青蒿琥酯和熊果酸降血脂作用的最佳配比筛选

叶亚琳，王玉亮，王泽剑，殷 明，辛海量，张 磊 (.解放军2医院药剂科，广东 广州 00；2.上海交通大学农业与生物学院，上海 20020；.上海交通大学药学院，上海 20020；.第二军医大学中医系，上海 200；.第二军医大学药学院，上海 200)

青蒿作为传统的清热解毒中药，有舒肝解郁、清热利胆的功效，是蒿芩清胆汤(出自清代医家俞根初的《重订通俗伤寒论》)的主药之一，有清胆利湿、和胃化痰的功效。中医认为高血脂其病变当责之于肝、脾，发病的关键是肝郁脾虚。痰、湿、瘀既是病理产物，又是继发性致病因素。治疗宜调肝降脂，健脾化湿，消滞化瘀，因此青蒿理论上可用于降血脂。在对青蒿中活性成分青蒿素及其衍生物的药理作用研究中发现，其对与动脉粥样硬化相关的多种免疫反应有作用[1-7]。青蒿琥酯是青蒿中活性成分青蒿素的衍生物之一，与青蒿素相比，不仅效价高、毒性小，而且溶解性好，更有利于临床应用[8]。

熊果酸又名乌索酸(乌苏酸)，属五环三萜类化合物。它在自然界分布很广，如存在于杜鹃花科植物熊果的叶、果实中，玄参科植物毛泡桐的叶中，以及木樨科植物女贞的叶中。熊果酸具有广泛的生物活性，其中降血脂效果在多项研究中已被证实[9-11]。

笔者前期的实验研究表明，青蒿琥酯和熊果酸复方可有效降低模型动物血清中甘油三酯和胆固醇的水平[12]。本研究通过均匀设计，应用大鼠高脂模型，比较不同比例的青蒿琥酯和熊果酸的降血脂效果，寻找其最佳配比，为进一步的新药开发提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 供试品及其配制 青蒿琥酯(广州汉方药业，批号000129)，熊果酸(西安小草植物科技有限责任公司，批号XC091225)，非诺贝特片(上海黄海制药有限责任公司，批号：100104)。配制方法：吐温助溶，溶于生理盐水，配成所需的浓度。

1.2 动物 雄性SD大鼠，体重：160～180 g[上海斯莱克实验动物有限公司，动物合格证号：SCXK(沪)2007-0005]。

1.3 仪器 生化分析仪(AT-738PLUS，上海安泰分析仪器有限公司)，电子天平(JA1003N，上海精密科学仪器有限公司)，离心机(eppendorf, centrifuge 5415R)。

2 实验方法

2.1 剂量设置 本次实验中青蒿琥酯和熊果酸的剂量设置为高剂量(50 mg/kg)、中剂量(25 mg/kg)、低剂量(12.5 mg/kg)，通过不同配比组合形成16个组，另增加正常动物和阳性对照组(非诺贝特30 mg/kg)。

表1 大鼠实验剂量设计与分组

2.2 造模方法及分组 雄性SD大鼠108只，体重160～180 g，适应性喂养5 d，将动物按体重分组后应用随机数字表随机分为18组，每组6只。高脂饲料配比如下：猪油10%，胆固醇2%，丙基硫氧嘧啶0.2%，猪胆盐0.5%，基础饲料87.3%。

动物在喂养高脂饲料造模(正常组除外)的同时给予不同药品，连续3周。实验期间每4天称一次体重；每2 d加一次高脂饲料(正常组加普通全营养饲料)，计算摄食量。实验第21 d，大鼠以25%乌拉坦麻醉(0.4 ml/100 g体重)，从第1组开始，至第18组，每组1只，循环经腹主动脉采血，离心分离血清，测定TG、CHO、HDL-C、LDL-C、AST及ALT。

表2 分组及给药方案

2.3 统计学分析 以上所有指标均以平均值±标准差表示，并以t检验进行比较。

3 实验结果

3.1 青蒿琥酯及熊果酸对模型大鼠血清CHO与TG的影响 实验结果见表3。

表3 受试样品预防给药对脂代谢紊乱模型大鼠血脂含量的影响(n=6，mmol/L)

结果显示模型组大鼠在给高脂饲料21 d后血清CHO较正常组有明显升高(P<0.01)。与模型组比较，各给药组均可降低大鼠血清中胆固醇和三酰甘油的含量，其中青蒿琥酯(高剂量)+熊果酸(高剂量)，青蒿琥酯(中剂量)+熊果酸(中剂量)效果最佳，且优于阳性对照药非诺贝特。

3.2 青蒿琥酯及熊果酸对模型大鼠高低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响 实验结果见表4。模型组大鼠在给予高脂饲料21 d后HDL-C较正常组没有明显影响，而LDL-C较正常组则明显升高，H/L比值明显降低(P<0.01)。青蒿琥酯(高剂量)+熊果酸(高剂量)可以显著升高HDL-C(P<0.01，与模型组比较)，对LDL-C也有降低作用(P<0.05，与模型组比较)，具有一定的升高H/L值的作用(P<0.05)，与模型组比较有显著性差异。

表4 受试样品预防给药对脂代谢紊乱模型大鼠高低密度脂蛋白胆固醇含量和比值的影响(n=6, mmol/L)

3.3 青蒿琥酯及熊果酸对模型大鼠肝功能的影响 实验结果见表5。各受试样品对脂质紊乱大鼠肝功能没有显著影响(P>0.05，与正常组比较)。阳性对照药非诺贝特组AST较正常组有所升高，但没有显著性差异(P>0.05)，ALT较正常组比较也有所升高(0.05

4 结论

青蒿琥酯(高剂量)+熊果酸(高剂量)对TG、CHO、LDL-C水平均有显著的降低作用，可明显升高HDL-C，对H/L值也有一定的升高作用。综合降脂效果优于阳性药非诺贝特，也优于同等剂量的青蒿琥酯和熊果酸单用。本次试验结果显示青蒿琥酯和熊果酸合用，且配比为1:1时降脂效果最佳。

表5 受试样品预防给药对脂代谢紊乱模型大鼠肝功能的影响(n=6)

【参考文献】

[1] Xu H, He Y, Yang X,etal. Anti-malarial agent artesunate inhibits TNF-alpha-induced production of proinflammatory cytokines via inhibition of NF-kappaB and PI3 kinase/Akt signal pathway in human rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes[J]. Rheumatology，2007，46 (6)：920-926.

[2] Wang JX, Tang W, Zhou R,etal.The new water-soluble artemisinin derivative SM905 ameliorates collagen-induced arthritis by suppression of inflammatory and Th17 responses[J]. Br J Pharmacol, 2008, 153(6)： 1303-1310.

[3] Li WD, Dong YJ, Tu YY,etal.Dihydroarteannuin ameliorates lupus symptom of BXSB mice by inhibiting production of TNF-alpha and blocking the signaling pathway NF-kappa B translocation[J]. Int Immunopharmacol，2006，6 (8)： 1243-1250.

[4] Li B, Zhang R, Li J,etal. Antimalarial artesunate protects sepsis model mice against heat-killedEscherichiacolichallenge by decreasing TLR4, TLR9 mRNA expressions and transcription factor NF-kappa B activation[J]. Int Immunopharmacol, 2008, 8(3): 379-389.

[5] Li T,Chen H,Wei N,etal. Anti-inflammatory and immunomodulatory mechanisms of artemisinin on contact hypersensitivity[J]. Int Immunopharmacol, 2012, 12(1):144-150.

[6] Hou LF, He SJ, Li X,etal. Oral administration of artemisinin analog SM934 ameliorates lupus syndromes in MRL/lpr mice by inhibiting Th1 and Th17 cell responses[J]. Arthritis Rheum, 2011, 63(8): 2445-2455.

[7] Cheng C, Ho WE, Goh FY,etal. Anti-malarial drug artesunate attenuates experimental allergic asthma via inhibition of the phosphoinositide 3-kinase/Akt pathway[J]. PLoS One, 2011, 6(6): e20932.

[8] Li Y, Wu YL. An over four millennium story behind qinghaosu (artemisinin)-a fantastic antimalarial drug from a traditional Chinese herb[J]. Curr Med Chem, 2003, 10 (21):2197-2223.

[9] Jayaprakasam B, Olson LK, Schutzki RE,etal. Amelioration of obesity and glucose intolerance in high-fat-fed C57BL/6 mice by anthocyanins and ursolic acid in Cornelian cherry (Cornus mas)[J]. J Agric Food Chem，2006，54(1)：243-248.

[10] Somova LO, Nadar A, Rammanan P,etal. Cardiovascular, antihyperlipidemic and antioxidant effects of oleanolic and ursolic acids in experimental hypertension[J]. Phytomedicine，2003，10(2-3), 115-121．

[11] Ullevig SL, Zhao Q, Zamora D,etal. Ursolic acid protects diabetic mice against monocyte dysfunction and accelerated atherosclerosis[J]. Atherosclerosis，2011，219 (2), 409-416.

[12] 唐克轩，王玉亮，辛海量.降血脂的中药组合物及其制备方法[P]. 中国专利，CN101507727，2009-08-19.