愈骨胶囊的薄层色谱鉴别

何腾龙，谭亚亚，孙艳霞

(1. 杨凌生物医药科技有限公司，陕西 西安 712100; 2. 西安正大制药有限公司，陕西 西安 710043)

愈骨胶囊是中医骨伤验方，由血竭、骨碎补、续断、牛膝、红花、元胡等组方。方中血竭活血化瘀、消肿止痛，为君药;骨碎补、续断、牛膝补肝肾、接骨续筋，为臣药;红花、元胡等活血化瘀、止痛，为佐使药[1]。口服愈骨胶囊治疗骨痹，疗效明显[2]，但缺乏质量标准研究。为有效控制该制剂的质量，现对处方中的血竭、大黄、三七、骨碎补、没药采用薄层色谱(TLC)法进行定性鉴别，为其质量标准的制订提供依据，现报道如下。

1 仪器与试药

KQ-500DE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Sartorius BS224S 型分析天平。血竭对照药材(批号为120906 -200609)、大黄对照药材(批号为120902-200408)、大黄素对照品(批号为110756-200110)、三七对照药材(批号为120941 -200807)、三七皂苷R1对照品(批号为110745 -200617)、柚皮苷对照品(批号为110722 -200309)、天然没药对照药材(批号为120967-200903)，均由中国药品生物制品检定所提供;愈骨胶囊(批号分别为110409，110410，110411)、阴性对照品，均由杨凌生物医药科技有限公司提供;硅胶G(青岛海洋化工厂);羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司);其他试剂均为分析纯，购自西安市化学试剂厂。

2 方法与结果

2.1 血竭

取本品内容物3 g，加乙醚50 mL，加热回流提取2 次，每次30 min，滤过，合并2 次滤液，挥干溶剂，加甲醇10 mL 使溶解，加在中性氧化铝柱(100 ～200 目，2 g，内径为1 cm)上，收集流出液，浓缩至约2 mL，作为供试品溶液。取按处方比例和工艺制备不含血竭的阴性对照品3 g，同法制成阴性对照品溶液。另取血竭对照药材0.1 g，加乙醚10 mL，密塞，振摇，放置10 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅥB 中薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(95∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点。见图1A。

2.2 大黄

取本品内容物5 g，加甲醇50 mL，盐酸5 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸至近干，残渣加水20 mL 使溶散，用乙醚提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干溶剂，残渣加甲醇1 mL，作为供试品溶液。取按处方比例和工艺制备不含大黄的阴性对照品3 g，同法制成阴性对照品溶液。另取大黄对照药材0.03 g，同法制成对照药材溶液;再取大黄素对照品，加乙醇制成每1 mL 含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。照2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅥB中薄层色谱法试验，吸取上述4 种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚(30 ～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ∶5 ∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外线灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后日光下检视，斑点变为红色，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点。见图1 B1和图1 B2。

2.3 三七

取本品内容物5 g，加甲醇100 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL 使溶散，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液;用氨试液20 mL，洗涤1 次，弃去水层，再用水洗涤2 次，每次20 mL，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。取按处方比例和工艺制备不含三七的阴性对照品5 g，同法制成阴性对照品溶液。取三七对照药材0.5 g，加水5 滴，搅匀，加水饱和的正丁醇5 mL，密塞，振摇10 min，放置2 h，离心，取上清液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为对照药材溶液;另取三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅥB 中薄层色谱法试验，吸取上述4 种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15 ∶40 ∶22 ∶10)10 ℃以下放置的下层溶液展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与三七对照药材和三七皂苷R1对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，而阴性对照品溶液则无此斑点。见图1 C。

2.4 骨碎补

取本品内容物10 g，加甲醇100 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL 使溶散，用乙酸乙酯提取2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取按处方比例和工艺制备不含骨碎补的阴性对照品10 g，同法制成阴性对照品溶液。取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作为对照品溶液。照2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅥB 中薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各1 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在70 ℃加热4 min，置紫外线灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点。见图1 D。

2.5 没药

取本品内容物2.5 g，加乙醚50 mL，超声处理20 min，滤过，滤液挥至近干，残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。取天然没药对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取按处方比例和工艺制备不含没药的阴性对照品2.5 g，同法制成阴性对照品溶液。照2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅥB 中薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各5 ～10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-乙醚(4 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，立即喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。置紫外线灯 (254 nm)下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点。见图1 E。

图1 薄层色谱图

3 讨论

薄层色谱法是鉴别中药最常用的方法，专属性强，可比性、灵敏度好，是药品检验中应用最广泛的鉴别手段之一[3]。本处方中血竭为君药，且是贵重药品，药典中有较成熟的质量控制方法，考虑检测方法的通用、成熟、可行及本品种的剂型特点，认为薄层色谱法比较合理，故采用薄层色谱法鉴别处方中的血竭及大黄、三七、骨碎补、没药的特征色谱斑点，结果方法重现性好，专属性强，阴性对照品溶液无干扰，可以定性地控制该制剂的质量。

对于没药，经过多次试验，发现用乙醚提取效果较好，可除去脂溶性成分，有效地排除背景色带的干扰现象，其斑点分离清晰。

曾对方中的续断、牛膝、红花、元胡采用不同的提取方法和展开剂进行薄层色谱试验，但因薄层板效果不佳，专属性不强，故未列入正文。

[1] 王 琴，邢 茂，易美彤，等. 愈骨胶囊镇痛和抗炎活性的实验研究[J]. 中国药房，2011，22(27)∶2 506.

[2] 姜丽芳，王吉明，都洪敏. 愈骨胶囊治疗骨痹的临床观察[J]. 齐鲁药事，2012，31(8)∶479 -482.

[3] 赵希贤，尤丽华，杨秉呼，等. 中药薄层色谱鉴别检验常见问题探讨[J]. 中国药业，2013，22(6)∶2 -3.