.2 不同溶剂提取的金柑黄酮含量

以1.3方法测得80%乙醇提取液黄酮含量为0.4 mg/mL，正丁醇提取液黄酮含量为0.222 mg/mL，乙酸乙酯提取液黄酮含量为0.135 mg/mL。结果表明，随着提取溶剂非极性的的增大，提取的金柑黄酮的含量减少。如表1所示，80%乙醇提取液的总黄酮为0.400 mg/mL，正丁醇的为0.222 mg/mL，乙酸乙酯的为0.135 mg/mL。

2.3 不同溶剂提取的金柑黄酮对乙醇脱氢酶活性的影响

从表2中可知，正丁醇提取液和乙酸乙酯提取液对乙醇脱氢酶激活作用并不明显，在一定含量上具有一定抑制作用。而80%乙醇溶液提取的金柑总黄酮对乙醇脱氢酶的活性激活效果较显著，且随黄酮含量的增加激活率上升。

表1 不同提取液的吸光度

表2 3种溶剂提取的金柑黄酮对乙醇脱氢酶活性的影响 （%）

3 讨论

（1）金柑总黄酮提取过程中，以80%乙醇水溶液提取液中总黄酮含量最高，由此推断，金柑总黄酮中主要以极性较大的黄酮类化合物存在。

（2）80%乙醇提取液对乙醇脱氢酶激活作用较显著，随着提取液含量的增加激活率上升，一定含量的正丁醇和乙酸乙酯提取液对乙醇脱氢酶具有抑制作用。由此推测，在金柑总黄酮中主要是极性较大的黄酮类化合物对乙醇脱氢酶具有激活作用。结果表明金柑乙醇提取液可以提高乙醇脱氢酶的活性，具有解酒的功效。

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