三七粉对慢性免疫性肝损伤小鼠的保护作用研究①

农凤映，陈华梅，何家欣，石妹飞，李韬

（1.右江民族医学院2011级临床医学本科3班，广西 百色 533000 E－mail：976468567＠qq.com；2.右江民族医学院2011级医学检验本科，广西 百色 533000；3.右江民族医学院2011级临床医学本科2班，广西 百色 533000；4.右江民族医学院2012级管理专业，广西 百色 533000；5.右江民族医学院基础医学院，广西 百色 533000）

肝细胞作为肝脏中主要的实质性和功能性细胞，对化学物质、药物、免疫性疾病、酒精等损伤因素非常敏感，肝细胞损伤程度可表现为肝组织坏死、肝脂肪化、肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌［1］。肝损伤的治疗原则为维护肝细胞功能的稳定性，减少肝细胞组织炎症的程度，促进损伤组织的修复等。三七是我国传统名贵中药材之一，自古有“增强免疫神药”的美称，由于三七具有调节免疫、清除自由基、扩充血管、抗炎、抗纤维化、抗衰老等药理作用，本实验采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）联合诱导小鼠，制造慢性免疫性肝损伤模型，观察三七粉对慢性免疫性肝损伤小鼠的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 ①试剂及仪器：脂多糖（sigma公司产品，T0056 BR＞97%），卡介苗（成都生物制品研究所有限责任公司，冻干粉状，0.25毫克／支，1mg含1.0×106CFU），三七粉（云南向辉生物科技有限公司）。恒温箱（上海跃进医疗器械厂），离心机（上海安亭科学仪器厂），高倍光学显微镜（德国卡尔蔡公司）。②动物：昆明种小鼠，雌性，体重20～25g，45只，由右江民族医学院动物房提供，CL级，动物许可证号：syxk桂2011－0010。

1.2 方法

1.2.1 造模及给药 将小鼠随机分为三组，即正常组、模型组、三七粉治疗组，每组15只，除正常组外，按参考文献［2］修改，给予尾静脉注射（iv）BCG 0.2ml（2.5毫克／只，约含5×107个活菌数），第10d尾静脉注射LPS 0.1ml（10微克／只），每隔10d交替用BCG和LPS致敏1次；第1次致敏后治疗组给三七粉1.35g／kg灌胃，每天1次，直至第50d实验结束。

1.2.2 检测 处死小鼠取肝脏、脾脏和胸腺并计算脏器指数。取肝、脾、胸腺组织，制成匀浆，HE染色涂片，光学显微镜下观察各组织细胞形态变化。

脏器指数＝脏器质量（mg）／体质量（g）×100%

1.2.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行统计处理，计量数据以（）表示，各组间比较采用方差分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三七粉对小鼠脏器指数的影响 与正常组比较，模型组和三七粉治疗组小鼠肝、脾指数显著高于正常组（P＜0.05或P＜0.01），胸腺指数差异无统计学意义；但三七粉治疗组与模型组比，肝、胸腺指数下降不明显（P＞0.05），结果见表1。

表1 三七粉对小鼠脏器指数的影响 （）

表1 三七粉对小鼠脏器指数的影响 （）

注：与正常组比较，a：P ＜0.05，b：P ＜0.01

2.2 三七粉对小鼠肝组织细胞形态变化的影响 正常组肝细胞轮廓清晰，肝细胞圆润大小正常，胞质丰富无肿胀，且染色深；模型组肝细胞呈较大范围的嗜酸性坏死，肝细胞肿胀较明显，胞质染色变淡，细胞膜与胞质分界明显，且细胞周围有不同程度的组织坏死；三七粉治疗组肝细胞轻度肿胀，胞质染色较模型组深，肝细胞坏死程度轻，结果见图1。

图1 三七粉对小鼠肝组织细胞形态变化的影响（×400）A：正常组 B：模型组 C：三七粉治疗组

2.3 三七粉对小鼠脾组织细胞形态变化的影响 正常组脾细胞染色深，细胞轮廓大致清晰，细胞大小正常，胞质丰富，染色深；模型组肝细胞大小相差较大，细胞轮廓模糊，部分细胞轻度肿胀，胞质染色变淡；三七粉组脾细胞肿胀程度轻，胞质染色较深，细胞坏死程度轻，结果见图2。

图2 三七粉对小鼠脾组织细胞形态变化的影响（×400）A：正常组 B：模型组 C：三七粉治疗组

2.4 三七粉对小鼠胸腺组织细胞形态变化的影响 正常组胸腺细胞轮廓清晰，胞质染色深，胞质丰富，细胞大小正常；模型组胸腺细胞轮廓模糊，细胞肿胀较大，胞膜表面不平；三七粉治疗组胸腺细胞肿胀程度轻，胞质染色较深，坏死程度轻，结果见图3。

3 讨论

图3 三七粉对小鼠脾组织细胞形态变化的影响（×400）A：正常组 B：模型组 C：三七粉治疗组

肝损伤过程大多与氧化应激和免疫有关，化学物质、药物、酒精等能直接或间接诱导肝细胞生物膜系统发生脂质过氧化，干扰细胞内的能量代谢，活化细胞死亡程序等，采用BCG加LPS联合诱导小鼠产生免疫性肝损伤是公认的较理想的造模方法［3］，BCG可使多核中粒细胞或巨噬细胞聚集于肝，继后再用低剂量LPS攻击注射，可激发这些细胞释放对肝细胞有毒性作用的多种免疫效应分子，如氧自由基、细胞因子等，引发免疫性肝损伤［4］。本实验采用BCG＋LPS联合多次诱导慢性免疫性肝损伤，同时给予三七粉治疗，观察三七粉对免疫性肝损伤有否保护作用，实验结果表明，BCG加LPS联合多次诱导，可造成小鼠肝、脾、胸腺器官不同程度的损伤，表现为细胞肿大，轮廓模糊不清，胞膜不平，有坏死等。而用三七粉干预治疗后其肝、脾、胸腺细胞肿大不明显，胞质着色较接近正常组，细胞坏死程度较轻。脏器指数观察，模型组和三七粉治疗组小鼠肝、脾指数显著高于正常组（P＜0.05或P＜0.01），但三七粉治疗组比模型组有所下降，说明免疫性损伤对肝、脾脏器都有损害，用三七粉治疗后损伤程度有所降低。

实验表明三七粉对慢性免疫性肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与三七粉具有调节免疫、清除自由基、增强细胞抗氧化功能有关。

［1]毛颖婕，徐彭，刘清华，等.肝损伤的中药治疗研究进展［J］.江西中医学院学报，2011，23（1）：91－94.

［2]茄仁萍，吴锡铭，朱幸芳.小鼠慢性免疫性肝损伤模型建立与筛选［J］.医学研究通讯，2012，32（12）：31－33

［3]黄凯，杨新波，陈红艳，等.两种急性免疫性肝损伤小鼠模型的对比研究［J］.中国比较医学杂志，2009，19（11）：31－34.

［4]邓家刚，郑作文，王勤，等.复方黄根对小鼠免疫性肝损伤的保护作用［J］.中国实验方剂学杂志，2007，13（5）：37－38.