口腔微生物学实验课程三年教学总评分析

聂 敏，李汉萍，曾 垦，陈 东，陈 冬，易安华，闵智鹏，魏 萍

(1.湖北省口腔基础医学重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地口腔生物医学教育部重点实验室(武汉大学)，湖北武汉 430079;2.中建三局武汉中心医院口腔科，湖北武汉 430070

口腔微生物学属于微生物学和口腔医学的交叉学科，涉及微生物学、龋病学、牙体牙髓病学、牙周病学;具有突出的专业特点，与口腔临床紧密相连。口腔微生物学内容包括口腔生态系及其影响因素、牙菌斑和生物膜、口腔正常菌丛、口腔微生物学研究的主要方法［1］。根据专业特点和学科发展，仅仅停留在传统的理论课的教学是远远不够的，不能满足和适应现代临床医学教育的需要和发展［2-3］。增设口腔微生物学实验课，根据口腔医学特色设计实验，是我校教学改革的一部分。教学目的是加深学生对口腔微生物生态系统的认识，加深对疾病发生机制的理解，培养学生的科研兴趣和能力。本文总体分析了2009～2011年三年度教学的实验结果，授课对象为高等教育第四年学生。

1 材料与方法

1.1 牙菌斑的采集和致龋菌的首次分离

采用两两配对模式，学生互相临床取样。清水漱口去净口腔内食物残渣，用无菌牙签或探针采集窝沟菌斑或唇、颊面菌斑;将标本收集在保存液的EP管中。先后采用漩涡振荡和超声震荡，使菌斑或细菌团块分散。将分散的菌斑标本作10倍系列稀释，一般作102倍和103倍，稀释过程均要求无菌操作。选用MS琼脂选择性培养皿表面划线接种，85%N2，15%CO2，37 ℃ 厌氧培养48 h。解剖显微镜下观察初代培养平皿上的菌落，分辨致龋性和非致龋性细菌，记录菌落形态特征，包括形态、大小、厚薄、边缘、透明度、颜色等。

这一部分既是基础技能的考验，也是口腔临床专业技能的培训。牙菌斑的采集是分离鉴定细菌的首要步骤，考验学生的口腔检查操作技能;无菌操作和划线培养实验考察微生物基础实验能力。见表1。

表1 实验一评分标准Table 1 Rating criteria of the first experiment

1.2 致龋菌的次代纯化培养

从初代培养板上挑取典型的变异链球菌菌落，在无菌条件下接种于BHI液体培养基，一式2份，厌氧培养24 h。这一部分反映了学生的微生物学实验的基本技能，前一评分“C”的学生补充菌源。见表2。

表2 实验二评分标准Table 2 Rating criteria of the second experiment

1.3 革兰染色

取纯化致龋菌的培养液做革兰染色，实验反映了学生的微生物学实验的基本技能。见表3。

表3 实验三评分标准Table 3 Rating criteria of the third experiment

1.4 致龋菌的生化鉴定

无菌操作下，取液体培养基培养的10 μL菌液做生化鉴定，分别加入甘露醇、山梨醇、棉籽糖、蜜二糖、精氨酸糖管，厌氧培养24 h，观察、分析实验结果，总结成功和失败的原因，发挥学生科研积极性。这一部分反映了学生的综合能力和创新能力。5个生化糖管的结果评价见表4。

表4 实验四评分标准Table 4 Rating criteria of the fourth experiment

1.5 总评

总体分析2009～2011年三年度教学的实验结果，授课对象为高等教育第四年应届生151人，其中2009年40人，2010年55人，2011年56人。

2 结果

统计结果见表5。

实验一通过对口腔“牙菌斑的采集和致龋菌的首次分离”，在教师的指导下，能够培养并反映学生最初的基础能力、专业能力、创新能力和综合能力，通过实验教学，能够成功培养出致龋菌的学生有56.3%，而31.3%的学生失败。

表5 口腔微生物学实验课结果评估Table 5 Overall assessment of oral microbiology experiments

实验二和实验三属于微生物次纯代培养，实验流程设计不复杂，重在与学生的交流，培养学生的基础实验能力和科研习惯，对实验一失败的学生补充菌源，成功率达80%左右。

实验四是鉴定致龋性微生物，培养学生的基础能力、专业能力、创新能力和综合能力，通过前面的教学组建让学生掌握口腔微生物实验的流程、技术和设计。成功的学生达78.2%，比实验一提高;而失败的学生显著下降到4.6%。

综合整个教学结果，口腔微生物学实验课程培养整体提高了学生的实验实践能力。

3 讨论

口腔菌丛是人体各种菌丛中最复杂的一种，正常菌种中的常居菌可以分离出50～200种不同的细菌。微生物是龋病牙周病的重要病因之一，个体的差异和环境的微进化，导致了不同的菌群变化、相关优势菌致病［4］。变异链球菌是公认的致龋性细菌［5］，通过实验的整体设计和教学的完整流程，加深学生对理论知识的理解，有利于培养学生的专业技能和科研能力，引导学生的创新能力，发挥其主观能动性［6］。

口腔微生物学实验教学体系的特点是:四个实验教学模块同时交替，即基础实验、专业实验、综合实验、创新实验［6］。系列实验实际授课15个学时/班。

本课程需要学生已经掌握微生物学实验的基本操作技能，如:培养基的制备、器皿和培养基的灭菌、无菌操作技术、显微镜的操作、细菌染色、细菌的分离等。所以，教学评估包括了学生最根本、最基础的实验能力。如，有学生体会到:“在无菌操作过程中，我发现操作的敏捷性和划线的手法比较重要，同时也要注意无菌操作的原则，这样实验才可以成功”。

本课程突出专业技能训练，如:口腔检查、牙菌斑的临床取样。根据口腔医学特色，体现了学科专业性，培养学生适应口腔医学发展需要的专业基本技能，重点解决如何应用专业知识的能力培养。专业实验是开设本课程的特色，反映了学生的专业技能［6］。如，有学生体会到:“在这次实验中，我是属于比较幸运的，虽然涂布的培养基中长出来的菌落比较少，但都是变链的菌落，主要还是取样比较到位。但是，做实验不能仅仅凭借着侥幸心理，对于实验的各个步骤都应该牢固地掌握。”

本课程突出综合能力训练，注重研究性设计。通过整合基础医学和口腔临床医学，整合微生物学和龋病学、牙周病学，拓展学生的视野，引发学生思考。如:对致龋菌的培养，如果菌斑取样不成功，就不能分离到变链菌;如果细菌液体培养失败，就不能鉴定致龋菌。综合实验是开设本课程的优势，是学科内不同专业的综合实验。如，有学生提交报告:“对无菌操作、规范操作的要求很高，这几步一步出现问题，最终的结果可能就会失败，而且无法挽回。这些在理论课上很难学到的，而这也许就是实验课的一个目的吧。”

本课程重视科学思维、研究能力和创新意识的培养。教师提出实验目标，学生自主选择，基于上面的3个环节进行专题讨论和综合分析。比如，牙菌斑的选择性培养失败了，学生能否创新地想到培养唾液链球菌，比较一下致龋菌和非致龋菌的差别。创新实验是开设本课程的最有趣的内容，最能够开发思维，最能够发挥学生的创新能力和科研能力［7-9］。如，有学生的报告里写道“这个细菌分离鉴定实验很好，可为我们以后的细菌相关实验提供一些思路。”

经过3年的教学积累和不断探索，积累了一些教学经验，经过整个实验的教学，学生不仅专业和科研的综合能力大幅提高，而且对自己的口腔健康也提高了意识。如，有学生的实验报告总结说:“使用MS培养基成功地培养出了变异链球菌，可见变异链球菌为口腔正常菌群，但当其比例增加时就有患龋的可能，所以要注意平时的口腔卫生保健。”

通过3年教学的总评，增设口腔微生物学实验课程有助于提高口腔医学教育质量，作为理论课的延伸，与理论教学相辅相成，有助于培养适应新世纪要求的高素质创新型的医学人才。

［1］边专主编.口腔生物学(第4版)［M］.北京:人民卫生出版社，2012.

［2］卢捷湘，金龙玉，何庆南，等.临床技能实验教学示范中心的建设和实践［J］.实验技术与管理，2010，27(7):1-3.

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［4］樊明文主编.牙体牙髓病学(第3版)［M］.北京:人民卫生出版社，2010.

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［6］徐平.搭建文科综合实验平台培养文科复合创新人才(续)［J］.实验室研究与探索，2010，29(7):1-5.

［7］何晓凡，秦晓群，杨绿化，等.医学机能学国家级实验教学示范中心的建设与发展［J］.实验技术与管理，2010，27(7):7-10.

［8］陈莉，王小明，斯琴，等.基础医学学生主动认识疾病实验课教学模式探讨［J］.基础医学与临床，2006，26(4):441-443.

［9］张燕，杜磊，王月丹，等.基础医学实验教学中心在创新型医学人才培养中的建设与效果评价［J］.实验技术与管理，2010，27(7):4-6.