正交实验优选羟丙基-β-环糊精对右旋龙脑的增溶条件*

缪菊连，黄照昌，李红艳，杨丽娟

(1.大理学院药学与化学学院药物研究所，大理 671000；2.大理药业股份有限公司，大理 671000)

正交实验优选羟丙基-β-环糊精对右旋龙脑的增溶条件*

缪菊连1，黄照昌2，李红艳2，杨丽娟1

(1.大理学院药学与化学学院药物研究所，大理 671000；2.大理药业股份有限公司，大理 671000)

目的 探讨羟丙基-β-环糊精对右旋龙脑溶解度的影响。方法 采用气相色谱法测定右旋龙脑含量，设计L16(45)正交实验优选超声时间、羟丙基-β-环糊精浓度、温度、搅拌时间对右旋龙脑溶解度的影响。结果 超声时间为60 min，羟丙基-β-环糊精浓度25%，温度25 ℃，搅拌时间8 h，右旋龙脑溶解度为59.80 mg·mL-1。结论 羟丙基-β-环糊精对右旋龙脑溶解度有很大的提高。

羟丙基-β-环糊精；右旋龙脑；溶解度

右旋龙脑(bomeolum)原名龙脑香，又称天然冰片，俗称梅片，分子式为C10H180，原产于印尼的苏门答腊群岛，最早是从龙脑香[Dryobalanops arornatica Gaertmer]的树干经水蒸汽蒸馏的结晶产物，国内现为将樟科植物樟[CinnamomunCamphora(L.) Presl]的新鲜枝叶经水蒸汽蒸馏取其结晶产物即得。其气清香，味苦、辛凉，有通诸窍、散郁火、消肿止痛、消热解毒、去翳明目、开窍醒神、化腐生肌、抗癌治癌等药用功效，是名贵珍稀药材和高级香料[1]。右旋龙脑容易升华，制剂加工过程中损失较大[2]。为提高其稳定性，20世纪80年代有学者进行了右旋龙脑的包合研究[3-4]。另一方面，右旋龙脑的水溶解度小，约为0.3 mg·mL-1，液体制剂的开发存在一定困难。如何提高右旋龙脑的溶解度及溶出度，也是制剂研究者关注的课题。杜松等[5]采用羟丙基-β-环糊精与β-环糊精研究相溶解度问题，证明右旋龙脑与β-环糊精生成不溶性包合物，β-环糊精不能增加右旋龙脑的溶解度。右旋龙脑与羟丙基-β-环糊精生成可溶性包合物，羟丙基-β-环糊精可以增加右旋龙脑的溶解度，但没有对影响溶解度的因素做系统研究。笔者采用羟丙基-β-环糊精水溶液法，通过正交实验，优选羟丙基-β-环糊精提高右旋龙脑溶解度较佳的实验条件，为右旋龙脑的羟丙基-β-环糊精包合物液体制剂的制备提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 7890A气相色谱仪(Agilent公司)；SB5200DT超声清洗机[必能信超声(上海)有限公司]；HZS-H水浴震荡器(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)。

1.2 试药 右旋龙脑对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号：110881-200803，纯度：99.2%)，羟丙基-β-环糊精(西安德立化工有限公司，批号：20100327，纯度：99.8%)，右旋龙脑包合物(自制，纯度：93.7%)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 右旋龙脑含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：PEG-20M DB-WAX(30 m×0.53 mm，0.25 μm)；柱温：170 ℃；氢火焰离子化检测器(hydrogenflame ionization detector，FID)。进样口温度：170 ℃；氮气流量：70 mL·min-1；氢气流量：60 mL·min-1；空气流量：50 mL·min-1[6]。

2.1.2 溶液的制备 对照品溶液制备：精密称取右旋龙脑 20.0 mg，置10 mL 量瓶，以无水乙醇溶解并定容，摇匀，即为对照品溶液。供试品溶液制备：精密称取右旋龙脑包合物样品适量，置于10 mL量瓶，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，超声 20 min，冷却至室温，定容，过滤，即为供试品溶液。阴性样品溶液的制备：取不含右旋龙脑的阴性样品，按供试品溶液的制备方法操作，制成缺右旋龙脑的阴性样品溶液。

2.1.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.25，0.5，1.25，2.5，5 mL置于10 mL量瓶，用无水乙醇稀释至刻度，混匀。各取 1 μL 注入气相色谱仪测定。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y=721 660X-5 678.9，r=0.999 8,表明右旋龙脑在0.05～1.00 mg·mL-1范围内线性关系良好，且阴性样品不干扰右旋龙脑测定。

2.1.4 重复性实验 取右旋龙脑包合物，按供试品的制备操作，平行重复 6 次，测定右旋龙脑的含量，RSD为2.04%，表明该方法重复性良好。

2.1.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液1 μL，连续进样6次，求得右旋龙脑峰面积的RSD为1.57%，表明精密度良好。

2.1.6 稳定性实验 取右旋龙脑包合物，按供试品的制备操作，样品溶液放置 0，2，4，8，12，24 h 后，精密吸取1 μL，测定右旋龙脑含量，RSD为1.16%，表明溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.7 加样回收率实验 精密吸取已知含量的右旋龙脑包合物溶液置10 mL量瓶中，加入一定量的右旋龙脑对照品溶液，加乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，进样1 μL测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.1.8 样品的测定 精密吸取供试品溶液1 μL 注入气相色谱仪，记录峰面积，计算含量。

2.2 包合物的的制备 右旋龙脑的制备：取樟科植物樟[CirmamonunCamphora(L) Presl]的新鲜枝叶，经水蒸汽蒸馏，挥发油0 ℃冷藏得到析出的结晶，结晶再用石油醚(60～90 ℃)重结晶2次，得纯度为93.7%的右旋龙脑。包合物制备：配制不同浓度羟丙基-β-环糊精适量，分别加入用少量无水乙醇[7]溶解的右旋龙脑(足量)，超声一定时间，再在振荡器上平衡震荡一定时间，包合液室温放置过夜，用孔径0.45 μm微孔滤膜过滤，得到的滤液冷冻干燥，精密称重得固体包合物的量[8]。

表1 右旋龙脑加样回收率实验

2.3 正交实验设计优化包合工艺 根据文献及预实验结果，以羟丙基-β-环糊精浓度、超声时间、恒温搅拌时间及恒温温度为4个考察因素制订4水平正交表，按照L16(45)正交表进行正交设计。右旋龙脑溶解度=固体包合物中的量/配置环糊精的水量。因素水平见表2，实验结果及直观分析见表3，方差分析见表4。

表2 L16(45)正交实验因素水平

由极差R可知，各因素对右旋龙脑溶解度影响顺序为A>B>D>C，即羟丙基-β-环糊精浓度为最主要影响因素，其次是超声时间和恒温温度，最后是搅拌时间，从方差分析表4可知因素A 4个水平因素对右旋龙脑溶解度效果有统计学意义(P<0.05)，B、C和D水平内差异无统计学意义，根据实验结果并结合实际生产经济性的要求，确定较好的实验方案为A4B1C1D1，即右旋龙脑溶解度较高的实验条件为：羟丙基-β-环糊精浓度25%，超声时间为60 min，搅拌时间8 h，温度25 ℃。

表3 L16(45)正交实验安排与结果

A.羟丙基-β-环糊精浓度；B.超声时间；C.搅拌时间；D.温度

表4 方差分析表

F0.05(3,3)=9.280；A.羟丙基-β-环糊精浓度；B.超声时间；C.搅拌时间；D.温度

2.4 工艺验证实验 据以上所优选条件，重复较佳工艺5次，同时测定右旋龙脑包合率，结果见表5。右旋龙脑包合率计算公式如下：右旋龙脑包合率(%)=包合物中右旋龙脑量/右旋龙脑加入量×100%。平均溶解度为59.80 mg·mL-1，平均包合率82.39%，该工艺稳定。

3 讨论

表5 工艺验证结果

右旋龙脑在水中溶解度很小，为了提高包合效果，可用少量乙醇等有机溶剂溶解。用少量无水乙醇溶解后放入配制羟丙基-β-环糊精相同量的水中，溶解度约为10.8 mg·mL-1，将其用羟丙基-β-环糊精制备成包合物后，溶解度增加到59.80 mg·mL-1，溶解度增加约5.5倍，比杜松等[5]研究溶解度为32 mg·mL-1增加约1.88倍；用超声震荡，可加快右旋龙脑的溶解平衡。在制备右旋龙脑羟丙基-β-环糊精包合物的供试品溶液含量测定时，应选择合适的脱包方法，由于乙醇具有较强的极性，能完全破坏右旋龙脑羟丙基-β-环糊精包合物，从而使右旋龙脑完全游离出来[9]，便于包合物含量的测定。羟丙基-β-环糊精是环糊精的衍生物，极易溶于水，是目前研究最多、对药物增溶和提高药物稳定性效果最好的环糊精衍生物[10]。右旋龙脑制成羟丙基-β-环糊精包合物后溶解度有很大的提高，又可减少挥发损失。

[1] 李时珍.本草纲目(木部第三十四卷)[M].北京：人民卫生出版社，1982：1960-1970.

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2014-01-22

2014-02-25

*大学生科研基金项目(KYSX2013084)

缪菊连(1977-)，女，云南宣威人，副教授，硕士，从事药剂学的研究与教学工作。电话：(0)15125282836，E-mail：582090645@qq.com。

R286；TQ460.1

B

1004-0781(2015)02-0266-03

DOI 10.3870/yydb.2015.02.035