改良嗜酸性粒细胞计数稀释液及应用

李 云 郭书侠 董 蕤 路广平 薛占辉

(河北省迁安市人民医院，①迁安市中医院 河北迁安 064400;②滦县人民医院;③廊坊市广阳区妇幼保健医院;④迁西县中医院)

嗜酸性粒细胞计数临床常见的是直接计数、涂片白细胞分类计数和血球计数仪分类计数3种方法。但是临床上为了解疾病进展过程，需要动态观察嗜酸性粒细胞的变化，往往采用嗜酸性粒细胞直接计数。文献报道［1，2］，嗜酸性粒细胞直接计数的稀释液较多，用等渗的生理盐水配制嗜酸性粒细胞计数稀释液，与《全国临床检验操作规程》推荐的稀释液相比，各有优缺点。我院探讨使用血小板计数稀释液来配制嗜酸性粒细胞计数稀释液，在临床实践了3年，计数结果准确可靠，报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂 《全国临床检验操作规程》推荐的稀释液配制详见《全国临床检验操作规程》［3］。嗜酸性粒细胞计数稀释液。称取草酸铵1.0g，EDTA.2Na 0.012g，伊红0.2g，溶于50mL蒸馏水中，再加入0.6mL TritonX-100，加蒸馏水至100mL。

1.2 方法 于试管中加入稀释液0.38mL，取患者末梢血(或EDTA.2K抗凝全血)0.02 mL，混匀，5min后冲入计数板的两计数池内，静置3～5min。用低倍镜计数，镜下嗜酸性粒细胞被染成桔红色，其它未被破坏的细胞几乎不着色。计数两个计数室10个大方格(中央和四角大方格)内嗜酸性粒细胞数。计算嗜酸性粒细胞/L=10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106/L。

2 结果

2.1 对比试验 取住院121例患者的EDTA.2K抗凝全血，分别用《全国临床检验操作规程》推荐的稀释液(Y)与本法稀释液(X)进行嗜酸性粒细胞计数，结果本法稀释液(163.4±34.7)×106/L，推荐稀释液(165.0±35.1)×106/L，2种稀释液计数结果差异无显著性(P＞0.05)，其相关系数r=0.991，相关方程Y=1.0216X+3.1247。

2.2 着色时间比较 将稀释液与抗凝全血混合后，分别在120、180、240、270、300s进行直接计数，《全国临床检验操作规程》推荐的稀释液在300s后嗜酸性粒细胞被染成红色，本法稀释液在180s后嗜酸性粒细胞被染成红色。

2.3 重复性试验 用本法稀释液进行嗜酸性粒细胞计数25次重复试验

3 讨论

文献报道，嗜酸性粒细胞计数稀释液有很多种，主要是围绕破坏红细胞和部分白细胞，嗜酸性粒细胞不被破坏且着色进行改进的。根据草酸铵有破坏红细胞的作用，巧妙地运用血小板计数稀释液来配制嗜酸性粒细胞计数稀释液。我们在配制血小板计数稀释液的同时，在每100 mL血小板计数稀释液中加入伊红0.2g、0.6mL TritonX-100即可成为嗜酸性粒细胞计数稀释液，这样就可以简化嗜酸性粒细胞计数稀释液配制过程。EDTA.2Na有抗凝和防止草酸钙沉淀作用。表面活性剂TritonX-100能加速染料溶解，增强染料对细胞的渗透作用，从而使嗜酸性粒细胞着色加快。TritonX-100的浓度为0.6%［4］时，只破坏除嗜酸性粒细胞以外的细胞，嗜酸性粒细胞几乎不受影响。本稀释液没使用挥发性试剂，这样稀释液保质期就相对较长，使用一年之久，仍效果很好。本法具有试剂配制简单，着色时间短，试剂保质期长，一种试剂2种用途等优点。

［1］李 云，郭书侠，陈梦芝.一种嗜酸性粒细胞稀释液的应用［J］.河北医学，1999，5(6):59

［2］李 云，郭书侠.溴酚蓝在嗜酸性粒细胞计数中的应用［J］.现代检验医学杂志，2007，22(1):34

［3］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.第3版.南京:东南大学出版社，2006.136

［4］幸建英，尹 玲，王学风.TritonX-100在嗜酸性粒细胞计数中的应用［J］.陕西医学检验，1996，11(3):50