规模化猪场蓝耳病监测技术分析报告

成仲庚

（湖南娄底职业技术学院，湖南娄底417000）

1 前言

高致病性蓝耳病（PPRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PPRSV）引起的以母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道症状为主要特征的一种高度接触性传染病，有高发病率、高死亡率、传染速度快、耐过猪生长速度慢、成活率低等特点，因发病后猪两耳出现短暂性的紫绀现象而称为蓝耳病。本病发生后常破坏猪的免疫系统，导致猪的抵抗力低下而容易继发其它疾病如猪瘟、伪狂犬病、猪圆环病、猪细小病毒病、猪附红体病、猪乙型脑炎等病，已成为影响和制约现代养猪业正常发展的重要因素。

娄底及周边地区是湖南主要的生猪生产基地，有数百家规模化养殖场及大量的散养户，近年来，猪蓝耳病、猪瘟、猪附红体病及猪圆环病等疾病时有发生，给养猪来造成了巨大的经济损失。然后，养殖场及散养户对疫病普遍存在重免疫却轻视免疫监测的现象，有的养殖场年年免疫，年年发病，有的即使进行了多次的强化免疫，效果却差强人意。发生这些现象多与饲养管理不善、卫生消毒工作不严格、免疫措施不合理，以及没有进行免疫结果监测有关。本课题组通过对娄底及周边地区

十个规模化养殖场的猪蓝耳病免疫情况进行调查及抗体监测，分析了不同监测技术的检测效果。针对目前在规模化养殖场蓝耳病预防存在的一些问题，我们提出了本病的预防应该建立在免疫监测抗体水平的基础上进行，即根据抗体水平高低采取针对性的措施。在免疫监测上，选用了间接血凝试验和ELISA试纸法，对已免疫和未免疫的养殖场的各种猪采取血清进行了对比试验。根据其检测结果，对两种监测技术进行分析，从而比较两种监测技术的优缺点，为养殖场的抗体监测和免疫提供依据。

2 材料和方法

2.1 材料

试验猪选自娄底周边地区10个规模化猪场；诊断液和对照液（阳性和阴性血清）、猪蓝耳病正向间接血凝标准致敏红细胞稀释液,均购自深圳某生物科技有限公司；蓝耳病弱毒苗和灭活苗购自广东某生物制药有限公司。

2.2 蓝耳病免疫方法

蓝耳病免疫方法见表1。各猪场使用的①号苗为弱毒苗，②号苗为灭活苗，免疫程序为：种公猪、种母猪每年注射三次；后备母猪配种前6周注射一次，配种前4周再注射一次；仔猪断奶前一周注射一次，四周后再注射一次；以上注射用量均为每次一头份（2 mL）。而9、10号猪场为猪蓝耳病阴性猪场，未进行猪蓝耳病疫苗注射。

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2.3 抗体检测

2.3.1 间接红细胞凝集试验

（1）采样：对猪采取耳静脉采血，每头猪采血6 mL用于间接凝集试验和ELI SA诊断，编号后并于阴凉处静置使其血清析出，公猪采样率为100%，后备母猪采样数量占存栏数量20%，在产母猪采样数占存栏数量15%以上。商品猪采集样本数量应占存栏数量的5%以上。

（2）材料：诊断液和对照液（阳性和阴性血清）；猪蓝耳病正向间接血凝标准致敏红细胞稀释液；待检血清。

（3）操作方法：将待检血清放入65℃水浴中灭活半小时，先于V型血凝板上每孔中加入20 μL稀释液，然后再取20 μL待检血清加入第一孔，充分混合，取出20 μL放人第二孔混匀,依次到第九孔,取出20 μL弃掉。血清稀释度从第一至第九孔分 别 为 1：2,1：4,1：8,1：16,1：32,1：64,1：128,1：256,1：512，第10孔为阳性血清对照、第11孔为阴性血清对照，第12孔为抗原对照。每孔加入20 μL致敏红细胞,振荡1～2分钟,置37℃温箱2小时，判定检测结果。

（4）结果如表 2。

（5）判断标准

以出现50%凝集的血清最高稀释度为该血清的间接血凝价，抗体效价在1∶16阳性血清对照组抗体效价为1：512，阴性血清不发生凝集，即可判为抗体阳性，抗体效价达到1∶256为抗体水平高，可以抵抗野毒的侵袭。

2.3.2 ELISA诊断

（1）材料准备：耳病抗体ELISA检测试剂盒,编号RS 040117 A，购自深圳某生物科技有限公司。血清取自间接血凝试验所采样的血清。

（2）操作方法：按ELISA检测试剂盒说明书上操作方法进行。

（3）结果判断。

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仪器判断：以空白对照调零用酶标仪于450 n m（620 n m作参比波长）读取O D值，待检孔O D值大于阴性对2.1倍者为阳性。当阴性对照O.D值低于0.07时按0.07计算。

S/P值的计算。S/P＝（待检样品的平均值-阴性对照的平均值）/（阳性对照的平均值-阴性对照的平均值）。S/P<0.150为阴性,S/P在0.150到0.199为可疑,S/P≥0.2为阳性。

（4）结果如表3。

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3 结果分析与讨论

3.1 试验按操作规程严格操作

间接血凝试验与ELISA试验符合率达99.69%，表现了高度的符合性，敏感性略低于ELISA，但操作方法简单，检测成本低，适用于基层技术条件低、操作技术水平较差的人员操作，可用于大规模的血清流行病学的调查和抗体水平的监测；而ELISA试剂盒具有灵敏性高，特异性强，稳定性良好的特点，能使检测结果更加准确，可以真实的反映出猪蓝耳病抗体水平的高低。但操作中加样量小，手工操作要求精准，工作温度及洗板都可能对检测结果产生影响，因此技术要求高，必须严格按操作规程进行操作。

3.2 免疫合格率低的原因

注射了疫苗的养殖场的阳性率都比较高，但即抗体效价在1∶256及以上的较少，因而其免疫合格率低，此种现象可导致大部分猪只缺乏抵抗野毒的侵袭。究其原因，可能与下列因素有关：

（1）免疫压力过重。在所调查的十个养殖场中，口蹄疫、猪瘟、猪细小病毒病、猪传染性腹泻等疾病时有发生。为慎重起见，往往给猪接种多种疫苗，而且多种疫苗接种的间隔时间过短，疫苗之间产生干扰作用，不仅使免疫应激加重，而且使免疫压力过重，从而导致免疫失败。

（2）环境污染严重。养殖场普遍存在饲养密度高的问题，特别在冬季，由于门窗紧闭，通风不良，粪便打扫不干净或未能及时清扫，致使氨气及硫化氢等有害气体浓度升高，导致呼吸系统受到不良刺激，使猪群健康状况下降，种母猪多关于定位栏中进行饲养，缺乏活动，身体抵抗力差，应激频繁，使机体的免疫应答能力降低，其抗体始终处于较弱水平，造成免疫失败。因此要控制蓝耳病，不能完全依赖疫苗，而应采取综合措施。

（3）防疫程序不合理。一直以来，对猪蓝耳病的免疫程序都较混乱，经蓝耳疫苗免疫后的母猪所产仔猪在出生后体内往往存在母源抗体，如在母源抗体浓度高的时候就注射蓝耳病疫苗，不仅不会产生免疫效果，反而会引起抗体水平下降，因此，对仔猪的免疫注射时间的选择要建立在抗体水平监测的基础上进行，但养殖场往往均是凭经验选择时间，这样就会导致抗体效价不高，疫苗失去保护作用。免疫时应根据各猪场的具体情况进行适时免疫。合理的免疫程序是弱毒苗和灭活疫苗相结合的方式。用产生抗体较快的弱毒苗作为基础免疫，用灭活疫苗进行加强免疫。

（4）未按操作规程进行注射疫苗。养殖场在进行疫苗免疫时操作不规范，消毒措施不严格也是造成免疫效果不好的原因之一。大部分的养殖场虽然有专门的技术人员负责疫苗注射。但实际操作起来往往是由饲养人员进行注射，在注射时针头没有做到一猪一针，注射部位不准确，注射深度不够，注射用量得不到保证，注射时针头和注射部位未进行消毒或消毒不严格，有的甚至采取打“飞针”进行注射，也会造成免疫效果不佳。

3.3 加强猪场蓝耳病监测

本次采样的9号和10号猪场分别是建场一年和三年的新猪场，未曾发生过猪蓝耳病，因些未进行蓝耳病疫苗的注射。但从抗体检测结果来看，虽然绝大多数为阴性，也有小部分为阳性，但抗体效价低，不足以抵抗强毒的侵袭。因此要加强对本病的监测，如有本病发生的可能，要及时进行免疫接种，采取相应措施，预防本病的发生，避免造成不必要的经济损失。 □