白色金针菇液体菌种制备及工厂化生产应用初探

黄竹青，郑剑玲，邓铁宏，魏赤平，刘福东，齐 贺，王美惠，宋 超

(1.辽宁卫生技术职业学院，辽宁沈阳 110101;2.沈阳恒生农业发展有限公司，辽宁沈阳 110164)

白色金针菇是我国大力发展的一种优质食用菌［1］，但仍有相当多数的栽培者采用传统的固体菌种栽培模式。由于固体菌种的生产工艺比较繁杂、生产周期较长、菌龄不一致，污染率较高等不利因素，导致产品的质量不稳定，生产成本过高［2］。因此，借鉴了其他食用菌液体菌种应用于工厂化生产的技术与经验［3］，开展了液体菌种应用于白色金针菇工厂化生产的研究。结果表明白色金针菇液体菌种制备技术应用于工厂化生产，可缩短生产周期，降低菌种污染率，增强出菇均一性，有效地提高了白色金针菇工厂化生产的产量和质量。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 恒生1号由沈阳恒生农业发展有限公司提供。

1.1.2 培养基 ①斜面培养基:在PDA培养基上另加 MgSO40.5 g，KH2PO41 g，VB110 mg;②碳源试验培养基:分别加入葡萄糖、乳糖、可溶性淀粉、白砂糖各 1.0%，再加入蛋白胨 4.0%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL;③氮源试验培养基:分别加入蛋白胨、尿素、硫酸铵、豆粕粉各4.0%，再加入葡萄糖 1.0%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL［4］。

1.1.3 仪器设备 BSD-250全温度恒温培养振荡器，SCW-CJ-2FD超净工作台，GZX-9146MB干燥箱，YXQ-LS-75SⅡ自动压力灭菌器，FA2104电子分析天平，PHS-3C酸度计。

1.2 方法

1.2.1 培养方法 将斜面母种在斜面培养基上活化1次，培养7 d。取100 mL液体培养基注入300 mL的三角瓶中，121℃灭菌30 min，冷却后无菌操作接入4块1 cm×1 cm斜面菌块，静置24 h，18℃温度下进行振荡培养。恒温培养振荡器转数150 r/min，培养6～8 d，测定菌丝干重。

1.2.2 菌丝干重测定 用40目细胞筛过滤收集菌丝球，用纯化水清洗3次，在80℃烘干至恒重，称量菌丝干重。

1.2.3 液体菌种培养时间确定 摇瓶菌种培养1、2、3、4、5、6、7、8、9 d 后，对液体菌种菌丝球干重进行检测。

1.2.4 液体菌种培养基的起始pH值确定 分别将液体培养基的起始 pH 值调至 4、5、6、7、8、9，进行液体菌种培养，摇瓶菌种培养6、7、8 d，对液体菌种菌丝干重进行检测。

1.2.5 液体菌种培养基不同培养温度的确定分别在 12、14、16、18、20、22、24 ℃ 条件下进行液体菌种的培养，菌种培养6、7、8 d，对液体菌种菌丝干重进行检测。

1.2.6 瓶栽试验方法 ①培养料配制:按照培养料配比使培养料含水量达到62% ～65%，搅拌15 min。将搅拌后的培养料装瓶，压盖和装车;②培养料灭菌及冷却:将栽培瓶进行高压灭菌，冷却，使温度降至14～17℃;③接种:用液体菌种接种机，将液体菌种接种至培养瓶中，接种量为30 mL;④菌丝培养:将接种后的培养瓶转移至培养室，进行黑暗培养，温度15～20℃之间，湿度60% ～65%，适当通入新风，CO2浓度在4 000×10－6以下，培养天数为22～25 d;⑤搔菌洗菌:培养瓶中菌丝长满后，进行机械搔菌洗菌，去掉老化菌层;⑥催蕾期:温度控制在14～17℃范围之内，湿度90% ～95%，给予一定散射光，光照以600～800 LX为宜，8～10 d;⑦抑制期:温度逐步降至3～5℃，湿度90%，7～8 d;⑧育菇期:温度控制在8～10℃，湿度 90% ～95%，9～10 d，通风量降低;⑨采收加工:当幼菇长到适宜大小，进行采收和加工。

1.2.7 培养料配方 配方Ⅰ:玉米芯40%，米糠55%，玉米粉2%，甜菜渣2%，轻质碳酸钙1%;配方Ⅱ:玉米芯55%，米糠40%，玉米粉2%，甜菜渣2%，轻质碳酸钙1%;配方Ⅲ:玉米芯45%，米糠45%，玉米粉2%，甜菜渣2%，轻质碳酸钙1%。

2 结果与分析

2.1 不同碳源对白色金针菇菌丝生长情况的影响

由表1可知，不同碳源对白色金针菇液体菌种的菌丝生长影响显著，液体培养基添加1.0%的白砂糖后，在第6、7、8天液体菌种菌丝干重相对较高，长势较快，而添加其他碳源的液体菌种菌丝干重较低，长势较慢。白色金针菇液体菌种选择碳源的顺序依次为:白砂糖、可溶性淀粉、葡萄糖、乳糖。

2.2 不同氮源对白色金针菇液体菌种菌丝生长情况的影响

在液体培养基中特别添加4%的蛋白胨、尿素、硫酸铵、豆粕粉4种不同氮源，接种培养，在第6、7、8天对液体菌种菌丝干重进行检测，结果见表2。因此，白色金针菇液体菌种选择氮源的顺序依次为:豆粕粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵。

表1 不同碳源对菌丝生长的影响Table 1 Effect of different carbon sources on mycelia growth of liquid spawn

表2 不同氮源对菌丝生长的影响Table 2 Effect of different nitrogen sources on the growth of mycelium of liquid spawn

2.3 培养时间对白色金针菇菌丝生长情况的影响

由表3可知，白色金针菇进行液体菌种培养时，摇瓶菌种培养第8天时菌丝体生长最好。

表3 培养时间对菌丝生长的影响Table 3 Effect of culture time on the growth of mycelium liquid culture

2.4 培养起始pH值对白色金针菇菌丝生长的影响

分别将液体培养基的起始pH值调至不同值，进行接种培养，摇瓶培养6、7、8 d，对菌丝干重进行检测，白色金针菇液体菌种在培养基起始pH值6～7时菌丝体生长最好，结果见表4。

2.5 培养温度对白色金针菇菌丝生长的影响

分别在不同温度条件下进行液体菌种的培养，菌种培养6、7、8 d对液体菌种菌丝干重进行检测，白色金针菇液体菌种在16～20℃生长旺盛，结果见表5。

表4 不同培养起始pH值对菌丝生长的影响Table 4 Different culture effect of initial pH value on biomass of mycelium

表5 不同培养温度对菌丝生长的影响Table 5 Effects of incubation temperature on the growth of mycelium

2.6 不同培养料配方对白色金针菇(瓶栽)菌丝生长情况的影响［5］

食用菌培养料的配方一般以当地资源情况而定，培养料处理更是食用菌栽培工艺中的重中之重，是栽培成败、产量高低的关键所在。根据本地资源情况，设计培养料配方，结果表明配方Ⅱ为最优，见表6。

2.7 培养料不同含水量对白色金针菇(瓶栽)菌丝生长情况的影响［6］

由表7可知，培养料含水量的高低对菌丝生长有较大影响，当含水量在55%以下时，接种后培养料表面容易失水，导致菌丝生长缓慢，且易污染。当含水量在70%以上时，培养料不易灭菌彻底，且瓶底部易积水，透气性不好。白色金针菇液体菌种培养料最适宜的含水量为60% ～65%，此时菌丝浓白健壮，且吃料快，封面和发满瓶时间短。

2.8 不同液体菌种接种量对白色金针菇液体菌种菌丝生长情况的影响［7］

每瓶装培养料750 g，经灭菌、冷却后，用液体接种机接入液体菌种。液体菌种接种量的不同，造成培养料中菌丝体封面、发满瓶的时间也不同，由表8可知当液体菌种接种量在每瓶(30±2)mL时，4 d菌丝就能铺满整个料面，降低了污染的风险;发菌满瓶时间最短。当液体菌种接种量在(20±2)mL时，因接种量少，菌丝含量就少，菌丝萌发点相对也少，封面慢，容易造成污染，导致发满瓶延长。当液体菌种接种量在(40±2)mL时，菌丝含量多，封面快，但因为是液体菌种，增加了培养料的含水量，透气性变差，瓶底部容易积水，导致底部发菌缓慢。因此，液体菌种最适宜的接种量为(30±2)mL。

表6 不同培养料配方对菌丝生长情况的影响Table 6 Effect of different culture medium on growth of mycelium of liquid spawn

表8 不同液体菌种接种量对菌丝生长情况的影响Table 8 Effect of different liquid spawn inoculation amount of mycelia growth of liquid spawn

3 讨论

食用菌液体菌种的优势是缩短发菌时间，菌种质量有较大提高，菌种生产成本低、效率高。影响液体菌种的因素有母种、制种设备、液体培养基配方、接种温度和时间、接种量及培养料配方等。根据白色金针菇液体菌种在工厂化生产中应用的研究可知，供试白色金针菇菌种适宜的液体培养基配方为豆粕粉4%，白砂糖1%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，VB110 μg/100 mL，VB250 μg/100 mL;恒温培养振荡器转数150 r/min，培养8 d，液体菌种适宜的培养温度为16～20℃，适宜的pH值为6～7;液体菌种适宜的培养料配方为:玉米芯55%，米糠40%，玉米粉2%，甜菜渣2%，轻质碳酸钙1%;适宜的培养料含水量为60% ～65%;接种量为:(30±2)mL。在上述条件下，液体菌种发菌速度较快，也易分化形成子实体原基。结果表明，将液体菌种技术应用于白色金针菇的工厂化生产是可行。在白色金针菇工厂化生产中应用液体菌种技术取代了传统固体菌种，不仅菌种生产操作简单、方便，且成本低。因菌丝萌发点多，封面好，发菌满瓶时间短，可降低栽培种污染率，同时大大缩短生产周期，提高了出菇的均一性，有效地提高了白色金针菇工厂化生产的产量和质量。

［1］ 孙字峰，沙长青，于德水，等.金针菇功能性蛋白的研究进展［J］.微生物学杂志，2006.26(4):15-17.

［2］ 刘冬，李世敏，许柏球，等.灵芝菌丝体深层液体发酵培养基研究［J］.微生物学杂志，2001，21(2):15-17.

［3］ 张引芳.食用菌工厂化生产中液体菌种的应用研究进展［J］.菌物学报，2007，26(1):393-397.

［4］ 马瑞霞，姚献华，伟芳华.白色金针菇液体菌种生产技术研究［J］.中国食用菌，2005，24(6):16-17.

［5］ 王守现，刘宇，耿小丽，等.白色金针菇不同配方品比试验研究［J］.食用菌北方园艺，2007，(9):228-229.

［6］ 朱家骝.金针菇液体菌种培养基及培养条件试验［J］.浙江食用菌，2009，17(4):26-27.

［7］ 张文武，刘艳，邵小军，等.金针菇液体与固体菌种制作及栽培对比试验［J］.中国食用菌杂志，2012，31(5):65.