HPLC法测定清肺止咳合剂中黄芩苷的含量

张小平 周洪合

HPLC法测定清肺止咳合剂中黄芩苷的含量

张小平①周洪合②

目的：建立高效液相色谱法测定清肺止咳合剂中黄芩苷的含量。方法：高效液相色谱法：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）为流动相；检测波长为280 nm。结果：在0.2～1 μg范围内黄芩苷峰面积与进样量线性关系良好，r=0.9999；样品加样回收率为100.20%（n=5），RSD 0.71%。结论：所建立的方法准确可行，重复性好，可有效控制清肺止咳合剂的质量。

高效液相色谱法； 清肺止咳合剂； 黄芩苷； 含量测定

清肺止咳合剂是由省级食品药品监管部门批准的医院制剂，由炙麻黄、黄芩、炒杏仁、桑叶、川贝母等十六味药物组成。具有清热止咳、化痰平喘功效，用于风热肺热引起的支气管炎肺炎见咳嗽痰多等症，具有较好的临床疗效。原质量标准中没有含量测定，为提高本制剂的质量控制标准，通过以黄芩苷为指标，对本制剂三批样品中的黄芩进行了含量测定研究，并进行了方法学的系统考察，建立了黄芩苷的含量测定方法，提高了其质量标准水平。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津（LC－20A）高效液相色谱仪；Prominence SPD-M20A PDA检测器。

1.2 试药 黄芩苷对照品，批号：110715-201016，由中国食品药品检定研究院提供。试剂为色谱纯；清肺止咳合剂，自制，批号：20120122、20120123、20120126。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，柱温38 ℃，检测波长280 nm，流动相：甲醇-水-磷酸（47:53:0.2），流量1 ml/min，进样量10 μl。理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，以甲醇为溶剂，制成每1 ml含100 μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取清肺止咳合剂1 ml，置50 ml容量瓶中，加70%乙醇溶液35 ml，超声处理20 min，放置至室温，加70%乙醇溶液至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液，续滤液作为供试品溶液。

2.4 空白对照溶液的制备 按本制剂的处方量，制备缺黄芩的对照液，按供试品溶液的制备方法制成空白对照溶液。

2.5 空白试验 分别取上述黄芩苷对照品、供试品溶液、阴性空白对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1-3）。结果表明，在黄芩苷峰位置处，空白对照溶液没有其他峰呈现，说明空白对照无干扰，符合测定要求。

图1 黄芩苷对照品

图2 空白对照样品

图3 样品

2.6 线性关系考察 精密吸取黄芩苷对照品2、4、6、8、10 μl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.1306X-0.053，r=0.9998。在0.2～1 μg范围内有良好线性。

2.7 精密度试验 取黄芩苷对照品溶液，重复进样6次，每次10 μl，按上述色谱条件测定峰面积，RSD=0.41，证明仪器有良好的精密度。

2.8 稳定性试验 试验结果表明供试品与对照品在12 h内均稳定。方法：取对照品溶液和供试品溶液分别每隔2小时进样1次，共进样6次，每次10 μl，记录色谱图。RSD分别是0.56，0.63。

2.9 重复性试验 取样品（批号：20120122）平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，并计算含量，结果表明有良好重复性，RSD=0.42。

2.10 加样回收试验 取已知含量的样品适量，精密量取5份，分别加入一定量的黄芩苷对照品，制备成供试品溶液，测定峰面积，计算黄芩苷的回收率。结果见表1。

表1 黄芩苷的回收率

2.11 样品测定 取样品3批，分别制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定峰面积（n=5），计算样品中黄芩苷的含量。结果见表2。

表2 样品中黄芩苷含量

3 讨论

3.1 检测波长的选择，参考《中国药典》2010年版一部黄芩项下含量测定方法[1]，取上述黄芩苷对照品溶液，在紫外分光光度计上于波长200～400 nm处扫描，结果在（280±2）nm波长处有最大吸收，故以280 nm为检测波长。

3.2 供试品溶液制备曾将加70%乙醇稀释后直接测定黄芩苷含量与加70%乙醇超声处理后测定加以比对，结果表明，加70%乙醇超声处理后黄芩苷含量高于稀释后直接测定，故本文采用加70%乙醇后超声处理供试品[2-3]。

[1] 国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社，2010：282.

[2] 宿洁，孙立华，李成果.高效液相色谱法测定利胆排石合剂中黄芩苷的含量[J].山东医药工业，2002，21（5）：12.

[3] 李卓，危当恒.咽喉炎合剂中黄芩苷的稳定性考察[J].中国药房，2008，19（36）：2845.

Determination of Baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC/ZHANG Xiao-ping， ZHOU Hong-he. //Medical Innovation of China，2012，9（33）:149-150

Objective: To establish a method to determine baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC. Method: Baicalin intablets were separated by HPLC on Cosmosil C18 column with methanol-water-phosphorie acid（47:53:0.2）ad mobile phase and detection wavelength was set at 280 nm. Result: The paeontflorin area and content showed a good linear relationship ym the range of 0.2～1 μg and correlation coefficient was 0.9999. The average recovery of the added sample was 100.20%（n=5）， RSD 0.71%. Conclusion: The method is stable， accurate， and precise for the quality control of Qingfeizhike Mixture.

HPLC； Qingfeizhike Mixture； Baicalin； Determination

Jinan City Chinese Medicine Hospital， Jinan 250012， China

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.33.095

①济南市中医医院 山东 济南 250012

②济南市第三人民医院

张小平

2012-09-13） （本文编辑：王宇）