免疫组化与黏液组化染色结合的双重染色技术的应用

吕　莉

免疫组化与黏液组化染色结合的双重染色技术的应用

吕莉

【摘要】目的 评价免疫组化与黏液组化染色结合的双重染色技术应用价值。方法 选取经手术切除的大肠黏膜组织70例，对其展开免疫组化染色，而后再展开黏液组化染色后复染，对染色结果进行分析。结果 黏蛋白MUC2阳性染色位置在细胞质、核周、核膜染色明显，部分细胞质内呈现弥漫性均质阳性，细胞核未着色；黏液组化染色后，腺体分泌中性物质呈现红色，酸性物质则呈天蓝色，混合物呈紫红色。结论 双重染色相对于单独染色而言，要求更高，并且两种染色方法不互相干扰，在同一张切片，分别进行免疫组化、黏液组化染色，效果明显，定位清晰，节约标本资源。

【关键词】免疫组化染色；黏液组化染色；双重染色技术

Objective To evaluate the immunohistochemical and mucus noted，immunohistochemical staining combined with double staining technique application value. Methods 70 cases of surgical removal of the large intestine mucosa tissue was elected to the study，the case for immunohistochemical staining，and then after a slime noted，immunohistochemical staining after dyeing，the dyeing results were analyzed. Results The mucins MUC2 positive staining in the week of cytoplasm，nuclear，nuclear membrane staining obviously，the cytoplasm rendering diffuse homogeneous part is positive，the nucleus not coloring，after mucous noted，immunohistochemical staining，glands are neutral red，acid is the sky blue，mixture is purple. Conclusion Double staining for separate dyeing， more demanding，two dyeing methods and does not interfere with each other in the same section，immunohistochemical and mucus noted，immunohistochemical staining respectively，obvious effect，clear positioning，save resources for specimens.

【Key words】Immunohistochemistry，Mucus staining，Double staining

近年来双重染色技术对单纯染色的缺陷予以了弥补，在病理学研究中有了重大突破［1］。本次研究对我院临床病理中心确诊的，经手术切除的大肠黏膜组织分别进行了免疫组化染色、黏液组化染色，现进行回顾性分析。

1　资料与方法

1.1 一般资料

选取我院临床病理中心确诊的，经手术切除大肠黏膜组织的患者70例，包括男39例，女31例，年龄21～78岁，平均（43.6±13.4）岁，腺瘤组织17例，腺癌组织53例。发病部位在直肠者44例，结肠者26例。所有患者均符合临床诊断标准［2］，自愿接受临床病理检查，并签署知情同意书。

1.2 方法

选取经手术切除的大肠黏膜组织70例（每组切取1份），组织处理：将以上收集得到的组织，经40%甲醛溶液进行固定，而后常规进行脱水、透明、石蜡包埋处理，完成上述处理后，切片，厚度在4 µm左右，裱在载玻片上，涂10%的多聚赖氨酸，首先对切片展开免疫组化染色，而后进行黏液组化染色后复染。

黏蛋白MUC2免疫组化与黏液组化双重染色：免疫组化法染色采取SP法进行，黏液组化染色采取AB-PAS法进行。上述制得的切片首先接受乙醇梯度洗脱，而后经蒸馏水清洗一次，3%双氧水室温条件下进行孵育，10 min后，经浓度为0.01 mol/L的柠橼酸盐展开微波抗原修复，12 min自然冷却至室温，经PBS冲洗3次，每次3 min，而后滴加山羊血清，室温培养20 min，滴加单克隆鼠抗人MUC2浓缩型抗体，4℃条件下保存过夜，而后经PBS冲洗3次，每次3 min，滴加二抗工作液，在室温下孵育15 min，经PBS冲洗3次，每次3 min，滴加辣根过氧化酶标记链霉卵白素工作液，室温孵育15 min，经PBS冲洗3次，每次3 min，DAB显色，显微镜下观察效果［3］。

2　结果

通过观察我们发现，黏蛋白MUC2阳性染色位置在细胞质，核周、核膜染色明显，部分细胞质内呈现弥漫性均质阳性，细胞核未着色；黏液组化染色后，腺体分泌中性物质呈现红色，酸性物质则呈现出天蓝色，混合物则呈现为紫红色。

3　讨论

临床病理学研究中［4-5］，免疫组化染色、组织化学染色均为常用的研究方法，在过去传统的病理学研究中，只能够单独应用一种染色方法，但是，因单一染色的局限性，无法提供足够的信息，并且在2张切片上进行着色，很难进行位置分离，结果判断困难。单纯染色的不足给临床病理学研究与工作带来了一定的阻碍，因此，寻找双重染色技术引起了人们的高度重视。近期有文献报道［6］，免疫组化染色结合黏液组化染色的双重染色技术可对单纯染色的缺陷予以弥补。

本次研究中出于对免疫组化与黏液组化染色结合的双重染色技术的应用价值进行评价分析，为今后的临床工作提供有价值的参考信息的目的，对我院临床病理中心确诊的，经手术切除的大肠黏膜组织分别进行了免疫组化染色、黏液组化染色，结果分析发现，黏蛋白MUC2阳性染色位置在细胞质，核周、核膜染色明显，部分细胞质内呈现弥漫性均质阳性，细胞核未着色；黏液组化染色后，腺体分泌中性物质呈现红色，酸性物质则呈现出天蓝色，混合物则呈现为紫红色。这一结果与相关文献［7-8］报道结果相似，由此证实，双重染色相对于单独染色而言，要求更高，并且两种染色方法不互相干扰，在同一张切片张，分别进行免疫组化、黏液组化染色，效果明显，定位清晰，节约标本资源。

参考文献

［1］刘洪博，刘艳彩，张新丽，等. 免疫组化双染技术在淋巴瘤亚型检测中的应用［J］. 临床与实验病理学杂志，2012，28（10）: 1174-1175．

［2］李禹兵，刘延香，路喻清. 非霍奇金淋巴瘤的研究进展［J］. 现代肿瘤学，2010，18（3）: 620-624．

［3］张爱凤，刘建娥，刘东风，等．Polymer 双染检测技术在肿瘤研究中的应用及改进［J］. 临床与实验病理学杂志，2010，26（4）: 499-500．

［4］周航波，马恒辉，饶秋，等. T/B（CD3+CD20）淋巴细胞免疫组化双染技术在淋巴瘤诊断中的应用［J］. 临床与实验病理学杂志，2011，27（2）: 209．

［5］范尔钟，李颖，王鸿，等. 免疫细胞化学双染技术探讨［J］. 临床与实验病理学杂志，2011，27（10）: 1143-1144.

［6］鞠学萍. 免疫组化染色的操作技巧和注意事项［J］.中国继续医学教育，2015，7（18）: 48-49.

［7］孙廷谊，孔令非. 自制组织微阵列在自动免疫组化染色中应用［J］.临床与实验病理学杂志，2012，28（5）: 585-586.

［8］马铁，纪莲，姜卫国. 新型全自动免疫组化染色机在临床病理工作中高标准化应用体会［J］. 中国医科大学学报，2012，41（7）: 662-663.

【中图分类号】R446

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2015）22-0164-02

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.22.124

作者单位：132001 吉林市人民医院病理科

Immunohistochemical Staining Mucus Combined With Dual Staining Technique

LV Li Department of Pathology，People's Hospital of Jilin City，Jilin 132001，China

【Abstract】