活血滋肾汤对大鼠骨质疏松症模型血生化指标的影响*

孙 权黄万凌秦华清汪 洋刘凌锋马维平刘 德

（1.湖北中医药高等专科学校，湖北 荆州 434020；2.湖北省监利县人民医院，湖北 监利433300）

·研究报告·

活血滋肾汤对大鼠骨质疏松症模型血生化指标的影响*

孙 权1黄万凌1秦华清2汪 洋1刘凌锋1马维平1刘 德1

（1.湖北中医药高等专科学校，湖北 荆州 434020；2.湖北省监利县人民医院，湖北 监利433300）

目的观察活血滋肾汤对大鼠骨质疏松症模型血生化指标的影响，研究活血滋肾汤防治骨质疏松症的机制。方法采用8月龄健康雌性SD大鼠48只，按随机原则分为实验组、阳性组、模型组、正常组，每组各12只。正常组行假手术，其余3组行卵巢切除术，术后13周给药，持续12周后取血观测血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（AKP）及骨钙素（BGP）、降钙素（CT）。结果Ca、P水平在各组间相近（P＞0.05）；AKP测值实验组与阳性组、正常组相近（P＞0.05），显著低于模型组（P＜0.05）；模型组BGP测值显著高于实验组、正常组和阳性组（P＜0.05）；实验组CT测值显著高于模型组（P＜0.05）。结论活血滋肾汤不影响血清Ca、P水平，能抑制去势大鼠骨吸收作用，抑制高骨转换，调节成骨细胞活性，促进骨的生成，维持正常骨转换率，从而防治绝经后骨质疏松。

骨质疏松 活血滋肾汤 药物疗法 卵巢切除 大鼠

中药复方制剂活血滋肾汤具有活血益气、健脾滋肾等功能，临床观察证实，其治疗原发性骨质疏松症，在症状临床控制、总有效率方面均有良好表现，治疗安全，效果明显［1］。本研究旨在通过观察活血滋肾汤对大鼠骨质疏松症模型血生化的影响，进一步了解其防治骨质疏松症的机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康成年SD大鼠48只，8月龄，雌性，体质量（320±20）g，清洁级，由湖北中医药高等专科学校实验动物中心提供。

1.2 药物 活血滋肾汤为笔者经验方，该方由桃仁8 g，红花6 g，熟地黄20 g，当归12 g，川芎6 g，白芍12 g，党参12 g，黄芪15 g，杜仲10 g，枸杞子10 g等组成，原药饮片购自湖北同济堂药房有限公司，水煮制成质量浓度为含生药1 g/mL的水提液。由湖北中医药高等专科学校中药实验室提供。尼尔雌醇片（廊坊高博京邦制药有限公司生产，规格1 mg/片，国药准字H11020123），使用前研细，用0.9%氯化钠注射液配制成质量浓度为0.1 mg/mL的混悬液。

1.3 仪器与材料 全自动生化分析仪，日立7600-020型（日本日立公司产）；γ放射免疫计数器，SN-695型（上海核所日环光电公司产）；灌胃器（用市售16号针头及5 mL针筒自制）［2］。

1.4 分组与造模 实验前将大鼠置于光线柔和、洁净、安静、室温20～25℃，相对湿度40%~70%的环境中适应性喂养3 d，然后采用数字随机法将大鼠随机分为实验组、阳性组、模型组、正常组，每组12只。均以3%戊巴比妥钠35 mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后下腹部剪毛、皮肤消毒，在脐与耻骨前缘中点沿正中线切开皮肤约2 cm；切开腹白线及腹膜，打开腹腔；在切口下方找到子宫体及一侧子宫角，沿子宫角向前导出卵巢。再分组处理，实验组、阳性组、模型组均结扎卵巢系膜血管后摘除双侧卵巢，将子宫复位后关腹，正常组仅摘除腹腔内左右各1块脂肪，将子宫复位后关腹；造模手术中严格遵循无菌操作原则，术后给予庆大霉素1.5 mg，肌肉注射，每日1次，连续3 d，预防感染。动物摘除卵巢后1周，逐只行阴道上皮角化检查，每日1次，连续5 d，明确造模成功。动物分笼喂养，自由饮食。

1.5 给药方法 造模术后大鼠喂养12周，第13周开始给药，持续12周。模型组和正常组给予0.9%氯化钠注射液10 mL/（kg·d）灌胃；实验组予活血滋肾汤水提液10 mL/（kg·d）灌胃；阳性组予尼尔雌醇混悬液10 mL/（kg·d）灌胃。

1.6 标本采集与检测 实验观察期间有5只大鼠死亡，最后取材标本为43只大鼠。各组动物均于给药12周后摘眼球取血，标本置于-20℃冰箱保存集中检测。采用全自动生化分析仪测定血中钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（AKP）含量，采用放射免疫分析法测定骨钙素（BGP）、降钙素（CT）水平。

1.7 统计学处理 应用SPSS11.5统计软件。计量资料以（±s）表示，实验数据采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组血清Ca、P、AKP检测值比较 见表1。实验组、阳性组、正常组AKP测值显著低于模型组 （P＜0.05），实验组、阳性组和正常组AKP测值差异无统计学意义（P＞0.05），血清Ca、P在各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 各组BGP、CT水平检测值比较 见表2。模型组BGP测值显著高于实验组、正常组和阳性组 （P＜0.05），实验组、正常组、阳性组间BGP测值差异无统计学意义（P＞0.05）；实验组CT测值显著高于模型组（P＜0.05），实验组CT测值与阳性组、正常组差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组血清钙、磷、碱性磷酸酶检测比较（±s）

表1 各组血清钙、磷、碱性磷酸酶检测比较（±s）

与模型组比较，△P＜0.05。下同。

组别 n A K P（I U / L）C a（m m o l / L） P（m m o l / L）实验组 1 0 1 5 3 . 8 4 ± 4 1 . 2 2△阳性组 1 0 1 6 1 . 9 3 ± 3 5 . 3 7△模型组 1 2 2 7 3 . 2 5 ± 8 2 . 1 6 2 . 5 3 ± 0 . 2 3 1 . 4 2 ± 0 . 2 6 2 . 4 7 ± 0 . 2 5 1 . 3 9 ± 0 . 3 2 2 . 5 1 ± 0 . 2 1 1 . 4 4 ± 0 . 2 7正常组 1 1 1 4 7 . 3 5 ± 3 9 . 4 1△2 . 6 0 ± 0 . 2 8 1 . 4 9 ± 0 . 3 0

表2 各组骨钙素、降钙素检测比较（±s）

表2 各组骨钙素、降钙素检测比较（±s）

组别 n B G P（μ g / L） C T（n g / L）实验组 1 0阳性组 1 0模型组 1 2 0 . 3 1 ± 0 . 2 7△1 6 3 . 8 1 ± 3 4 . 2 6△0 . 2 9 ± 0 . 1 9△1 6 7 . 9 3 ± 4 2 . 3 5 0 . 7 3 ± 0 . 2 2 1 2 4 . 3 7 ± 3 2 . 4 1正常组 1 1 0 . 3 8 ± 0 . 2 6△1 7 5 . 1 4 ± 3 7 . 5 8

3 讨 论

骨质疏松是一种系统性骨骼疾病，表现为骨量减少、骨微细结构破坏、骨脆性增高、骨折危险性增加［3］，常见于绝经后妇女和老年人［4-5］。中医学无骨质疏松这一病名，根据其临床表现，大致与中医文献所记载的“骨痹”“骨痿”“虚劳”“腰脊不举”等类似。中医理论认为“肾藏精，精生髓，髓养骨”，“精足则髓足”，若肾精亏损，则髓无以养，从而导致骨质疏松。活血滋肾汤根据中医学对原发性骨质疏松症病机及治疗的认识，辨证治疗本病，以活血益气、健脾滋肾为主，同时根据证型特点，突出健脾益气或滋阴壮骨。

现代医学认为原发性骨质疏松症主要与雌激素缺乏和老年化有关，有研究表明，由于雌激素水平下降或缺乏，使其对破骨作用抑制解除，骨吸收显著增加，随之骨形成也增加，形成的新骨量少于被吸收的骨量，从而导致总骨量丢失，高转换率骨质疏松形成［6-7］。对成年雌性大鼠切除卵巢后，伴随骨转换增强，其松质骨骨量减少，骨强度下降，能较好模仿人类正常绝经后发生高转换型骨质疏松时的骨丢失状态［8］，适于骨质疏松的研究与药物评价，故而，本研究亦采用此中医界公认的较为理想的去势造模法。

血清中部分AKP由成骨细胞产生，作为骨形成所必需的酶，AKP是成骨细胞活性的一个敏感反应，是成骨细胞分化的早期标志物［9］；Ca、P作为骨钙化的重要物质，贯穿于骨代谢过程的始终。一般认为，绝经后女性或去势后动物血清Ca、P因雌激素水平低下影响而有增加倾向，但多在正常范围内波动，而AKP则伴随着骨吸收亢进、代偿性骨形成增加引起活性升高。本研究中血清Ca、P在各组间差异无统计学意义，亦表明雌激素水平低下对血清Ca、P影响不大，活血滋肾汤不影响血清Ca、P水平；模型组AKP测值显著高于正常组，反映出骨矿化的不足，实验组碱性磷酸酶测值和正常组接近，提示活血滋肾汤具有抑制去势大鼠骨吸收的作用。

血清中的BGP由成骨细胞分泌，能直接反映成骨细胞的活性和骨生理代谢变化，被认为是评价成骨功能的较特异参数，国内外已将其作为骨代谢、转换的一个敏感指标，用于检测代谢性骨病的骨转换率［10］。本实验表明，雌性大鼠去势后，实验组血清BGP显著低于模型组而与正常组、阳性组无明显差异，提示活血滋肾汤能够减少大鼠去势后骨形成的过度增加，抑制高骨转换，维持正常骨转换率。血清CT主要是抑制破骨细胞的活性，从而抑制骨吸收；同时也调节成骨细胞活性，促进骨的生成，其降低明显影响到进行性骨丢失。本实验中，实验组血清CT测值显著高于模型组，而与阳性组、正常组无显著差异，表明活血滋肾汤能提高去势大鼠血清CT水平，从而抑制骨吸收。

［1］ 孙权，秦华清．中西医结合治疗原发性骨质疏松症42例临床观察［J］．河北中医，2012，34（2）：231．

［2］ 冯雪建，卢占军，高登慧.大鼠灌胃给药方法的研究［J］．实验动物科学与管理，2006，23（4）：53.

［3］ 刘忠厚．骨矿与临床［M］．北京：中国科学技术出版社，2006：2．

［4］ 池春茗.骨质疏松症治疗方法及药物研究进展［J］．广州医药，2007，38（2）：17.

［5］ 卢化爱.绝经后骨质疏松发病率调查与预防［J］．中国妇幼保健，2007，22（21）：3303-3304.

［6］ Riggs BL，Melton LJ 3rd.Involutional osteoporosis［J］．N Engl J Med，1986，314：1676-1686．

［7］ 郭世绂.骨质量与骨质疏松症［J］．国外医学：内分泌学分册，2005，25（5）：295.

［8］ 田茂友，李洪祥．去卵巢大鼠骨质疏松模型研究［J］．现代预防医学，2007，34（12）：2239-2241.

［9］ Peck WA，Riggs BL，Bell NH，et al.Research directions in osteposis［J］．AM J Med，1988，84（9）：275-282.

［10］孟昭亨．骨钙索及其临床意义［J］．中华内分泌代谢杂志，1992，8（1）：41．

The Effects of Huoxue Zishen Decoction on the Blood Biochemical Index of Osteoporosis Rats Model

SUN Quan，HUANG Wanling，QIN Huaqing，et al.Hubei college of Chinese medicine，Hubei，Jingzhou 434020，China

Objective：To observe the effect of Huoxue Zishen Decoction on the blood biochemical index of osteoporosis rats model，and the study on the mechanism of Huoxue Zishen Decoction in prevention and treatment of osteoporosis.Methods：48 8-month-old female SD rats，randomly divided into the experimental group，positive group，model group，and normal group，12 in each group.The normal group underwent sham operation，while other three groups were ovariectomized.Medicines were given 13 weeks later，lasting for 12 weeks.After that，blood was taken to observe the blood serum calcium （Ca），phosphorus（P），alkaline phosphatase（AKP）and osteocalcin（BGP），calcitonin（CT）.Results：Ca and P did not differ among groups（P＞0.05）；value of AKP measured in the experimental group and the positive group，the normal group had no difference（P＞0.05），significantly lower than that in the model group（P＜0.05）；BGP of the model group was significantly higher than that of the experimental group，the normal group and the positive group（P＜0.05）；CT of the experiment group was significantly higher than that of the model group（P＜0.05）.Conclusion：Huoxue Zishen Decoction has no effect on serum calcium，and phosphorus level，but can inhibit bone resorption in ovariectomized rats，inhibit high bone turnover，adjust the activity of bone cells，promote bone formation，maintain normal bone turnover rate，and thus benefit the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.

Osteoporosis；Huoxue zishen decoction；Drug therapy；Ovary resection；Rats

R285.5

A

1004-745X（2015）06-0958-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.06.007

2015-03-10）

湖北省教育厅科学技术研究项目（B2013134）