海洋星虫多糖胶囊的稳定性研究

刘玉明++钱甜甜（等）

[摘要] 目的 研究海洋星虫多糖胶囊的稳定性。 方法 按照《中国药典》2005年版二部附录原料药与药物制剂稳定性试验指导原则，以胶囊剂重点考察项目性状、鉴别、水分、崩解时限、微生物限度、含量测定为评价指标，进行加速试验和长期试验。 结果 三批样品经过6个月的加速试验和12个月的长期试验，各项指标均符合质量标准规定。 结论 海洋星虫多糖胶囊药物性质稳定。

[关键词] 海洋星虫多糖胶囊；稳定性；加速试验；长期试验

[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）10（a）-0004-04

Investigation on stability of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules

LIU Yuming1 QIAN Tiantian1 JIANG Dingwen1 HE Ying1 SHEN Xianrong1 JIANG Shuqi2

1.Department of Radiation Protection Medicine， Naval Medical Research Institute， Shanghai 200433， China； 2.In-vitro Metabolism Laboratory of Traditional Chinese Medicine， Zhejiang Traditional Medicine University， Zhejiang Province， Hangzhou 310053， China

[Abstract] Objective To investigate the stability of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules. Methods According to the stability testing of pharmaceutical preparations and guiding principles in Appendix of Chinese Pharmacopeia （2005 edition， 2 volume）， with the major investigation items of character， identification， moisture， disintegration time， microbial limit test， the content of polysaccharide as the evaluation indexes， the accelerated test and long-term test were performed. Results All indexes in 3 batches of samples after 6-month accelerated testing and 12-month long trial were in line with the quality standard requirements. Conclusion The drug properties of Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules are stable.

[Key words] Sipunculus nudus Polysaccharide Capsules； Stability； Accelerated test； Long-term test

海洋星虫多糖胶囊是以海洋星虫多糖[1]为原料制备而成的一种硬胶囊，前期研究表明海洋星虫多糖在抗辐射[2]、抗疲劳[3]、提高免疫力[4]、促智[5]等方面具有显著的功效。药品稳定性是其质量评价的重要指标之一，为了更好地控制药品质量，保证临床用药的安全性、有效性，本研究参照《中国药典》药物稳定性试验指导原则[6]，对海洋星虫多糖胶囊的稳定性进行探讨，旨在为该胶囊的有效期确定提供依据，并为其新药申报提供必要的实验方法和数据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

药物四用崩解仪（上海黄海药检仪器厂）；万分之一电子天平（上海天平仪器厂）；分光光度计（上海奥谱勒仪器有限公司，759型号，编号10010510）；PH计（型号PHS-3E，上海精科）；旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司），GL-21M离心机（上海市离心机械研究所），胶体磨JM-13013（廊坊通用机械厂），电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂），85-2型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂）。

1.2 试药

海洋星虫多糖胶囊（自制，批号090820、090915、090925）；蒽酮（AR级，中国医药集团上海化学试剂公司，批号20080618）；95%医用乙醇（上海胜德化工有限公司，批号F20080921）；氢氧化钠（AR级，中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20080921）；盐酸（AR级，中国医药集团上海化学试剂公司，批号T050704）；葡萄糖（AR级，上海化学试剂分装厂，批号0690404）；淀粉、聚乙二醇（PEG）6000、硬脂酸镁、甘露醇、交联聚乙烯吡咯烷酮（PPVP）、微晶纤维素（MCC）、低取代羟丙基纤维素（HPC）、微粉硅胶、CaHPO4、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等辅料均购自上海维编，符合《中国药典》2005年版二部质量标准；浓硫酸（AR级，中国医药集团上海化学试剂公司，批号20020412）。

2 方法与结果

2.1 多糖的含量测定[7-8]

2.1.1 溶液配制

对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，置500 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。

海洋星虫多糖胶囊供试品溶液制备：分别取三批海洋星虫胶囊，精密称取胶囊内容物30 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。

2.1.2 标准曲线制备

2.1.2.1 测定波长的选择 分别精密量取葡萄糖对照品溶液和供试品溶液0.3 mL，置10 mL刻度试管中，加水稀释至2.0 mL，加0.1%蒽酮-硫酸溶液（精密称取0.1 g蒽酮，加80%的硫酸溶液100 mL使溶解，摇匀，新鲜配制）显色，以相应试剂为空白，扫描光谱图，葡萄糖对照品与供试品均在625 nm处有最大吸收。

2.1.2.2 标准曲线的制备 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，置10 mL具塞试管中，加水至2.0 mL，精密加入0.1%蒽酮-硫酸溶液6 mL，摇匀，置水浴中加热15 min，取出，放入冰浴中冷却15 min，以相应的试剂为空白，按照分光光度法，在625 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得标准曲线回归方程为：y=81.728x+0.0281（r = 0.9985）。试验结果表明，葡萄糖质量在0.02～1.2 mg，用0.1%蒽酮-硫酸溶液显色后的线性关系良好。

2.1.3 测定法

精密称取海洋星虫多糖胶囊内容物3份，每份分别为30 mg，分别置100 mL容量瓶中，加水使溶解，摇匀，精密量取0.4 mL溶液，置10 mL具塞试管中。自“加水至2.0 mL”起，照标准曲线制备项下的方法，依法测定吸光度，据标准曲线计算供试品溶液中多糖含量，并计算标示量的百分含量。

2.2 水分测定方法

取供试品3 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，精密称定，打开瓶盖在105℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30 min，精密称定，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止，根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

2.3 崩解时限测定方法

崩解系指固体制剂在检查时限内全部崩解溶散或成碎粒，应通过筛网。采用升降式崩解仪，升降上下移动距离为（55±2）mm，往返频率为每分钟30～32次。吊篮含玻璃管6根，将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架上，浸入1000 mL烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25 mm，烧杯内盛有温度为（37±1）℃的水，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下25 mm处。取胶囊6粒，分别置上述吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进行检查，各粒均应在30 min内全部崩解。如有1粒崩解不完全，应另取6粒，按上述方法复试，均应符合规定。

2.4 胶囊的鉴别

2.4.1 Molish反应

取海洋星虫胶囊内容物30 mg，加水100 mL，超声溶解，过滤，取澄清溶液1 mL置试管中，然后加两滴Molish试剂（取5 g ɑ-萘酚用95%乙醇溶解至1000 mL，临用前配制，棕色瓶保存），摇匀，倾斜试管，沿管壁小心加入约1 mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处形成紫红色复合物。

2.4.2 斐林试剂反应

取海洋星虫胶囊内容物30 mg，加水100 mL，超声溶解，过滤，取样品澄清溶液1 mL置试管中，加入新配制的斐林试剂溶液，溶液的颜色由深蓝色变为黄色最终成为砖红色。其中斐林试剂溶液是由斐林A和斐林B等量混合而得（斐林A：将3.5 g含5个结晶水的硫酸铜溶于100 mL的水中即得淡蓝色的斐林A试剂。斐林B：将17 g含5个结晶水的酒石酸钾溶于20 mL热水中，然后加入20 mL含有5 g氢氧化钠的水溶液，稀释至100 mL即得无色清亮的斐林B试剂）。

2.4.3 硫酸-蒽酮试剂反应

取星虫胶囊内容物30 mg，加水100 mL，超声溶解，过滤，取澄清溶液1 mL置试管中，加入蒽酮试剂4 mL，混匀，沸水浴煮10 min，冷却至室温，观察结果溶液呈蓝色。

2.4.4 硫酸-苯酚试剂反应

取星虫胶囊内容物30 mg，加水100 mL，超声溶解，过滤，取澄清溶液1 mL置试管中，然后加入5%苯酚1.0 mL及浓硫酸5.0 mL，摇匀冷却，室温放置20 min后观察试管中出现的颜色变化，观察结果溶液显橙黄色。

2.5 加速试验[9-10]

2.5.1 实验方法

取海洋星虫多糖胶囊三批，模拟临床用药包装（铝塑压板包装，并密封于铝箔袋内。）放入有NaCl饱和溶液的干燥器内[相对湿度（75±5）%]，并置于恒温烘箱中，温度为（40±2）℃条件下，并于0、1、2、3、6个月取样测定。

2.5.2 实验结果

经过对6个月内样品进行测定，胶囊内容物外观性状均呈灰白色粉末状颗粒，气腥，味微苦。微生物限度检查细菌数不得过10 000 cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过100 cfu/g，大肠埃希菌、沙门菌和活螨均不得检出，大肠菌群应小于100 cfu/g，均符合规定。鉴别反应采用颜色鉴别反应：在Molish试剂反应中，样品溶液与浓硫酸的液面间均形成紫环；在斐林试剂反应中，样品溶液呈砖红色；在硫酸-蒽酮试剂反应中，样品溶液呈蓝色；在硫酸-苯酚试剂反应中，样品溶液呈橙黄色。水分及崩解时限、含量测定结果见表1。

2.6 长期试验

2.6.1 实验方法

取海洋星虫多糖胶囊三批，模拟临床用药包装（铝塑压板包装，并密封于铝箔袋内），置于温度为（25±2）℃、湿度为（60±10）%的条件下，并于0、3、6、9、12个月取样测定。

2.6.2 实验结果

对12个月内样品进行测定，胶囊内容物外观性状均呈灰白色粉末状颗粒，气腥，味微苦。微生物限度检查细菌数不得过10 000 cfu/g，霉菌和酵母菌数不得过100 cfu/g，大肠埃希菌、沙门菌和活螨均不得检出，大肠菌群应小于100 cfu/g，均符合规定[11-12]。鉴别反应采用颜色鉴别反应，在Molish试剂反应中，样品溶液与浓硫酸的液面间均形成紫环；在斐林试剂反应中，样品溶液呈砖红色；在硫酸-蒽酮试剂反应中，样品溶液呈蓝色；在硫酸-苯酚试剂反应中，样品溶液呈橙黄色。水分及崩解时限、含量测定结果见表2。

3 讨论

海洋星虫是星虫动物门，方格星虫目，方格星虫科，方格星虫属的裸体方格星虫的全体，中医认为海洋星虫性味甘、咸、寒，有清肺补虚、滋阴降火功效，素有“动物人参”和“海洋里的冬虫夏草”的美誉。海洋星虫多糖是从海洋星虫中提取分离得到的一种动物多糖，是海洋星虫胶囊的原料药，加强对海洋星虫胶囊的稳定性研究，对于考察该药物的质量控制具有重要的意义。

稳定性试验的目的是考察原料药或制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据，同时通过试验建立药品的有效期[13]。加速试验的目的是明确药品在偏离正常贮藏条件下的变化情况、确定长期试验的条件，长期稳定性试验的目的是确认影响因素试验和加速试验的结果，明确药品稳定性的变化情况[14]。本研究采用加速试验方法和长期试验方法对海洋星虫多糖胶囊的稳定性进行考察[15]，采用《中国药典》2005年版二部方法，对其性状、鉴别、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量进行实验，3批样品在（40±2）℃和相对湿度（75±5）%的条件下放置6个月，在（25±2）℃、湿度为（60±10）%的条件下放置12个月，各指标均符合质量标准规定。因此，海洋星虫多糖胶囊药物性质稳定，本品的贮藏条件可确定为遮光、密闭保存，有效期可定为2年。

[参考文献]

[1] 刘玉明，钱甜甜，何颖，等.方格星虫多糖不同提取工艺的比较研究[J].时珍国医国药，2011，22（6）：1454.

[2] 沈先荣，蒋定文，陆敏，等.方格星虫提取物的抗辐射作用[J].中国海洋药物，2008，27（2）：33-35.

[3] 刘玉明，钱甜甜，莫琳芳，等.方格星虫多糖对运动小鼠抗疲劳实验研究[J].中国海洋药物，2012，31（3）：42-44.

[4] 李珂娴，沈先荣，何颖，等.方格星虫多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国海洋药物，2012，31（1）：46-49.

[5] 何颖，沈先荣，蒋定文，等.方格星虫多糖对记忆障碍小鼠学习记忆能力的影响[J].中国海洋药物，2012，31（1）：38-42.

[6] 国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：化学工业出版社，2005：附录176-179.

[7] 欧阳亦华，颜剑.红芪多糖含量测定方法研究[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（20）：149-151.

[8] 魏星.LG胶囊中灵芝多糖的含量测定[J].光明中医，2013， 28（12）：2526-2527.

[9] 张梅兰，金素敏，刘敏，等.生脉胶囊稳定性考察[J].河北医药，2012，34（6）：925.

[10] 史万忠，李世芳，刘瑾，等.复方灵通胶囊稳定性试验中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量变化[J].中成药，2011， 33（8）：1356-1360.

[11] 赵晓风，吴友良，张浩，等.展舒胶囊稳定性考察[J].中国药业，2011，20（4）：21-22.

[12] 黄利，金描真，吕华冲，等.莫达非尼胶囊稳定性的研究[J].中国医药指南，2012，10（25）：3-6.

[13] 吴晓宁，熊耀康.金耳多糖胶囊稳定性的研究[J].中华中医药学刊，2008，26（4）：719-720.

[14] 石长春，李红梅.乳酸环丙沙星注射液药物稳定性试验的研究[J].中国医药指南，2011，9（13）：53.

[15] 马桂云，马英.养正消积胶囊稳定性试验研究[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文编辑：卫 轲）

3 讨论

海洋星虫是星虫动物门，方格星虫目，方格星虫科，方格星虫属的裸体方格星虫的全体，中医认为海洋星虫性味甘、咸、寒，有清肺补虚、滋阴降火功效，素有“动物人参”和“海洋里的冬虫夏草”的美誉。海洋星虫多糖是从海洋星虫中提取分离得到的一种动物多糖，是海洋星虫胶囊的原料药，加强对海洋星虫胶囊的稳定性研究，对于考察该药物的质量控制具有重要的意义。

稳定性试验的目的是考察原料药或制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据，同时通过试验建立药品的有效期[13]。加速试验的目的是明确药品在偏离正常贮藏条件下的变化情况、确定长期试验的条件，长期稳定性试验的目的是确认影响因素试验和加速试验的结果，明确药品稳定性的变化情况[14]。本研究采用加速试验方法和长期试验方法对海洋星虫多糖胶囊的稳定性进行考察[15]，采用《中国药典》2005年版二部方法，对其性状、鉴别、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量进行实验，3批样品在（40±2）℃和相对湿度（75±5）%的条件下放置6个月，在（25±2）℃、湿度为（60±10）%的条件下放置12个月，各指标均符合质量标准规定。因此，海洋星虫多糖胶囊药物性质稳定，本品的贮藏条件可确定为遮光、密闭保存，有效期可定为2年。

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[14] 石长春，李红梅.乳酸环丙沙星注射液药物稳定性试验的研究[J].中国医药指南，2011，9（13）：53.

[15] 马桂云，马英.养正消积胶囊稳定性试验研究[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文编辑：卫 轲）

3 讨论

海洋星虫是星虫动物门，方格星虫目，方格星虫科，方格星虫属的裸体方格星虫的全体，中医认为海洋星虫性味甘、咸、寒，有清肺补虚、滋阴降火功效，素有“动物人参”和“海洋里的冬虫夏草”的美誉。海洋星虫多糖是从海洋星虫中提取分离得到的一种动物多糖，是海洋星虫胶囊的原料药，加强对海洋星虫胶囊的稳定性研究，对于考察该药物的质量控制具有重要的意义。

稳定性试验的目的是考察原料药或制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据，同时通过试验建立药品的有效期[13]。加速试验的目的是明确药品在偏离正常贮藏条件下的变化情况、确定长期试验的条件，长期稳定性试验的目的是确认影响因素试验和加速试验的结果，明确药品稳定性的变化情况[14]。本研究采用加速试验方法和长期试验方法对海洋星虫多糖胶囊的稳定性进行考察[15]，采用《中国药典》2005年版二部方法，对其性状、鉴别、微生物限度、水分、崩解限度、多糖含量进行实验，3批样品在（40±2）℃和相对湿度（75±5）%的条件下放置6个月，在（25±2）℃、湿度为（60±10）%的条件下放置12个月，各指标均符合质量标准规定。因此，海洋星虫多糖胶囊药物性质稳定，本品的贮藏条件可确定为遮光、密闭保存，有效期可定为2年。

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[4] 李珂娴，沈先荣，何颖，等.方格星虫多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国海洋药物，2012，31（1）：46-49.

[5] 何颖，沈先荣，蒋定文，等.方格星虫多糖对记忆障碍小鼠学习记忆能力的影响[J].中国海洋药物，2012，31（1）：38-42.

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[13] 吴晓宁，熊耀康.金耳多糖胶囊稳定性的研究[J].中华中医药学刊，2008，26（4）：719-720.

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[15] 马桂云，马英.养正消积胶囊稳定性试验研究[J].中国中医药现代远程教育，2013，11（2）：163.

（收稿日期：2014-05-12 本文编辑：卫 轲）