Toll受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系探讨

2015-01-12 05:52李凯霞刘福民
中外医疗 2015年19期
关键词:羊膜胎膜绒毛

李凯霞,刘福民

1.徐州医学院研究生院,江苏徐州 221004;2.淮安市妇幼保健院,江苏淮安 223300

Toll受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系探讨

李凯霞1,刘福民2

1.徐州医学院研究生院,江苏徐州 221004;2.淮安市妇幼保健院,江苏淮安 223300

目的探讨分析Toll受体4(TLR4)的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系。方法随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例(研究组)与正常晚期妊娠女性30例(对照组),分别测定胎盘组织TLR4定位、表达特点以及白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)水平,予以产后胎膜病理检查。结果2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);研究组血清IL-8水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例,TLR4表达水平差异无统计学意义(P>0.05),TLR4mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者,组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者,差异有统计学意义(P<0.05)。该组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎,三期急性炎性改变,Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改变逐渐明显。结论TLR4上升以及IL-8上升均与绒毛膜羊膜炎有关联,IL-8变化关系到胎膜完整性,对TLR4的监测是防控胎膜早破、绒毛膜羊膜炎的关键。

Toll受体4;表达;胎膜早破;绒毛膜羊膜炎

胎膜早破主要因感染所致,Toll样受体与固有免疫左右有直接关联,而TLRs作用于细胞信号转导等环节,TLR4关系到内毒素信号传导过程,且可能与胎膜早破绒毛膜羊膜炎的发生有关[1],该研究随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例为研究对象,探讨分析了TLR4与胎膜早破绒毛膜羊膜炎之间的关系,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例(研究组)与正常晚期妊娠女性 30例(对照组),研究组年龄22~34岁,平均年龄(26.8±2.4)岁;对照组年龄23~33岁,平均年龄(26.3±2.8)岁,其中15例孕周在28~37周之间(对照1组),另15例孕周≥37周(对照2组)。2组基础资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

2组均在剖宫产之时剪取脐带附着处胎盘垂直断面中央标本2块,使用0.9%氯化钠溶液将标本漂洗干净,其中1块以液氮冷冻处理,置于-70℃环境中备用,另1块用来提取RNA。

2组孕妇分娩前均常规抽取肘静脉血标本各5mL,高敏放射免疫测定标本中IL-6、IL-8水平,产后均在破口部分剪取胎膜组织标本,以10%甲醛固定送检。

免疫组化。冰冻切片取出,厚度维持在10μm,并以冷丙酮固定处理、将内源性过氧化物酶去除。山羊血清与0.1%Triton X-100溶液通透细胞封闭处理。将兔抗人TLR2 IgG抗体滴到切片之上,置于4℃湿盒内一夜。取出后清洗,将生物素化山羊抗兔IgG/HRP二抗滴入,二氨基联苯氨显色处理,显色后再以苏木素染色,梯度乙醇处理后脱水,封片。观察组织细胞结构变化,若结构依然完整,且发现棕褐色胞浆,胞核为蓝色阳性;细胞结构完整但胞核为蓝色,未见棕褐色胞浆,则胞核映衬下可见浅蓝色,判定为阴性细胞。

检测胎盘组织TLR 4的mRNA。组织标本置于冰盒,Trizol液研磨处理,将胎盘组织总RNA以Trizol一步法提取出来,逆转录得到cDNA,将TLR2、TLR4引物加入并诱导扩增。分别在94℃环境下处理5min、30 s,72℃环境下处理30 s、54℃环境下处理30 s,72℃延伸处理7min,进行PCR反应。参照2%琼脂糖快速电泳β-actin,凝胶成像系统进行扩增产物分析。

1.3 诊断标准

参照第8版谢幸主编的《妇产科学》诊断胎膜早破[2]。胎膜组织病理检查出现炎性反应,产前阶段或分娩后24 h后测量体温在37.5℃之上,有高于标准值的白细胞计数,恶露有臭味;胎膜病理检测为炎性,即诊断为绒毛膜羊膜炎[3]。

1.4 统计方法

采用SPSS 16.0软件对该研究的数据进行统计学的分析,计量资料用(x±s)表示,对比应用t检验,P<0.05时,差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TLR 4表达情况

2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4 mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);研究组血清IL-6、IL-8水平明显高于对照组差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 TLR 4表达与绒毛膜羊膜炎关联

最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例,TLR4表达水平差异无统计学意义(P>0.05),TLR4mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者,组织绒毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 胎盘组织TLR4、IL-8水平与绒毛膜羊膜炎关联(x±s)

2.3 该组胎膜组织病理检查

组胎膜组织病理检查确认为亚临床型绒毛膜羊膜炎,均采用HE染色,图1为Ⅰ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织,图2为Ⅱ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织,图3为Ⅲ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织,三期绒毛膜羊膜炎胎膜组织均呈现出阳性反应,且出现了急性炎性改变,Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改变逐渐明显。

图1 Ⅰ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织

图2 Ⅱ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织

图3 Ⅲ期绒毛膜羊膜炎胎膜组织

3 讨论

生殖道病原微生物的上行性感染等因素会直接导致胎膜早破等现象的发生。国外学者提出,正常足月妊娠者胎盘免疫组化研究可见TLR2、TLR4正常表达,这是因为上述物质在分娩发动调节过程中发挥着一定的作用[4],研究还发现,TLRs直接影响介导母体胎儿之间的天然免疫工作[5]。该研究为探讨分析Toll受体4(TLR4)的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系,使用RTPCR技术以及免疫组化技术分别测定正常妊娠晚期以及胎膜早破孕妇胎盘组织TLR4mRNA表达情况以及蛋白表达特点,检测结果发现,2组TLR4胎盘表达情况以及胎盘TLR4mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05);研究组血清IL-8水平明显高于对照组差异有统计学意义(P<0.05)。最终检查发现组织绒毛膜羊膜炎23例,TLR4表达水平差异无统计学意义(P>0.05),TLR4 mRNA水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者,组织绒毛膜羊膜炎者IL-8水平高于无组织绒毛膜羊膜炎者差异有统计学意义(P<0.05)。提示TLR4在正常妊娠情况下以及胎膜早破情况下有相似的胎盘组织表达特征,胎膜早破确实不是因单一因素产生的。

国外学者相关研究结果提出,合并绒毛膜羊膜炎孕产妇体内有高于正常情况的TLR2及TLR4表达现象,足月临产、未临产孕妇体内TLR2、TLR4mRNA水平测定结果显示,临产孕妇相比未临产孕妇更高[6]。该研究数据结果与已有主要文献结果基本一致。TLR2、TLR4表达水平均高于正常范围,此种现象并没有与胎膜完整性密切的相关性,但受到绒毛膜羊膜炎发生的直接影响,证实了TLRs作为先天性免疫重要组成部分的事实,提示宿主防御机制在抵抗感染方面十分重要[7]。

IL-8即中性粒细胞激活肽,其中包含72个氨基酸,为C-X-C家族细胞因子之一,有明显的中性粒细胞激活与趋化作用,还直接参与并影响白细胞、内皮细胞黏附过程,有长于IL-8的半衰期,为重要的免疫调节因子、炎性介质,相比一般炎性介质有更高的特异性以及敏感性[8]。一旦发生绒毛膜羊膜感染现象,胎盘就会在刺激下激活TLR4、释放IL-8,胎膜早破并绒毛膜羊膜炎与胎盘组织中IL-8的分泌以及TLR4的表达均有关联,但目前尚不明确TLR4的内源性配体激活特征[9]。

该研究中,TLR4 mRNA及蛋白表达方面可能不甚准确,主要的影响因素包括TLR4的 mRNA及蛋白表达存在一些不同,mRNA相较蛋白合成半衰期更短,且mRNA是为绒毛膜、羊膜等细胞膜做准备,而蛋白表达则仅仅在羊膜羊皮细胞上完成;mRNA以大量18sRNA基因合成产生,蛋白表达仅仅是着色的羊膜细胞部分表达产生[10]。

综上所述,TLR4上升以及IL-8上升均与绒毛膜羊膜炎有关联,IL-8变化关系到胎膜完整性,对TLR4的监测是防控胎膜早破、绒毛膜羊膜炎的关键。TLR4在分娩调节中发挥着重要作用。TLR4的表达不仅在分娩的生理过程中发挥影响,TLR4的胎膜组织表达上调也是组织绒毛膜羊膜炎这个病理过程的影响因素。该研究样本量较小,数据不及和不准确之处仍需进一步大范围、精细研究进一步佐证,临床上应当重视TLR4表达与妊娠分娩、宫内感染先天免疫作用,在临床诊疗中充分利用该项指标的检测分析与调控。

[1]薛会灵,刘金,梁玲,等.未足月胎膜早破产妇胎膜组织中TLR2表达变化及意义[J].山东医药,2014(18):8-9.

[2]薛会灵,刘金,梁义娟,等.未足月胎膜早破患者外周血单个核细胞TLR2mRNA水平变化及意义[J].山东医药,2014(24):32-33.

[3]曹耀辉.胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织中TLR2的表达变化及意义[J].山东医药,2010(50):93-94.

[4]薛会灵,梁义娟,梁玲,等.胎膜中Toll样受体2及受体4与胎膜早破的关系[J].国际妇产科学杂志,2014(2):194-196.

[5]曹耀辉.Toll受体4的表达与胎膜早破患者绒毛膜羊膜炎的关系[J].河北医药,2011,33(4):565-566.

[6]曹耀辉.胎膜早破患者胎盘组织中TLR2和TLR4的表达及与绒毛膜羊膜炎的关系[J].河北医药,2011,33(2):218-219.

[7]刘婷,陈衡,何春容,等.联合检测胎膜早破合并感染孕妇外周血C-反应蛋白及CD14+单核细胞表面TLR4表达的变化[J].中国保健营养,2012(5中旬刊):55-56.

[8]谷惠芳,戎小平,张焕改,等.TLR-4、TNF-α、IL-6与早产的关系及意义[J].临床儿科杂志,2014(11):1039-1041,1047.

[9] Kacerovsky,M.,Andrys,C.,Hornychova,H,et al.Amniotic fluid soluble Toll-like receptor 4 in pregnancies complicated by preterMprelabor rupture of the membranes[J].The journal of maternal-fetal& neonatalmedicine,2012,25(7):1148-1155.

[10]TiMG.A.M.Wolfs,Boris W.Kramer,Geertje Thuijls,et al.Chorioamnionitis-induced fetal gut injury ismediated by direct gut exposure of inflammatory mediators or by lung inflammation[J].American Journal of Physiology,2014,306(3):G382-G393.

Investigation of the Relationship Between the Expression of Toll Receptor 4 and PreMature Rupture of Membranesw ith Chorioamnionitis

LIKai-xia1,LIU Fu-min2
1.Graduate School,Xuzhou Medical College,Xuzhou,Jiangsu Province,221004 China;2.Huai'an Maternal and Child Health-care Center,Huai'an,Jiangsu Province,223300 China

ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of Toll receptor 4(TLR4)and premature rupture ofmembraneswith chorioamnionitis.Methods30 caseswith premature rupture ofmembranes(study group)and 30 normal pregnant women in late pregnancy(control group)were selected.All the subjects underwent themeasurementof the positioning andexpression characteristics of placenta TLR4,and the level of IL-6 and IL-8,and postpartuMfetalmembrane pathology examination.ResultsTherewas no statistically significant difference in the expression of placenta TLR4 and the level of TLR4 mRNA between the two groups(P>0.05).The level of seruMIL-8 wasmuch higher in the study group than in the control group(P<0.05).The final check found that 23 cases with chorioamnionitis,no statistically significant difference in the expression level of TLR4 was found between the groups(P>0.05).Chorioamnionitis patients had higher TLR4 mRNA level than patientswithout chorioamnionitis.Chorioamnionitis patients had higher IL-6 and IL-8 level than patients without chorioamnionitis(P<0.05).PostpartuMfetalmembrane pathology examination identified subclinical chorioamnionitiswith stageⅢacute inflammatory changes and stageⅠ,Ⅱ,Ⅲgradually significant changes.ConclusionThe rise of TLR4 and IL-8 levels is associated with chorioamnionitis;changes of IL-8 are associated with fetalmembrane integrity;themonitoring of TLR4 is the key to preventing and controlling the incidence of premature rupture ofmembranes and chorioamnionitis.

Toll receptor 4;Expression;Premature rupture ofmembranes;Chorioamnionitis

R4.433

A

1674-0742(2015)07(a)-0001-03

2015-04-02)

表1 2组受试者胎盘组织TLR4、IL-6、IL-8水平[ng/L,(x±s)]

组别TLR4(阳性细胞数/mm2)TLR4 mRNA血清IL-6(ng/L)血清IL-8(ng/L)研究组(n=30)对照组(n=30)tP 10.4±2.4 9.1±1.1 0.248 0.892 0.842±0.005 0.702±0.012 1.009 0.482 0.048±0.16 0.027±0.09 14.558 0.005 0.098±0.24 0.58±0.12 19.528 0.002

李凯霞(1977.7-),女,江苏淮阳人,本科,主治医师,研究方向:妇产科。

刘福民(1958.10-),男,山东郯城人,硕士,主任医师,研究方向:妇产科。

猜你喜欢
羊膜胎膜绒毛
产前超声诊断羊膜带综合征2例
产前诊断羊膜腔穿刺术改期的原因分析
绒毛栗色鼠尾草根化学成分的研究
Toll样受体在胎膜早破新生儿宫内感染中的临床意义
DNA甲基转移酶在胚胎停育绒毛组织中的表达差异及临床意义
足月胎膜早破256例妊娠结局临床分析
胎膜早破伴新生儿感染的高危因素分析及其临床意义
经腹羊膜腔灌注术治疗未足月胎膜早破的临床效果观察
羊膜载体对人子宫内膜细胞HGF、MMP-9、VEGF表达的影响
胎膜早破和绒毛膜羊膜炎患者胎膜组织中MMP-9、MIF的表达和羊水中IL-6水平检测