原发性胆汁性肝硬化自身抗体检测结果分析及临床应用

秦 雯，余 俊

(云南省昆明市第一人民医院检验科 650011)



·论 著·

原发性胆汁性肝硬化自身抗体检测结果分析及临床应用

秦 雯，余 俊

(云南省昆明市第一人民医院检验科 650011)

目的 探讨自身抗体检测在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中的临床应用价值。 方法 选择2011年5月至2012年5月在该院住院治疗，并接受自身免疫性肝病抗体检测的39例PBC患者为PBC组；并选择该院住院治疗并接受ENA检测的患者45例为疾病对照组；另选择该院体检中心自身抗体均为阴性的40例体检人员为健康对照组。采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(AMA)。免疫印迹法检测自身免疫性肝病抗体，包括抗-AMA-M2抗体、抗-SP100抗体、抗-GP210抗体、抗肝肾微粒体抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体(LC-1)和抗可溶性肝抗原抗体(SLA)。结果 PBC组中有27例AMA抗体阳性，抗体阳性率为69.2%，其中颗粒型16例、着丝点型6例、胞质型5例；抗-AMA-M2抗体阳性率为56.4%，抗-SP100抗体阳性率为41.0%，抗-GP210抗体阳性率为33.3%，LKM-1、LC-1抗体和SLA抗体均阴性。疾病对照组中AMA抗体的阳性率为62.3%，其中均质型4例、胞质型1例、着丝点型7例、颗粒型12例，其他抗体均未检出。健康对照组自身免疫性肝病抗体均为阴性。PBC组中抗-GP210抗体、抗-SP100抗体、抗-AMA-M2抗体阳性率与疾病对照组及健康对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PBC患者体内可以检测到多种自身抗体，其中GP210抗体、SP100抗体、抗-AMA-M2抗体检测对PBC的早期诊断具有重要意义。

原发性胆汁性肝硬化； 自身抗体； 抗核抗体

自身免疫性肝病是一组病因和发病机制尚不完全清楚，但多认为和自身免疫有关的肝脏疾病，临床多表现为黄疸、发热、关节炎等症状，实验室检测可发现自身抗体，有肝酶持续性升高，球蛋白升高，亦可合并其他系统的自身免疫性疾病。根据其临床表现、影像学改变、组织病理学特点可分为3种类型，包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)和原发性硬化性胆管炎(PSC)[1]。其中PBC是一种慢性肝内胆汁淤积性疾病，以中老年女性居多，绝大多数患者往往在疾病晚期才得以确诊。2000年美国肝病学会(AASLD)制订的PBC诊断指导中认为[2]，线粒体抗体(AMA)阳性是诊断本病的重要免疫学指标，95%～98%的PBC患者AMA阳性。据国内报道，只要AMA抗体和AMA-M2抗体阳性的患者，即使没有临床症状，最后都会出现胆汁淤积的生物化学改变和病理改变[3]。由此可见AMA抗体和AMA-M2抗体的出现可早于临床表现若干年，对PBC有早期诊断价值，本研究目的在于进一步明确PBC患者自身抗体检测的价值及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2011年5月至2012年5月在本院住院治疗，并接受自身免疫性肝病抗体检测的39例PBC患者为PBC组，其中女25例，男14例；平均年龄(63.0±12.8)岁。PBC诊断标准采用2000年AASLD的PBC诊断指导建议。选择同期在本院住院治疗并接受ENA检测的45例患者为疾病对照组，其中男15例，女30例；平均年龄(59.2±22.2)岁。45例疾病对照组患者主要为AIH、干燥综合征(SS)、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)、MCTC等自身免疫性疾病。选择同期在本院体检中心自身抗体均为阴性的40例体检人员为健康对照组，其中女17 例，男23例，平均年龄(47.9±19.3)岁。3组间一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，组间具有可比性。

1.2 方法 免疫印迹法检测自身免疫性肝病抗体，包括抗-AMA-M2抗体、抗-SP100抗体、抗-GP210抗体、抗肝肾微粒体抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体(LC-1)和抗可溶性肝抗原抗体(SLA)。将分别包被有多种纯化抗原的膜条作为固相，将检测膜条放置在温育槽内，室温加入标本缓冲液在摇床上温育5 min；血清用标本缓冲液1∶101稀释后与膜条反应，室温振荡孵育30 min；加入已稀释的酶结合物(碱性磷酸酶标记的抗人IgG)，室温振荡孵育30 min，加入底物液振荡孵育10 min，终止反应，风干后用标准对照膜条图观察膜条，清晰显色判为阳性。试剂盒由IMTEC-LIVER LIAS医学实验诊断公司提供，严格按试剂说明书进行操作。

1.3 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件包对数据进行统计学处理，计数资料用百分比表示，采用χ2检验；检验水准α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组自身免疫性肝病抗体检测结果比较 PBC组中有27例AMA抗体阳性，抗体阳性率为69.2%，其中颗粒型16例、着丝点型6例、胞质型5例；抗-AMA-M2抗体阳性率为56.4%，抗-SP100抗体阳性率为41.0%，抗-GP210抗体阳性率为33.3%，LKM-1、LC-1抗体和SLA抗体均阴性。疾病对照组中AMA抗体的阳性率为62.3%，均质型4例、胞质型1例、着丝点型7例、颗粒型12例，其他抗体均未检出。健康对照组自身免疫性肝病抗体均为阴性。PBC组中抗-GP210抗体、抗-SP100抗体、抗-AMA-M2抗体阳性率与疾病对照组及健康对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。而PBC组中AMA抗体阳性率与疾病对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组自身免疫性肝病抗体检测结果比较[n(%)]

2.2 抗-AMA-M2阴性患者中自身抗体的分布 39例PBC患者中有17例抗-AMA-M2阴性，而这17例患者都存在1种或2种(抗-GP210抗体、抗-SP100抗体)抗体阳性的组合，17例抗-AMA-M2阴性患者有12例抗-SP100抗体阳性，占70.6%，有4例抗-GP210抗体阳性，占23.5%。

3 讨 论

随着自身免疫性肝病抗体检测技术的日益提高以及在临床诊断中的广泛应用，PBC的发现率有逐渐增高的趋势[4]。本研究39例PBC患者中女性25例，占64.1%，男14例，占35.9%，平均年龄(63.0±12.8)岁，由此可见PBC以中老年女性居多。AMA抗体在PBC组中的阳性率为69.2%，在疾病对照组中的阳性率为62.3%，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)，说明AMA抗体对于自身免疫性肝病的分型诊断意义不大。有文献报道，PBC患者AMA抗体的常见荧光模式为着丝点型、核膜型和核点型，其中核膜型AMA是PBC的一个特异性血清学指标，它们的出现有助于 PBC的诊断[5]，而本研究中PBC组AMA核型分别为颗粒型16例、占59.3%，着丝点型6例、占22.2%，胞质型5例、占18.5%，这与上述报道不相符，分析原因可能为种族、所用试剂不同或操作人员之间的差异所致。

自身免疫性肝病特异性抗体是自身免疫性肝病诊断和分型的主要参考指标。PBC患者体内可出现多种自身抗体，其中最重要的是AMA，其抗体阳性率可高达95%，PBC患者在临床症状、生化和组织学异常表现出现之前，血清中即可出现高滴度的AMA。AMA的靶抗原有M1～M9 9个亚型，其中M2是PBC患者的标志性抗体，敏感性为95%～98%，特异性为86%～97%[6-7]。而本研究中抗-AMA-M2抗体的敏感性为56.4%，比以上报道的结果低，究其原因可能与检测方法的差异及种族等因素有关。因本院采用单独天然的M2 抗原检测方法，比采用天然M2抗原和重组蛋白BPO检测抗-AMA-M2抗体的灵敏度要低，也可能是在患者资料收集中掌握的诊断标准有差异所致。同时也可能与PBC患者体内的抗体转为阴性有关，此尚需进行进一步研究。39例PBC患者中有17例抗-AMA-M2阴性，而这17例患者都存在1种或2种(抗-GP210抗体、抗-SP100抗体)抗体阳性的组合，因此抗-GP210抗体、抗-SP100抗体、抗-AMA-M2抗体同时检测可以更好地辅助PBC的诊断。

抗-SP100抗体靶抗原是相对分子质量为100×103的可溶性酸性磷酸化核蛋白，点状分布于细胞核内[8]，抗-SP100对于PBC的诊断更具特异性(94%)[9]。本研究中该抗体在PBC中阳性率为41.0%，在其他肝病患者中呈阴性。抗-SP100抗体在AMA阴性的PBC患者中阳性率为60.0%，明显高于AMA阳性的患者(20.0%)，因而对AMA阴性的PBC患者诊断具有重要意义[10]。抗-GP210 抗体被认为是PBC的高度特异性抗体，其诊断PBC的特异性高达96%～99%，本研究中其阳性率为33.3%，和张洋等[10]文献报道基本一致，表明PBC患者中抗-GP210抗体阳性率较高，可以作为PBC诊断的初筛试验。本研究除了检测AMA、抗-AMA-M2抗体、抗-SP100抗体、抗-GP210抗体外，还检测了与自身免疫性肝病相关的LKM-1、LC-1抗体、SLA抗体，但在PBC患者中均未检测到与AIH特异性相关的这几种抗体。

综上所述，AMA抗体、抗-GP210抗体、抗-SP100抗体、抗-AMA-M2抗体在PBC患者中有较高的检出率，同时这几种抗体在PBC疾病中的表达具有差异性，因而不能忽视任何一个抗体在PBC疾病中的阳性表达，只要有一种抗体阳性，都应进一步检查其他以明确诊断。临床应根据自身特异性抗体的联合检测结果，及时对PBC做出早期诊断，才能防止PBC的漏诊。

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Results analysis and clinical application of auto-antibodies detection in primary biliary cirrhosis

QINWen,YUJun

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstPeople′sHospitalofKunming，Kunming，Yunnan650011，China)

Objective To investigate the value and clinical significance of auto-antibodies detection in primary biliary cirrhosis (PBC) patients.Methods A total of 39 patients with PBC accepted autoimmune liver disease antibody detection were selected in PBC group from May 2011 to May 2012,45 patients accepted ENA detection were selected in disease control group,other 40 healthy people were selected into health control group.Indirect immunofluorescence assay (IFA) were used to detect antinuclear antibodies(AMA).Western blot method was used to detect antibody of autoimmune liver disease including anti AMA,anti M2 antibodies,SP100 antibody,anti GP210 antibody,liver and kidney microsomal antibody resistance type I (LKM-1),liver cytosol antigen antibody of type Ⅰ (LC-1) and the soluble liver antigen antibody (SLA).Results A total of 27 patients with PBC had positive result of ANA antibodies,16 cases were particle type,6 cases were centromere type,5 cases were cytosolic,In all the 39 patients,ANA antibody positive rate was 69.2%,GP210 antibody positive rate was 33.3%,SP100 antibody positive rate was 41.0%,and AMA-M2 antibody positive rate was 56.4%.LKM-1,LC-1 antibody and SLA antibody were negative.The ANA antibody positive rate in the disease control group was 62.3%,4 cases were homogeneous type,1 case were cytosolic type,7 cases were centromere type and 12 cases were particle type.The autoimmune liver disease antibodies were all negative in the health control group.The positive rate of GP210 antibody,SP100 antibody,AMA-M2 antibodies in the PBC group were significant different with those of the disease control group and health control group,the differences were statistical significant (P<0.05)Conclusion Various autoantibodies could be detected in PBC patients,in which GP210,SP100,AMA-M2 antibody are important for the diagnosis and the differential diagnosis of PBC.

primary biliary cirrhosis; autoantibodies; antinuclear antibodies

秦雯，女，本科，主任技师，主要从事临床免疫学检验研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.020

A

1672-9455(2015)04-0484-02

2014-05-30

2014-08-27)