胃镜活检与外科病理诊断胃癌及HER2检测的对比研究

冼丽英

胃镜活检与外科病理诊断胃癌及HER2检测的对比研究

冼丽英①

目的：评估对比配对的胃腺癌活检标本及外科病理手术标本临床病理学特征及HER2表达，研究其异质性并评估临床意义。方法：选取2011年1月-2013年1月本院诊断的胃食管交界区普通型腺癌内镜活检标本及相应的肿瘤手术切除标本患者98例，并收集相应的临床病理学资料，用免疫组化（IHC）及原位荧光杂交（FISH）法检测内镜活检标本及相应的肿瘤手术切除标本HER2蛋白过表达和基因扩增情况，观察并分析其异质性表达的情况，分析临床病理学特征，评估临床意义。结果：98例胃腺癌患者中免疫组化HER2阳性16例（16.3%），FISH HER2阳性14例（14.3%），12例（75%）免疫组化HER2阳性胃腺癌组织中HER2呈现明显异质性，而FISH检测HER2阳性胃腺癌组织中仅有5例（41.7%）。结论：HER2在胃癌组织中呈现明显的异质性；活检标本能良好地预测胃癌手术标本HER2表达，应该对活检标本进行HER2检测。

胃镜活检； 外科病理诊断； HER2； 胃癌确诊

胃癌是最常见的癌症之一，尽管胃癌在世界范围内的发病率有所下降，但它仍然是继肺癌之后死亡率居第二位的高发性肿瘤[1]。我国和日本、智利、芬兰、冰岛等国家同是胃癌的高发区，发病率6～8倍于西方国家。目前，手术切除仍然是治疗早期胃癌的主要手段。但对晚期胃癌，尽管治疗方法很多，如手术、化疗、放疗等，但患者的存活率仍很低。ToGA研究证实曲妥珠单抗联合化疗可改善HER-2/neu阳性晚期胃癌患者的生存[2]。本研究的主要目的是评估对比配对的胃腺癌活检标本及外科病理手术标本临床病理学特征及HER2表达，研究其异质性并评估临床意义，因此选取2011年1月-2013年1月本院诊断的胃食管交界区普通型腺癌胃癌内镜活检标本及相应的肿瘤手术切除标本患者98例，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年1月-2013年1月在本院接受治疗的胃癌患者的胃镜活检标本及相应的肿瘤手术切除标本98例，并收集相应的临床病理学资料。其中男52例，女性46例，年龄65～78岁，平均年龄（52.2±3.5）岁。所有标本均经10%的中性福尔马林液中固定，石蜡包埋，常规HE染色。所有HE切片均在光镜下观察进行病理诊断及分型。

1.2 试剂和方法 采用兔抗HER-2单克隆抗体（ZA-0023，即用型）和En-Vision试剂盒（二抗试剂），以及HER-2荧光原位杂交试剂。

1.2.1 免疫组织化学染色 按照使用说明，以胃腺癌阳性片做阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 荧光原位杂交技术 组织切片经二甲苯脱蜡、复水、高温清洗25 min后，采用蛋白酶100 mg/L，在K37 ℃条件下作用5～28 min，后用体积分数1%甲醛固定，作用10 min，再用梯度乙醇脱水，加入混合液10 μL，使之变性。用乙醇清洗3 min，保持室温条件，待其干燥后，加入10 μL DAPI复染剂复染密封，作用时间20 min后，于荧光显微镜下观察。

1.2.3 Her-2过表达的分析方法 采用Hercep Test进行IHC检测分析并根据修订的评分系统进行评分[3]。此评分系统中，IHC3+为Her-2阳性，IHC+及IHC-为Her-2阴性。Her-2阳性染色呈棕黄色颗粒，位于细胞膜。无着色/少于10%肿瘤细胞有细胞膜着色（0/阴性）；大于10%的肿瘤细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色（1+/阴性）；大于10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的细胞膜着色（2+/不确定）；大于10%的肿瘤细胞呈现强的、完整的细胞膜着色（3+/阳性）。

1.2.4 FISH结果判定 选择细胞核大小一致、胞核边界完整、染色均一、细胞核无重叠、绿色CSP17信号清晰的细胞，随机计数至少20个癌细胞核中双色信号。判读标准：（1）红色信号总数与绿色信号总数比值＜1.8提示无扩增，比值＞2.2提示HER2基因扩增；（2）若众多信号连接成簇时可不计算，视为基因扩增；（3）若比值位于1.8～2.2之间，则需再计算20个细胞核中的信号或由另外一个分析者重新计数。

1.3 统计学处理 采取统计学软件SPSS 19.0对数据进行分析和处理，计数资料采取率（%）表示，组间率对比采取 χ2检验及非参数Kruskal-Wallis检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌HER2基因扩增患者与HER2阴性患者的临床病理学特征比较 统计显示，HER2阴性患者比例与患者年龄与性别、TMN分期和病理分级均无统计学意义（P＞0.05），HER2阴性患者比例与Lauren分型相关（P＜0.05），见表1。

表1 胃癌HER2阳性患者与HER2阴性患者的临床病理学特征比较

2.2 标本中免疫组化与FISH方法检测HER2的比较 98例胃腺癌患者中免疫组化HER2阳性16例（16.3%），FISH HER2阳性14例（14.3%），见表2。

表2 胃镜活检标本与外科病理标本中免疫组化与FISH方法检测HER2的比较

2.3 免疫组化与FISH的HER2检测比较 98例患者中，以免疫组化评分为基准，其中胃镜活检标本中FISH阴性符合率为88.8%，外科病理标本符合率85.7%，见表3。

2.4 肿瘤异质性被定义为可观察到肿瘤不同区域IHC不同评分和FISH不同的HER2基因扩增。12例（12/16， 75%）免疫组化HER2阳性胃腺癌组织中HER2呈现明显异质性，而FISH检测HER2阳性胃腺癌组织中仅有5例（5/12，41.7%），见图1～2。

3 讨论

HER2/neu是癌基因又称cerbB-2基因，定位于人染色体17q21，与多种肿瘤发生发展相关。胃癌是最常见的癌症之一，据报道约20%的进展期胃癌有HER2过表达或扩增。国际多中心随机对照Ⅲ期临床研究（ToGA试验）结果显示，化疗联合抗HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌及胃食管交界腺癌患者的生存期[4-5]。目前，HER2检测方法主要包括免疫组织化学（IHC）及原位杂交（ISH），准确检测HER2的表达才能准确选择可能对该表面受体的靶向治疗，达到缓解病情的效果。但是胃癌和乳腺癌不同，胃癌中的肿瘤异质性更常见[6-7]。由于大多数患者发现癌时已不宜手术，用活检标本检测HER2成为最方便的选择。另外，也有研究显示，HER2是能够预测今后胃癌病情发展情况的一个重要预后因子，胃癌患者必须进行病理检测，明确HER2状态并及时采取针对性的治疗。

表3 胃镜活检与外科病理标本中免疫组化与FISH的HER2检测比较

图1 HER2 IHC（200×）

图2 HER2 FISH

已发表的胃癌HER2过表达率在8.2%～53.4%之间[8-9]。HER2阳性率的差异可能与研究人群的差异、组织固定与处理的不同、抗体的敏感性和特异性差异、不同的评分标准以及病理医生的主观性有关[10-11]。结合本次研究结果，98例胃腺癌患者中免疫组化HER2阳性16例（16.3%），FISH HER2阳性14例（14.3%），与上述研究的表达率符合，而且外科手术标本中IHC 与FISH的符合率比内镜活检标本的符合率高（分别为98.0%和91.8%）。

肿瘤异质性在大部分人类实体肿瘤中存在，是导致检测HER2状态偏差的主要原因。HER2基因扩增的肿瘤内异质性据报道为5%～30%[12-13]。本次研究12例免疫组化HER2阳性胃腺癌组织中HER2呈现明显异质性，而FISH检测HER2阳性胃腺癌组织中仅有5例，HER2在胃癌组织中呈现明显的异质性。肿瘤内异质性可能会影响病理医生对HER2的准确判读，同时也可能是IHC与FISH结果不一致和内镜活检标本和外科手术标本结果不一致的主要原因[14-15]。活检标本能良好的预测胃癌手术标本HER2表达，应该对活检标本进行HER2检测。本次研究结果与Gokce[14]等的研究结论基本相同，表明在胃癌诊断中，HER2检测具有重要的意义，值得临床重视和思考。

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Comparative Study of Endoscopic Biopsy and Surgical Pathology Diagnosis of Gastric Cancer and HER2 Detection

/XIAN Li-ying.//Medical Innovation of China，2014，11（21）：080-083

Objective：To evaluate contrast match biopsy specimens of gastric adenocarcinoma demonstrate mitoses and surgical pathology specimen clinical pathology characteristic and the expression of HER2，study its heterogeneity and to assess clinical significance.Method：98 patients who were diagnosed adenocarcinoma of the stomach esophagus border area type endoscopic biopsy specimens and the corresponding tumor patients with surgically resected specimens in our hospital from January 2011 to January 2013 were selected，and collected the corresponding clinical pathology data. The endoscopic biopsy specimens and the corresponding tumor resection specimens HER2 protein expression and gene amplification were detected by immunohistochemical（IHC） and fluorescence in situ hybridization （FISH） method，the expression of heterogeneity was observed and analyzed，the characteristic of clinical pathology was analyzed and the clinical significance was evaluated.Result：98 patients with gastric adenocarcinoma immunohistochemical HER2 positive were 16 cases（16.3%），FISH HER2 positive were 14 cases（14.3%），12 cases （75%） immunohistochemical HER2 positive HER2 in gastric adenocarcinoma tissue presents obvious heterogeneity，and FISH to detect HER2 positive gastric adenocarcinoma tissues was only 5 cases（41.7%）.Conclusion：The HER2 present obvious heterogeneity in gastric cancer tissues，biopsy specimen can well predict surgical specimens of gastric cancer HER2 expression，should HER2 detection on biopsy specimens.

Gastroscope biopsy； Surgical pathology diagnosis； HER2； Diagnosis of gastric cancer

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.21.026

2014-05-06） （本文编辑：欧丽）

①广东省东莞市人民医院 广东 东莞 523000

冼丽英

First-author’s address：The People’s Hospital of Dongguan City，Dongguan 523000，China