体液免疫因子与脂质过氧化反应终产物在DEACMP患者中变化研究

付盈菊，李君蕊，刘华群

(1.唐山工人医院 急诊内科，河北 唐山 063000； 2.唐山工人医院 感染内科，河北 唐山 063000；3.唐山工人医院 放化疗科，河北 唐山 063000)



体液免疫因子与脂质过氧化反应终产物在DEACMP患者中变化研究

付盈菊1，李君蕊2，刘华群3

(1.唐山工人医院 急诊内科，河北 唐山 063000； 2.唐山工人医院 感染内科，河北 唐山 063000；3.唐山工人医院 放化疗科，河北 唐山 063000)

目的 探究急性一氧化碳中毒迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisioning，DEACMP)患者血清免疫因子及脂质过氧化产物变化及临床意义。方法 选取2013年8月～2014年12月因急性一氧化碳中毒后发生迟发性脑病患者40例，另选取同期在唐山工人医院体检中心体检的健康人40例为对照组。比较2组患者血清中IL-2、IL-6、IL-10及MDA水平，并分析其临床意义。结果 急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者入院时血清IL-2、IL-6 水平明显低于正常对照组(P<0.05)，IL-10、MDA 水平明显高于正常对照组(P<0.05)，经治疗后均有所恢复(P<0.05)；实验组患者血清中IL-6浓度水平与MMSE评分相关(r=0.34,P<0.05)，且认知障碍程度越重，IL-6 浓度水平越高(P<0.05)。其结果均有统计学意义。结论 免疫炎症因子和脂质过氧化反应终产物MDA均在急性一氧化碳中毒迟发性脑病发病过程发挥了重要作用，检测其浓度水平对于判断患者病情严重程度和预后具有重要意义。

急性一氧化碳中毒迟发性脑病；白介素2；白介素6；白介素10；丙二醛

急性一氧化碳中毒迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisioning，DEACMP)是指急性一氧化碳中毒患者经治疗意识障碍恢复后，经过数天至数周正常或基本正常的治愈期(假愈期)后，出现以急性痴呆为主的精神神经障碍症状，本病发病率约为10%～30%[1]。关于DEACMP的发病机制仍不明确，目前关于急性一氧化碳中毒迟发性脑病的发病机制主要提出了以下几种学说[2]：缺血缺氧、细胞毒性损伤、自由基影响、神经递质代谢异常、神经免疫等。有研究显示[3]，急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素8(IL-8)较正常人高。故我们推测免疫因子可能与急性一氧化碳中毒迟发性脑病的发病有关。白介素是由单个核细胞(淋巴细胞及单核-巨噬细胞)产生的一组细胞因子，主要作用于淋巴细胞，巨噬细胞和其他细胞，参与机体的免疫炎症反应[4]。丙二醛(malonialdehyde，MDA)是脂质氧化的终产物，可间接反应脂质氧化的程度和氧自由基的生成水平[5]。本研究通过观察比较DEACMP患者和正常人血清中白介素2、6、10及丙二醛水平的变化，探讨白介素和丙二醛在DEACMP发生发展过程中的作用，为急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者的治疗提供新的思路和方法。

1 资料与方法

1.1 临床资料 病例来源选择2013年8月～2014年12月于本院神经内科以急性一氧化碳中毒迟发性脑病为诊断而收入院的患者40例，依据 MMSE评分将实验组患者治疗前分为轻度、中度、重度认知障碍组。同期选取40例在本院体检中心体检健康的正常人作为对照，2组研究对象的年龄均在20～60岁。其中实验组男性22例，女性18例，平均年龄(45.23±6.24)岁；对照组男性19例，女性21例，平均年龄(46.72±7.18)岁。2组研究对象性别、年龄比较差异无统计学意义。

1.2 诊断及排除标准

1.2.1 纳入标准：根据西医学第八版《急诊内科学》[6]中急性一氧化碳中毒迟发性脑病的诊断标准而拟定以下纳入标准：①急性一氧化碳中毒病史；②经过2～60 d正常或基本正常的假愈期后，出现以急性痴呆为主的精神神经障碍症状；③CT或核磁共振等影像检查符合急性一氧化碳中毒迟发性脑病的改变；④患者或其家属同意并自愿参与本实验。

1.2.2 排除标准：①不愿参与本研究或不符合纳入标准者；②既往患有精神神经障碍疾病者；③患有乙肝、艾滋病等具有传染性较强疾病者；④合并有严重肝、肾功能不全疾病患者；⑤患有心肌梗死、心力衰竭、肺心病、呼吸衰竭、严重血液病等重大原发疾病者；⑥年龄低于20岁或超过60岁者。

1.3 方法 所有急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者均接受高压氧、营养神经细胞、激素、降低颅内压、减轻脑水肿及对症治疗等常规治疗。所有DEACMP患者均在入院治疗前空腹采集静脉血，装入预先装有EDTA的抗凝采血管中。将采血管按3000 r/min，离心10 min，待离心结束后将上层血清装入EP管中，放入-80 ℃冰箱中保存备用。所有健康对照者均同期空腹采集5 mL肘静脉血做一次同样处理。以上均由本院检验科专业人员负责操作。

1.4 观察指标及检测方法

1.4.1 IL-2，IL-6，IL-10浓度的测定：本研究采用双抗体夹心法检测所有研究对象血清中白介素的浓度水平。首先用人白介素抗体免疫实验微孔板，再分次向微孔中加入IL-2，IL-6，IL-10，与 HRP 标记的白介素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，最后加底物TMB显色。显色后，TMB在HRP酶的催化下发生连续的颜色转化，最后变为黄色。由于颜色深浅与标本血清中的白介素浓度呈正比例关系，用全自动酶标仪测定标本的吸光度(OD 值)，最终通过绘制标准曲线可精确计算标品中的白介素浓度。

1.4.2 丙二醛浓度的测定：本研究同样采用双抗体夹心法检测所有研究对象血清中丙二醛的浓度水平。首先用人丙二醛抗体包被微孔板，接着向微孔中加入丙二醛(MDA)，然后与 HRP 标记的丙二醛抗体结合，形成抗体-抗原-酶标记抗体复合物，最后再加底物 TMB 显色。余实验步骤同上。

1.4.3 日常生活能力量表[7](activity of daily living scale, ADL)：主要用于评定研受试者的日常生活能力。通过询问研究对象14项日常生活能力以评分：乘公共汽车；干家务；做饭菜；穿衣服；梳头发，服药；洗衣；刷牙；洗澡；定时大小便；行走；采购；打电话；理财。每项分 4 级，分别1～4分。1分：自己完全可以做；2分：存在困难；3分：需要帮助；4分：无法做。总分 14 分表示日常生活能力完全正常，大于 14 分提示有不同程度的功能下降，分数越高，下降程度越重。

1.4.4 简易智力状态检查量表[8](mini-mental state emination, MMSE)：通过询问受试者相关问题，测定其定向力，注意力，计算力，记忆力及语言能力。依据受试者回答的正确程度进行评分，总分30分，24～30分表示无认知功能障碍，低于24分提示存在不同程度的认知功能障碍。认知功能障碍严重程度的分级依据评分评定：≥21分为轻度认知功能障碍，10～20分为中度认知功能障碍，≤9分为重度认知功能障碍。

2 结果

2.1 血清IL-2、IL-6、IL-10及MDA比较 本研究显示，DEACMP患者入院时血清中 IL-2、IL-6 浓度水平低于对照组(P<0.05)，经治疗，患者血清 IL-2、IL-6浓度水平升高(P<0.05)；血清IL-10、MDA 水平高于对照组(P<0.05)，经治疗，血清IL-10、MDA 水平下降(P<0.05)。见表1。

表1 各组血清中IL-2、IL-6、IL-10及MDA浓度水平的比较Tab.

*P<0.05，与对照组比较，compared with control group；#P<0.05；实验组治疗前比较，compared with the experment group before treatment

2.2 实验组治疗前后ADL、MMSE量表评分比较 经2周常规治疗后，DEACMP患者的ADL评分较入院时明显降低，MMSE评分较入院时显著升高，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 实验组ADL、MMSE量表评分比较，分)Tab.2 Comparison of ADL and MMSE score of experiment ±s，score)

*P<0.05，与治疗前比较，compared with before treatment

2.3 血清免疫因子与ADL、MMSE的相关性分析 采用DEACMP患者治疗前后血清中各检测指标水平的差值和评分的差值，两两比较作相关性分析。DEACMP 患者血清中 IL-6 浓度水平与 MMSE 评分明显相关，其余各指标无相关性。见表3。

表3 血清免疫因子与ADL、MMSE的相关性Tab.3 Relevance of ADL, MMSE and immune factors

2.4 轻度、中度、重度认知障碍组治疗前血清免疫因子水平比较 中、重度认知障碍患者血清中IL-6水平均高于轻度组；重度认知障碍患者血清IL-6高于中度组(P<0.05)。见表4。

表4 各认知障碍组治疗前血清免疫因子水平比较±s)Tab.4 Comparison of immune factors of 3 groups of cognitive ±s)

*P<0.05，与轻度认知障碍组比较，compared with mild cognitive impairment group；#P<0.05，与中度认知障碍组比较，compared with mild moderate cognitive impairment group

3 讨论

一氧化碳(CO)通过导致组织缺氧而引起人体中毒。CO吸入人体后，可与人血清中红细胞中的血红蛋白结合成稳定的碳氧血红蛋白(COHb)。CO与血红蛋白的结合力比氧气(O2)与血红蛋白的结合力大约高240倍。COHb不携带O2，且解离速度慢，大约为氧合血红蛋白(O2Hb)的1/3600。COHb使氧合血红蛋白解离曲线左移，影响O2Hb的解离和二氧化碳(CO2)的排出，从而导致组织缺氧和CO2潴留[9]。DEACMP临床主要表现为以急性痴呆为主的精神神经障碍，其发生率占急性一氧化碳中毒患者的3%～10%。神经免疫反应在急性一氧化碳中毒迟发性脑病的发生发展过程中起到了重要的作用。有动物实验发现[10]，急性一氧化碳中毒迟发性脑病的大鼠及兔的脑组织和脑脊液中MDA浓度水平升高。目前研究白介素及丙二醛在急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者发病过程中作用较为少见。

研究结果发现，DEACMP患者入院时血清中 IL-2、IL-6 浓度水平明显低于正常对照组，经过2周常规治疗后其有所升高，但仍比正常对照组低。DEACMP患者入院时血清中IL-10、MDA 水平明显高于正常对照组，经过2周常规治疗后其有所下降，其原因可能是人体吸入一氧化碳后，导致脑组织缺氧，神经细胞变性坏死，从而导致机体分泌释放大量的炎症因子。IL-2、IL-6分别是Th1、TH2分泌的炎症因子。IL-2、IL-6可直接参与神经髓鞘的自身免疫反应，导致髓鞘剥脱，出现一系列神经损害症状。由于IL-2、IL-6在急性一氧化碳中毒期消耗了较多，导致DEACMP患者血清中IL-2、IL-6下降。此时患者机体免疫力低下，随着治疗，IL-2、IL-6浓度升高，但仍低于正常。IL-10 抑制细胞的免疫反应，可抑制 IL-2，IL-6等炎症因子，抑制细胞聚集及趋化。因此，DEACMP患者入院时血清中IL-10高于正常，随着病情恢复，IL-10逐渐降低，但仍高于正常。由此可推测免疫炎症反应在DEACMP发生发展过程中起到了重要的作用。DEACMP患者入院时MDA浓度高于正常，其原因可能是脑组织缺氧，诱发脂质过氧化反应增强，MDA作为脂质过氧化反应的产物，故MDA的浓度水平升高。随着病情的恢复，MDA浓度水平也逐渐回落[11-12]。由此可见，自由基及其所诱发的脂质过氧化反应参与了DEACMP患者的脑组织损伤过程。

经2周常规治疗后，DEACMP患者的ADL评分较入院时明显降低(P<0.05)，MMSE评分较入院时显著升高(P<0.05)，其原因可能是DEACMP患者入院时脑组织缺氧，神经细胞变性坏死，导致患者日常生活能力下降，智力减退。经过常规治疗后，脑组织损伤减轻，病情恢复，日常生活能力和智力都有所提高，但仍低于正常。本研究中，将DEACMP患者血清中各检测指标水平和评分两两比较作相关性分析，发现DEACMP 患者血清中 IL-6 浓度水平与 MMSE 评分明显相关(r=0.34,P<0.05)，其余各指标无相关性。将DEACMP患者按MMSE评分分为轻、中、重度认知障碍，研究发现中度认知障碍患者血清中IL-6浓度水平均明显高于轻度认知障碍组，重度认知障碍患者血清中IL-6浓度水平高于轻、中度认知障碍组，提示DEACMP患者疾病程度越严重，神经缺损功能越重，血清中IL-6浓度水平越高，DEACMP与IL-6的相关性提示，测定IL-6的浓度水平对于预测和判断疾病的严重程度和预后有重要的临床价值[13-14]。

本研究通过对比观察40例DEACMP患者和40例健康者血清中IL-2、IL-6、IL-10、MDA的浓度水平，证实了免疫炎症因子介导的神经免疫反应在DEACMP疾病的发生发展中发挥了重要作用。在未来的研究中，将从分子层面对DEACMP进行研究，为本实验所得出的结果做出进一步的论证和分析。

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(编校：谭玲)

Study on change of humoral immune factors and MDA in DEACMP patients

FU Ying-ju1, LI Jun-rui2, LIU Hua-qun3

(1.Department of Emergency Internal Medicine, Tangshan Workers Hospital, Tangshan 1063000, China; 2.Department of Infection Internal Medicine, Tangshan workers Hospital, Tangshan 1063000, China; 3 Department of Chemotherapy, Tangshan Workers hospital, Tangshan 1063000, China)

ObjectiveTo explore changes humoral immune factors and MDA in DEACMP patients.Methods40 cases with carbon monoxide poisoning delayed brain were selected to be experiment group.40 cases of healthy people were selected to be control group.IL-2,IL-6,IL-10 and MDA were before and after treatment.ResultsIL-2,IL-6 of the experiment group were lower,IL-10,MDA were higher than the control group before treatment(P<0.05),both of IL-2,IL-6,IL-10 and MDA were recovery after the treatment (P<0.05).IL-6 of the experiment before treatment was significantly correlated with MMSE score(r=0.34,P<0.05).More severe cognitive impairment, the higher the level of concentration of IL-6(P<0.05).ConclusionThe immune inflammatory cytokines and MDA play an important role in acute carbon monoxide poisoning delayed encephalopathy pathogenesis. Detection of the levels for judging the severity of the patient’s condition and prognosis has important significance.

delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisioning; interleukin 2; interleukin 6; interleukin 10; malondialdehyde

付盈菊，女，本科，副主任医师，研究方向：白细胞介素基因多态性与相关临床疾病关系，E-mail：tangsfyj@sina.com。

R595.1

A

1005-1678(2015)05-0146-04