自体造血干细胞移植对恶性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脱氢酶活性的影响研究

蔡坤，王昭前，庞海云

(海南省人民医院 检验科，海南 海口 570311)



自体造血干细胞移植对恶性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脱氢酶活性的影响研究

蔡坤，王昭前，庞海云

(海南省人民医院 检验科，海南 海口 570311)

目的 探讨自体造血干细胞(autologous peripheral blood stem cell，APBSC)移植对恶性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脱氢酶活性影响的研究。方法 收集海南省人民医院2013年5月～2014年5月收治的恶性淋巴瘤患者80例，随机对照组和实验组，每组各40例，2组霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)患者采用ABVD(多柔比星、博来霉素、长春新碱、达卡巴嗪)方案为主的化疗；非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)患者多采用标准CHOP(环磷酰胺、长春新碱、表柔比星、地塞米松)方案为基础的化疗，采用化疗药物联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)开始APBSC动员，化疗后骨髓抑制期应用10 μg/(kg·d)的G-CSF 5，检测白细胞升至3.0×109/L，血小板升至50×109/L时，采集APBSC,加入细胞冻存保护液冻存。预处理结束24 h后，将冻存的外周血造血干细胞锁骨下静脉回输给实验组患者，接受自体造血干细胞移植治疗。对照组患者继续接受化疗治疗。治疗结束后，对所有患者的Cu水平、Zn水平及乳酸脱氢酶活性进行检测。结果 治疗后，2组患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平下降(P<0.05)；与对照组相比，实验组治疗后Zn水平较高(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平较低(P<0.05)；治疗后，2组患者乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05)，与对照组比较，实验组治疗后乳酸脱氢酶活性较低(P<0.05)。结论 自体造血干细胞移植可以显著降低恶性淋巴瘤患者的Cu水平、升高Zn水平及降低乳酸脱氢酶活性，对临床有指导意义。

自体造血干细胞移植；恶性淋巴瘤；Cu；Zn；乳酸脱氢酶

恶性淋巴瘤(malignant lymphoma，ML)简称淋巴瘤，是一组起源于淋巴造血组织的恶性肿瘤[1]。分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)两大类。近年来非霍奇金淋巴瘤发病率逐年升高，而霍奇金淋巴瘤则有下降的现象，绝大部分霍奇金淋巴瘤可治愈，大多数非霍奇金淋巴瘤多为慢性、难治性恶性肿瘤，易复发，治疗困难[2]。非霍奇金淋巴瘤为临床最常见的侵袭性淋巴瘤，常规治疗存活率为3成，但复发难治的NHL的预后不良且长期生存改善不明显。自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation，AHSCT)是一种新技术，目前应用于巩固淋巴瘤大剂量化疗疗效的最佳方法[3]，可以提高淋巴瘤患者存活率，本项技术不受供者来源的限制，因而已经成为治疗淋巴瘤的一种重要手段[4]。目前自体造血干细胞移植方法主要为外周血干细胞移植，此外还有骨髓干细胞移植和脐血干细胞移植等。本文通过观察自体造血干细胞移植对恶性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脱氢酶活性的影响，以探究自体造血干细胞移植对恶性淋巴瘤患者的疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集海南省人民医院2013年5月～2014年5月收治的恶性淋巴瘤患者80例，随机分为实验组和对照组，每组40例。实验组男19例，女21例，年龄18～45岁，平均年龄(28.6±4.9)岁；NHL18例，HL22例，临床分期Ⅱ期13例，Ⅲ期14例，Ⅳ期13例。对照组男22例，女18例，18～46岁，平均年龄(29.2±4.7)岁，NHL20例，HL20例，临床分期Ⅱ期12例，Ⅲ期13例，Ⅳ期15例。2组患者在性别、年龄、病程分期比较差异无统计学意义。

患者符合2010《中国版NCCN恶性淋巴瘤治疗指南》[5]的国内标准明确诊断为淋巴瘤；患者年龄≤60岁；连续完成2个或以上化疗；根据《医疗机构管理条例》，患者签署知情同意书。

1.2 排除标准 排除不符合上述诊断标准和纳入标准者；患有严重心、肺、肝、肾等脏器并发症的患者；各种急慢性感染患者；妊娠患者；不能耐受超大剂量化疗、放疗的患者；常规化疗未缓解的复发难治性淋巴瘤。

1.3 方法

1.3.1 造血干细胞动员前治疗：2组HL患者采用ABVD(多柔比星、博来霉素、长春新碱、达卡巴嗪)方案为主的化疗；NHL患者多采用标准CHOP(环磷酰胺、长春新碱、表柔比星、地塞米松)方案为基础的化疗。

1.3.2 造血干细胞动员及冻存：在诱导治疗结束后，患者心、肺、肝、肾功能正常，骨髓造血功能恢复正常，多数动员采用化疗药物联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)开始APBSC 动员。化疗后骨髓抑制期应用G-CSF 5，剂量为10 μg/(kg·d)，检测白细胞及血小板水平，白细胞升至3.0×109/L，血小板升至50×109/L时，开始使用外周血细胞分离机采集APBSC 1～2次。自体干细胞采集后加入细胞冻存保护液，并于-80 ℃冰箱中冻存。

1.3.3 造血干细胞回输：预处理结束24 h后，将冻存的外周血造血干细胞锁骨下静脉回输给实验组患者，接受自体造血干细胞移植治疗。对照组患者继续接受化疗治疗。

1.3.4 锌(Zn)和铜(Cu)的含量测定：2组患者晨起空腹取静脉血3～4 mL，经去离子水清洁处理后的试管中。离心取上清液2 mL。用原子吸收光谱法测定血清中Zn和Cu的含量并计算出铜/锌比值。仪器采用北京普析通用仪器有限公司生产的MBS血液五元素分析仪，所需试剂均购于北京普析通用仪器有限公司生产的配套试剂。

1.3.5 乳酸脱氢酶活性的测定：用比色法检测乳酸脱氢酶活性，采用罗氏公司生产的cobasc501全自动生化分析仪及其配套试剂进行检测：2组患者清晨空腹抽取静脉血10 mL，放入抗凝管中，-4 ℃保存。采用干式化学法法检测LDH，首先采血前用毛细吸管采取血30 μL，滴加在测试条加样区中央，打开分析仪检测舱盖，将待测测试条置于测试槽内，测试条上的空位孔套在测试槽中的空位杆上，关闭检测舱盖，仪器自动检测，120 s结束测试，屏幕显示乳酸脱氢酶的测定值，试剂盒购自四川迈克科技有限公司提供。

1.3.6 支持治疗：移植期间患者于无菌层流病房中居住，进无菌食物，根据患者当时营养情况酌情给予肠外营养。若患者出现贫血症状，则给予患者适当输全血及血小板。

2 结果

2.1 治疗前后患者Zn和Cu的水平比较 治疗后，2组患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平下降(P<0.05)；与对照组相比，实验组治疗后Zn水平较高(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平较低(P<0.05)。见表1。

组别 例数时间Zn(mg/L)Cu(mg/L)Cu/Zn对照组40治疗前0.72±0.101.49±0.152.21±0.30治疗后0.94±0.10*1.05±0.13*1.75±0.22*实验组40治疗前0.74±0.111.51±0.222.15±0.26治疗后1.32±0.13*#0.79±0.14*#0.84±0.11*#

*P<0.05，与同组治疗前相比，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后相比，compared with control group post-treatment

2.2 治疗前后2组乳酸脱氢酶活性比较 与治疗前比较，治疗后2组患者乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05)，与对照组比较，实验组治疗后乳酸脱氢酶活性较低(P<0.05)。见表2。

组别 例数时间乳酸脱氢酶活性对照组40治疗前278.72±31.38治疗后210.6±32.11*实验组40治疗前283.37±36.75治疗后156.48±20.26*#

*P<0.05，与同组治疗前相比，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，与对照组治疗后相比，compared with control group post-treatment

3 讨论

造血干细胞移植这项技术的出现，为恶性淋巴瘤患者的长期存活带来了希望。造血干细胞移植的自体造血干细胞移植应用广泛，它具有适用人群广、并发症少、无排斥反应和安全经济等优点，因此该疗法不但是复发难治性淋巴瘤及预后不良的侵袭性淋巴瘤的首选治疗，已发展为恶性淋巴瘤患者的最佳治疗。尽管AHSCT在NHL的治疗中取得一定效果，但40%～70%的NHL患者在接受AHSCT治疗后仍难免复发[7]。为了明确复发原因，首先必须明确自体干细胞抑制治疗血液病的机制，本文就此问题进行了深入研究。

铜是血、肝、脑等铜蛋白的组成部分[8]，30种以上的蛋白和酶中均含有铜，正常人体内铜基本以铜蓝蛋白形式存在，只有少数与其他蛋白质结合。研究证实乳腺癌、白血病、女性生殖器官肿瘤、肺癌及胃肠道肿瘤等多种恶性肿瘤患者血清铜含量均升高[9]。有研究显示，锌与肿瘤的发生、发展关系密切，并可作为某些肿瘤的诊断、疗效检测指标。锌缺乏导致人体α-干扰素降低致TH/TS下降并抑制粒细胞、NK细胞的功能，机体免疫功能低下，导致肿瘤的发生与发展[10]。本研究结果也证实，恶性淋巴瘤患者的血清铜显著升高。血清铜上升常伴有血清锌下降，有学者推测为Zn是通过锌α2-糖蛋白对肿瘤进行调控，锌α2-糖蛋白是一种分布于多种体液中且功能复杂的蛋白质，在肿瘤恶病质中高表达，它的特点即为大量消耗人体内的脂肪[11]，但其具体发生机制尚不明确。铜/锌比值比单项铜含量或锌含量更能精确地反映癌肿的病情变化，可作为临床诊断的标准。本实验结果显示，恶性淋巴瘤患者血清治疗后，2组患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平下降(P<0.05)；与对照组相比，实验组治疗后Zn水平较高(P<0.05)，Cu与Cu/Zn水平较低(P<0.05)，提示经治疗2组患者的淋巴瘤得到控制，实验组疗效更优，显示出造血干细胞的治疗优势。

乳酸脱氢酶(LDH)为糖酵解酶，体现了肿瘤的增生活性。研究显示，恶性淋巴瘤患者的LDH水平会显著升高[12]，且LDH水平与肿瘤大小和临床分期等因素有密切关系，LDH为对肿瘤疾病的预后、疗效等具有重要意义。本研究结果显示，恶性淋巴瘤患者的LDH水平显著升高，经自体造血干细胞移植治疗后，2组患者的乳酸脱氢酶活性均显著降低，与对照组水平相比，实验组患者的乳酸脱氢酶活性降低较明显(P<0.05)，说明LDH可以更好的指导ML分期、预后、治疗。肿瘤细胞最根本的生物学特征是分化停滞和无限增殖。

本研究通过探究自体造血干细胞移植对恶性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脱氢酶活性的影响，证实了自体造血干细胞移植能够显著降低恶性淋巴瘤患者的Cu水平、升高Zn水平及降低乳酸脱氢酶活性，本实验所反映的现象将在进一步的研究中做出论证，为临床应用提供依据。

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(编校：王冬梅)

Effect of autologous hematopoietic stem cell transplantation on serum trace elements and lactate dehydrogenase activity in patients with malignant lymphoma

CAI Kun, WANG Zhao-qian, PANG Hai-yun

(Department of Laboratory, Hainan Provincial People’s Hospital, Haikou 570311, China)

ObjectiveTo investigate effect of autologous hematopoietic stem cell transplantation on serum trace elements and lactate dehydrogenase activity in patients with malignant lymphoma.Methods80 patients with malignant lymphoma collected in our hospital from May 2013 to May 2014，40 cases in each group, Hodgkin lymphoma (HL) patients were treated with ABVD (doxorubicin, bleomycin, vincristine, dacarbazine) regimen of chemotherapy; Non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) patients were treated with standard CHOP (cyclophosphamide, vincristine, epirubicin, dexamethasone) regimen of chemotherapy of two group.Chemotherapy drugs combined with granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) was used to mobilize APBSC.Application of 10 μg/(kg·d)G-CSF 5 in bone marrow suppression after chemotherapy, detected white cell increased 3.0×109/L ,platelets rose to 50×109/L, collected APBSC,The frozen stock solution of cell was joined and frozen.24 h after pre-treatment, the frozen peripheral blood hematopoietic stem cells of the subclavian vein was transfused for patients in experimental group. Control group continued to receive chemotherapy.After treatment, the Cu level, Zn level and lactate dehydrogenase activity were detected in all patients.ResultsAfter treatment, Zn levels of two groups increased (P<0.05), Cu and Cu/Zn levels decreased (P<0.05).Compared with control group, the level of Zn was higher in experimental group (P<0.05), and the level of Cu and Cu/Zn was lower (P<0.05).After treatment, the lactate dehydrogenase activity of two groups decreased (P<0.05), and experimental group was more lower than control groupy (P<0.05).ConclusionAutologous hematopoietic stem cell transplantation can significantly reduce the level of Cu in patients with malignant lymphoma, elevate Zn level and decrease the activity of lactate dehydrogenase, which has guiding significance for clinical.

autologous hematopoietic stem cell transplantation; malignant lymphoma; Cu; Zn; lactate dehydrogenase

蔡坤，男，大专，主管技师，研究方向：临床检验，E-mail：caikunhainan@126.com。

R733

A

1005-1678(2015)08-0083-03