用动物试验确诊1例绵羊魏氏梭菌病的报告

马占荣

青海省门源县阴田乡兽医站，青海门源810300

魏氏梭菌为厌氧、革兰氏阳性、两端钝圆的大杆菌，有芽孢，无鞭毛。本菌能产生多种外毒素，根据其毒素性质不同，分为 A、B、C、D、E等型；菌型不同，其所引起的疾病亦不同，仅从临床症状上不易确诊。特别是羊肠毒血症和羊猝狙，发病急、病程短、死亡快，以致其临床症状不易被观察到。

2011年1月，阴田乡一牧户饲养的绵羊突然发病，共存栏284只，3d内连续死亡11只，发病羊只中以当年羔羊和成年母羊居多。部分患羊当晚不见任何症状，次日死于圈中；部分患羊在放牧时发病，羊只突然停草、出现神经症状、呼吸困难、心跳加快、体温不高、口吐白沫、结膜苍白、全身肌肉震颤，很快进入昏迷状态，1～8h内死亡。对症治疗疗效甚微，初步诊断为魏氏梭菌感染，为进一步确诊，进行了动物试验，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）供试动物。门源种马场一牧户饲养的体重、年龄相近的6只健康家兔。

2）试验用品。离心机1台（配套试管6支），10 mL无菌注射器6支，5号静脉注射针头6套，足量酒精棉球，250mL生理盐水。

1.2 方 法

无菌采集病死绵羊含内容物的小肠100cm，封住两端，备用；无菌采集健康绵羊含内容物的小肠100cm，封住两端，备用。

1）第1步试验。取备用病死绵羊的小肠内容物10g，加40mL生理盐水稀释后，2 000r／min离心30min，取上清液，标注为1号试剂；用同样的方法将健康绵羊的小肠内容物稀释、离心后制成2号试剂。随机取3只家兔，分别标记为1、2、3号；1、2号家兔分别对应静脉注射1、2号试剂各5mL，3号家兔注射生理盐水5mL，注射后让3只家兔自由活动，并观察、计时。

2）第2步试验。取静脉注射1号试剂致死的家兔的小肠内容物10g，加40mL生理盐水稀释后，2 000r／min离心30min，取上清液，标注为4号试剂。取4号试剂5mL静脉注射于备用的任意1只家兔，标为4号试验家兔，并观察、计时。

2 结果与分析

第1步试验，结果发现注射37min后1号试验家兔兴奋不安、狂奔几下后突然死亡，2、3号试验家兔生理活动正常。说明病死绵羊的小肠内有使家兔致死的毒素。第2步试验，结果发现注射后12h内，4号试验家兔生理活动正常。说明致死的1号家兔小肠内无毒素产生，致使1号家兔死亡的是病死绵羊小肠内细菌的外毒素，而不是病菌感染。

综合分析发现，引起该批绵羊死亡的原因是魏氏梭菌感染，由于条件限制未作毒素分型鉴定。确诊为魏氏梭菌感染后，立即对全群绵羊进行了羊梭菌多联苗强化免疫，1周后再无绵羊发病。

3 讨 论

应在详细的流行病学调查基础上，结合临床症状和剖检病变，初步诊断为魏氏梭菌感染后，用该试验进行确诊。应充分考虑绦虫毒素、食入性毒素等因素，以免影响试验结果。本试验成本低、实验动物易购、操作简便、器械易于筹备，适于在条件不好、载畜量大的偏远山区应用。