宫颈鳞癌组织中WWOX与Bcl-xl基因的表达及其意义

杨秀莲，王 筑，佟丽波

(1惠州市第三人民医院，广东 惠州 516002;2佳木斯大学第一附属医院)

正常细胞的正常更新要依赖细胞增殖与调亡的平衡来调节。肿瘤组织的生长失控不仅与细胞增殖旺盛有关，还与肿瘤细胞的凋亡受到抑制使其生存期延长有关。WWOX是最新发现的一种抑癌基因，有研究表明它是一种促凋亡蛋白，参与细胞凋亡通路的调节。Bcl-xl是Bcl-2基因家族的成员之一，主要参与线粒体介导的细胞凋亡的负相调控，可阻止各种应激所诱发的细胞凋亡过程。许多研究表明，WWOX、Bcl-xl在许多恶性肿瘤中表达异常，与肿瘤的发生发展有关。本研究采用免疫组织化学技术检测WWOX与Bcl-xl蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达，并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 收集惠州市第三人民医院及佳木斯大学第一附属医院病理科2008年9月～2012年6月存档的石蜡包埋标本60例，其中宫颈鳞癌50例、宫颈上皮内瘤变10例、正常宫颈组织标本10例。患者年龄28～70(48±9.44)岁。Ⅰ期32例，Ⅱa期18例;病理分化程度:高分化20例，中低分化30例;发生淋巴结转移16例，无淋巴结转移34例。其病程经统计学检验差异无统计学意义。所有研究标本均再次做HE染色，由两位病理医师再次证实。

1.2 主要试剂 兔抗人WWOX单克隆抗体、兔抗人Bcl-xl单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥公司。

1.3 实验方法 常规切片，HE染色，采用中杉公司推荐的SP免疫组化染色法，检测细胞中WWOX及Bcl-xl蛋白的表达情况。WWOX抗体用PBS 1∶100稀释为工作液，Bcl-xl抗体用PBS 1∶150稀释为工作液，PBS代替一抗作为阴性对照，用已知卵巢癌阳性切片作为阳性对照。

1.4 结果判定 光镜下观察，WWOX和Bcl-xl抗原阳性反应均为位于细胞质内的棕黄色均匀细颗粒。参照综合染色强度和阳性细胞数(占总细胞数的百分比)进行半定量处理。染色强度按下列标准评分:细胞无显色者为0分，呈浅黄色者为1分，呈棕黄色者为2分，呈棕褐色者为3分;阳性细胞数评分方法:阳性细胞占总细胞数10% ～50%者为2分，51% ～80%者为3分，＞80%者为4分。上述两项评分相加小于3分为阴性;3分为+;4～5分为++;6～7分为+++。

1.5 统计学方法 用SAS9.0软件进行统计学分析，采用χ2检验及Fishers确切概率法检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 WWOX与Bcl-xl基因在不同宫颈组织表达比较 WWOX蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌阳性表达率分别为90.00%(9/10)、75.00%(15/20)、34.00%(17/50);Bcl-xl蛋白阳性表达率分别为 10.00%(1/10)、30.00%(6/20)、66.00%(33/50)。WWOX、Bcl-xl在宫颈鳞癌中阳性表达率与正常宫颈及宫颈上皮内瘤变相比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 WWOX与Bcl-xl基因在宫颈鳞癌中的表达与临床病理参数的关系 见表1。

表1 WWOX及Bcl-xl基因在宫颈鳞癌中表达与临床病理参数的关系

2.3 相关性分析 在50例宫颈鳞癌中，WWOX与Bcl-xl表达共阳性、共阴性均为10例，二者单独阳性分别为7例和23例，经Spearman等级相关分析，表明WWOX与Bcl-xl在宫颈鳞癌中的表达呈负相关(r= －0.164，P ＜0.05)。

3 讨论

目前研究认为恶性肿瘤是一种多基因性疾病，原癌基因激活、抑癌基因功能丧失及某些修饰基因功能的改变导致肿瘤的发生及发展。具体来讲，肿瘤的发生与致癌因子诱导染色体的常见脆性位点，进而引起相关抑癌基因的失活有着较为密切的关系。WWOX基因［1］作为一个位于普通型脆性位点基因，它在射线、病毒、某些毒素的作用下均可能发生基因片段的变异或缺失，如果所变异或缺失的部分恰好是能够抑制细胞异常生长增殖的基因，则这种变异和缺失可能抑制细胞凋亡、促进肿瘤的发生发展。研究表明，WWOX蛋白能够与相关蛋白如p53、p73、ErbB4、c-jun、Ap-2 等结合，阻止后者进入细胞核，从而抑制相关蛋白发生转录和表达［2］。而这些相关蛋白均处于信号转导途径的关键点，说明WWOX在抑制蛋白转录、细胞生长和诱导凋亡等信号转导途径中均有重要作用。多项研究［3～6］表明，WWOX蛋白表达异常与肿瘤的发生发展有关，特别与上皮性肿瘤的发生发展关系密切。本研究发现，宫颈鳞癌中WWOX阳性表达率均低于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织，推测WWOX的表达下降可能参与了宫颈鳞癌的发生。本研究结果显示，WWOX阳性表达率随着临床分期增加，组织学分级增高逐渐下降;且在16例发生淋巴转移的宫颈鳞癌组织中，WWOX表达缺失。提示WWOX在宫颈鳞癌中表达下降或缺失，可能是导致肿瘤细胞生长、扩散和转移的一个重要潜在因素，可能成为宫颈鳞癌早期诊断及判断预后的一个重要指标。

Bcl-xl属Bcl-2基因家族成员之一，是一种凋亡抑制因子［7］。研究表明，Bcl-xl在许多肿瘤组织中表达升高，它能够抑制抗肿瘤制剂诱导的细胞凋亡，促进肿瘤的发生发展;而用反义寡核苷酸抑制Bclxl的表达将促进肿瘤细胞发生凋亡［8］。本研究表明，在宫颈鳞癌组织Bcl-xl蛋白阳性表达率均高于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变组织;且Bcl-xl阳性表达率随着临床分期增加、组织学分级增高及淋巴转移逐渐升高，这说明Bcl-xl表达增高可能促进了宫颈鳞癌的发生、发展及转移。

有文献报道，WWOX通过下调凋亡抑制因子Bc1-xl和Bc1-2及上调p53的表达而增强TNF的细胞毒性功能，而TNF通过促使线粒体通透性的改变而导致WWOX从线粒体释放入核内，起到了促凋亡的作用［9］。本研究发现，在同一宫颈鳞癌组织中，WWOX阳性表达下调，而Bcl-xl蛋白阳性表达上调，二者呈明显的负相关。因此推测，它们在宫颈鳞癌发生发展的过程中可能共同存在、共同发挥作用，两者可能通过上述机制导致肿瘤细胞的凋亡受到抑制，从而促进宫颈鳞癌的发生及进展，有望作为检测宫颈鳞癌发生、发展及判断预后的又一肿瘤生物学指标。

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