老年心脑血管病患者MTHFR基因多态性与血清叶酸、HCY水平的关系

陈素峰，周永列，章燕青，夏 骏，陈永健，单志明，胡庆丰

( 1. 浙江中医药大学医学技术学院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民医院，浙江 杭州310014；3. 温州医科大学检验医学学院，浙江 温州 325035；4. 浙江省临床检验中心，浙江 杭州 310014)

老年心脑血管病患者MTHFR基因多态性与血清叶酸、HCY水平的关系

陈素峰1,2，周永列2@，章燕青3，夏 骏2，陈永健2，单志明4，胡庆丰2

( 1. 浙江中医药大学医学技术学院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民医院，浙江 杭州310014；3. 温州医科大学检验医学学院，浙江 温州 325035；4. 浙江省临床检验中心，浙江 杭州 310014)

目的探讨老年心脑血管病患者亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与血清同型半胱氨酸(HCY)、叶酸的关系。方法分析286例患者的MTHFRC667T基因多态性，叶酸、维生素B12、HCY水平和大血小板比例。结果老年心脑血管病患者中MTHFR667基因野生型(C/C型)、杂合突变型(C/T型)、纯合突变型(T/T型)频率分别为28.7%，41.2%，30.1%，且男女间无差异；血清HCY与叶酸、维生素B12呈负相关(P<0.05)，T/T型、C/T型的叶酸明显低于C/C型 (P<0.05)，而比较3型的HCY差异无统计学意义；T/T型的MCV、大血小板比例、FPG、TG、TC、LDL-C明显高于C/T型与C/C型(P<0.05)。结论老年心脑血管患者的MTHFR基因多态性与血清HCY无关，但与叶酸、维生素B12、血糖血脂和大血小板比例有关。

心脑血管病；MTHFR基因多态性；叶酸；同型半胱氨酸

Abstract: [Objective]To investigate the relationship between serum folate, homocysteine(HCY) and methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) genepolym-orphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases. [Method]Examine MTHFR gene polymorphism, folate, vitaminB12, HCY and proportion of large platelet. [Result]The frequency of C/C type, C/T type and T/ T type was 28.7%, 41.2% and 30.1%; Homocysteine had negative correlations with vitamin B12 and folate(P<0.05), and folate was lower in C/T and T/T type(P<0.05), while homocysteine had no differences in three types. MCV, large platelet ratio, FPG, TC, TG and LDL-C in T/T type were higher than others(P<0.05). [Conclusion]MTHFR gene polymorphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases showed no association with plasma homocysteine, but it was correlated with folate, vitamin B12, blood glucose, blood lipid and the proportion of large platelet.

Keywords: cardiovascular and cerebrovascular diseases; MTHFR gene polymorph- hism; folate; homocysteine

HCY升高和叶酸缺乏已被确定为心血管病的危险因素。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是体内叶酸代谢和同型半胱氨酸(HCY)甲基化的关键酶，MTHFR基因突变能提高HCY水平，也是心血管疾病的危险因素[1]。目前国内关于MTHFRC677T基因多态性与老年心脑血管病患者的报道较少，本文将探讨老年心脑血管患者MTHFR基因多态性与血清叶酸、HCY的关系。

1 对象和方法

1.1 对象

选取2013年本院老年心脑血管病患者286例，年龄为(85.3±3.4)岁，男性167例，女性119例。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 MTHFR基因多态性检测(基因芯片法) (1)基因组DNA提取。空腹静脉血2ml于EDTA抗凝管中，用DNA提取纯化试剂盒提取基因组DNA；(2)PCR扩增。向扩增液中加入Taq酶、基因组DNA，反应总体积为25μl，进行PCR扩增；(3)杂交、显色。用BaiOMTHFR基因型检测芯片试剂盒进行检测；(4)检测。图像经Array Doctor软件分析结果。以上所用基因芯片、试剂、仪器设备均由上海百傲科技有限公司提供。

1.2.2 血小板参数测定 抽空腹静脉血2ml于EDTA抗凝管中，全自动血细胞分析仪Sysmex XE-2100进行检测。

1.2.3 叶酸、维生素B12、HCY及生化指标测定 抽空腹静脉血3ml，分离血清后，血糖、血脂、HCY在OLYPUS A5400生化分析仪上进行检测，HCY采用酶比色法测定，叶酸和维生素B12用雅培i2000化学发光免疫分析仪测定。

1.3 统计学处理

统计分析用SPSS15.0软件包完成。计数资料组间比较采用χ2检验，计量资料组间比较采用方差分析，直线相关分析比较相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTHFR各基因型及等位基因频率分布情况

MTHFRC667T基因 C/C型占28.7%，C/T型占41.2%，T/T型占30.1%。等位基因C和T的频率为49.3%，50.7%，且各基因型和等位基因频率在男女间差异无统计学意义。见表1。

表1 MTHFR各基因型频率及等位基因频率分布[例(%)]

2.2 不同MTHFR基因型中血清叶酸、维生素B12和HCY结果的比较

由表2可见，C/T型、T/T型的叶酸均明显低于C/C型(P<0.05)；T/T型的维生素B12显著低于C/T型(P<0.05)；而三型的HCY比较无统计学意义，但血清HCY与叶酸、维生素B12均具有呈负相关(P<0.05)。见表3。

表2 不同MTHFR基因型中叶酸、维生素B12、HCY比较

注：a: 与C/C比较,，P< 0.05；b: 与C /T 比较，P< 0.05

表3 血浆HCY与叶酸、维生素B12的相关性比较

2.3 血小板参数在不同MTHFR基因型中的变化

T/T型的血小板数量较C/C型、C/T型降低(P<0.05)，T/T型的MPV、大血小板比例与C/C型、C/T型相比则明显增加(P<0.05)。见表4。

表4 不同MTHFR基因型的血小板相关指标结果的比较

注：a: 与C/C比较，P< 0. 05；b: 与C /T 比较，P< 0. 05

2.4 不同MTHFR基因型中血脂、血糖结果的比较

C/T型、T/T型的FPG，TG，TC，LDL-C较CC型有上升的趋势，以TT型增加最为明显(P<0.05)。见表5。

表5 不同MTHFR基因型的血糖血脂结果的比较

注：a: 与C/C比较，P< 0. 05；b: 与C /T 比较，P< 0. 05

4 讨论

心脑血管病是我国死亡率最高的疾病，一般认为心脑血管疾病患者高HCY的形成除与叶酸、维生素B12缺乏相关，还与MTHFR基因C677T位点丙氨酸(C)突变为缬氨酸(T)导致酶活性改变有关。文献报导，MTHFR677基因C/T型和T/T型在健康老年中为46.0%，20.6%[2]，健康青年中为34.68%，20.68 %[3]。我们的研究结果中，老年心脑血管患者的MTHFR677基因C/T型占41.2%，T/T型占30.1%，较文献报道的健康人群略高。中华医学会心血管分会主委霍勇教授在2013年第七届钱江国际心血管病会议上宣布，纳入2万余人的中国人群中45% HCY>10μmol/L，MTHFR677 T/T基因型为25%，远高于西方人群，这种基因型表现为高HCY、低叶酸，脑卒中的发生率更高。提示MTHFRC677T基因多态性与老年心脑血管病发病有一定的关系，纯合突变型的患者易发生心脑血管疾病。

目前国内外关于MTHFRC677T基因多态性与高HCY间是否存在相关性存在分歧[4]。我们发现，老年心脑血管病患者的血浆HCY水平均高于本实验室一般人群的参考范围(10.00±5.10)，印证了HCY升高是心脑血管病发病的危险因素的观点。但我们的结果显示，老年心脑血管患者的HCY水平在3种基因型间没有变化，这与张广森[5]等的研究结果有所不同，血浆HCY的水平还可能受遗传及环境等多种因素的多重影响。对不同MTHFR基因型的血清叶酸、维生素B12与HCY关系研究中，我们发现T/T型、C/T型的叶酸明显低于C/C型，且HCY与叶酸、维生素B12负相关，以上研究结果提示，老年心脑血管病患者血浆HCY水平明显升高，且与MTHFRC667T基因多态性没有显著性关联，但MTHFRC667T基因突变时叶酸水平明显下降，提示C/T型和T/T型的患者更应注重补充叶酸。

大血小板是由巨核细胞刚生成的血小板，聚集和粘附功能较强，其比例的增加会提高血栓形成的风险。国内外研究表明，血栓和中风患者的MTHFRC667T基因纯合突变率增加[6]，本研究发现MPV、大血小板比例在MTHFR667基因T/T型中明显高于C/C型和C/T型，提示MTHFRC667T基因纯合突变能增加老年心脑血管病患者血栓形成和诱导脑卒中的风险，MTHFR C667T基因纯合突变与大血小板比例增加的关系尚不清楚，二者是独立因素的叠加还是因果关系尚需要进一步的研究。

高血糖和高血脂是心脑血管疾病的高危因素。本研究结果显示，MTHFRC667T基因T/T型的FPG，TG，LDL-C明显高于C/C和C/T组，说明MTHFRC667T基因纯合突变患者患心脑血管疾病的风险更高。国内外文献也报导MTHFRC667T基因纯合突变与糖尿病、高脂血症和冠状动脉硬化症的发生相关[7]。然而MTHFRC667T基因纯合突变与高血糖、高血脂因果关系尚需研究。

综上所述，老年心脑血管患者的血清HCY水平与MTHFRC667T基因多态性没有关联，但MTHFRC667T基因纯合突变和杂合突变型的叶酸水平明显低于野生型，更应注重补充叶酸。MTHFRC667T基因纯合突变血糖、血脂和大血小板比例明显高于杂合突变型和野生型，因此，更应注重血糖和血指的控制以及抗血小板的治疗。

[1]Ansari R, Mahta A, Mallack E, et al. Hyperhomocysteinemia and neurologic disorders: a review[J]. J Clin Neurol, 2014, 10(4):281-288.

[2]曹正余. 亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性与老年H 型高血压并急性心肌梗死的关系[J]. 中国老年学杂志, 2012, 12(32):5118-5120.

[3]方乐, 王田蔚, 邵延坤, 等. 青年缺血性脑卒中与MTHFRC677T、CBS844ins- 68基因多态性的关系[J]. 吉林大学学报, 2007, 33(2):310-313.

[4]Kim CH, Hwang KY, Choi TM, Shin WY, Hong SY. The methylenetetrahydrofo- late reductase gene polymorphism in Koreans with coronary artery disease [J]. Int J Cardiol. 2001, 78(1):13-17.

[5]张广森, 戴崇文. 缺血性心脑血管病患者血浆同型半胱氨酸水平及其代谢相关酶基因多态性分析[J]. 中华血液学杂志, 2002, 23(3):126-129.

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[7]Liang R, Zhou Y, Xie J, et al. Association of C677T gene polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase and plasma homocysteine level with hyperlipid- emia[J]. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2014, 34(8):1195-8.

Relationshipbetweenserumfolate,homocysteineandmethylenetetrahydrofolatereductasegenepolymorphisminelderlypatientswithcardiovascularandcerebrovasculardisease

CHENSufeng1, 2,ZHOUYonglie2@,ZHANGYanqing3,XIAJun2,CHENYongjian,SHANZhiming4,HUQingfeng2

(1. School of Medical Technology, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China; 2. Clinical Laboratory Center, Zhejiang Provincial People’s Hospital, Hangzhou 310014,China; 3. School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Zhejiang 325033,China; 4. Zhejiang Center for Clinical Laboratories, Hangzhou 310014,China)

R54

B

1672-0024(2015)01-0043-04

陈素峰(1989-)，女，浙江湖州人，硕士研究生，主管检验师。研究方向：生物化学与分子生物学检验

浙江省医药卫生科学研究基金项目(编号：2012KYB009)

@

周永列 lab_zyl@126.com