骨康胶囊中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量测定

宣伟东，陈海飞，万雅，卞 俊

(中国人民解放军第四一一医院药学科，上海 200081)

骨康胶囊为我院骨科临床应用多年的自制制剂，由生姜提取物、硫酸软骨素及氨基葡萄糖等成分组成。氨基葡萄糖为骨关节炎治疗药物，硫酸软骨素为酶水解产物，具有良好的软管营养作用[1]。该产品中加入了生姜提取物，其中的姜酚、姜烯类活性成分氨基葡萄糖和硫酸软骨素对关节炎的治疗起到了良好的协同作用，但同时也为上述两种成分的含量测定带来了极大干扰。为控制该制剂的质量，笔者采用分光光度法，分别以Elson－Morgan法、咔唑法测定骨康胶囊中的氨基葡萄糖和硫酸软骨素的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

UV－2550型分光光度计(日本岛津公司)，AB104－N型电子分析天平(梅特勒－托利多公司)。氨基葡萄糖标准品(批号为100812)、硫酸软骨素标准品(批号为110206)均由中国药品生物制品检定所提供;骨康胶囊(医院自制);其他试剂(乙酰丙酮、浓硫酸、咔唑、对二甲氨基苯甲醛)均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

试液:乙酰丙酮试液，取乙酰丙酮2 mL，加至50 mL碳酸钠溶液中，临用前1 d配制并冷藏。对二甲氨基苯甲醛试液，称取对二甲氨基苯甲醛0.8 g，加无水乙醇和12 mol/L盐酸各15 mL，混匀，即得。咔唑试剂，称取50 mg，溶于50 mL 95%乙醇中，充分摇匀，即得。上述试液均须临用前新鲜配制。

标准品溶液:分别精密称取经105℃干燥恒重后的氨基葡萄糖、硫酸软骨素对照品各8，15 mg，分别置100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，定容，摇匀，分别制得质量浓度为80，150 μg/mL的标准品溶液。

供试品溶液:本品每粒胶囊中标示含氨基葡萄糖330 mg、硫酸软骨素60 mg、生姜提取物30 mg。为避免生姜提取物对含量测定的干扰，须先进行预处理。取本品6粒，倒出内容物，合并，混匀，称重。精密称取42 mg内容物，加蒸馏水10 mL，超声溶解，过滤，残渣用蒸馏水10 mL分3次洗涤，滤液转移至100 mL分液漏斗，用二氯甲烷10 mL分2次萃取，分取水层，转移至50 mL容量瓶中，加蒸馏水定容后混匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2 方法学考察

线性关系考察:精密量取氨基葡萄糖标准品溶液 0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别置 10 mL 带塞试管中，加蒸馏水定容至5 mL，分别加1 mL乙酰丙酮试液，混匀后置沸水浴中乙酰化15 min，冷却，分别加入3 mL无水乙醇和1 mL对二甲氨基苯甲醛试液，振摇，60℃水浴1.5 h，冷却至室温。以不含氨基葡萄糖的空白溶液为参比，照分光光度法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅤA]，在520 nm波长处测定反应液的吸收值，以氨基葡萄糖含量(μg)为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为 Y=0.003 6 X －0.026，r=0.999 6。结果表明，氨基葡萄糖含量在40～200 μg范围内与吸光度线性关系良好。精密吸取硫酸软骨素标准品溶液 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL，分别置 10 mL带塞试管中，加蒸馏水定容至1 mL，加浓硫酸6 mL，混匀后置85℃温浴20 min，冷却至室温，分别加入咔唑试剂0.2 mL，振摇，室温放置2 h。以不含硫酸软骨素的空白溶液为参比，照分光光度法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅤA]，在530 nm波长处测定反应液的吸收值，以硫酸软骨素含量(μg)为横坐标、吸收度为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 Y=0.001499X+0.01292，r=0.999 8。结果表明其含量在15～120 μg范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验:取氨基葡萄糖和硫酸软骨素标准品溶液各1.0 mL和0.5 mL，分别依法连续测定5次。结果的 RSD分别为1.36% 和2.12%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密量取同一批供试品(批号为110628)溶液适量，照上述方法操作，分别在反应结束后每隔1 h测定反应液的吸光度。结果氨基葡萄糖的吸光度在4 h内稳定，RSD为0.52%，6 h内 RSD 为 3.60%，8 h内 RSD 为 6.78%;硫酸软骨素的吸光度在 4 h内为 1.38%，6 h为 5.13%，8 h内为 8.40%。表明两者经显色反应后，反应液在4 h内稳定性良好。

重复性试验:按2.1项方法平行制备6份同一批号的骨康胶囊供试品溶液(批号110628)，按含量测定方法操作，测定含量。结果氨基葡萄糖、硫酸软骨素的平均含量分别为98.4%和97.5%，RSD分别为0.81%和1.21%，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品内容物6份，每份21 mg(批号为110628)，依法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置于10 mL容量瓶，加水定容，摇匀。精密量取上述溶液1 mL，分别精密加入相当于其含量80%，100%，120%的氨基葡萄糖标准品溶液，照上述方法操作，测定氨基葡萄糖含量，计算回收率。同法精密量取供试品溶液0.5 mL，精密加入适量的硫酸软骨素标准品溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 氨基葡萄糖、硫酸软骨素加样回收试验结果(n=6)

2.3 样品含量测定

精密吸取供试品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸馏水定容，混匀。精密吸取吸取上述溶液、氨基葡萄糖标准溶液以各1 mL，分别置10 mL带塞试管中，加蒸馏水定容至5 mL，另取一支10 mL带塞试管，加蒸馏水定容至5 mL。上述3支试管照2.2项下方法操作，依法测定吸收度，计算样品中氨基葡萄糖的含量。精密吸取硫酸软骨素标准溶液和供试品溶液各0.5 mL，分别置10 mL带塞试管中，加蒸馏水定容至1 mL。另取一支10 mL带塞试管，加蒸馏水定容至1 mL。上述 3支试管照2.2项下方法操作，依法测定吸收度，计算样品中硫酸软骨素的含量。3批制剂含量测定结果见表2。

表2 3批制剂含量测定结果[含量(mg/粒)/%]

3 讨论

本品主要成分为氨基葡萄糖、硫酸软骨素和生姜提取物。生姜中姜酚、姜烯等辛辣成分具有活血化瘀、消炎止痛的功效，与氨基葡萄糖、硫酸软骨素合用，可以起到良好的协同作用，临床对骨关节炎优良的治疗效果也证实了这一点。含氨基葡萄糖和硫酸软骨素的制剂多采用Elson－Morgan法[2]、咔唑法[3]或高效液相色谱法[4]进行含量测定，但本品中含有生姜提取物，其易氧化的姜酚、姜烯类成分其对上述方法均可产生极大的干扰。为解决这一问题，在制备供试品溶液时，先用二氯甲烷萃取生姜中的脂溶性成分，再用Elson－Morgan法测定氨基葡萄糖、咔唑法测定硫酸软骨含量。结果表明，这一方法可有效降低生姜成分对测定的影响，同时氨基葡萄糖对硫酸软骨素的测定未产生干扰。该法准确度高，回收率好，简单可靠，适合样品中氨基葡萄糖和硫酸软骨素的快速含量测定。

[1]刘宪峰，王 贞，李稳强.硫酸软骨素双酶法生产新工艺[J].中国药业，2010，19(22):55 －56.

[2]翟咏红，万丹晶.氨基葡萄糖和硫酸软骨素含量测定方法的建立[J].中国药业，2005，14(4):44－45.

[3]齐敬总，闫晓玲.硫酸软骨素含量测定方法介绍[J].中国生化药物杂志，2002，23(3):162 －164.

[4]林燕飞，孙静芸.HPLC－ELSD法测定复方氨基葡萄糖片中硫酸软骨素的含量[J].中国现代应用药学杂志，2006，23(5):388－390.