海南鹿角藤提取物杀虫活性的初步研究

钱军等

摘要：测定了海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）的甲醇粗提物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4种溶剂萃取物对莴苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）和斜纹夜蛾（Prodenia litura Fabricius）的杀虫活性。结果表明，鹿角藤的氯仿萃取物对2种害虫具有较好的杀虫活性。莴苣指管蚜随着提取物浓度的增大和处理时间的延长，其死亡率增高。质量浓度为10 mg/mL时，对莴苣指管蚜处理72 h的死亡率达到86.92%，LC50为0.722 3 mg/mL；斜纹夜蛾四龄幼虫处理24 h的非选择性拒食率为69.84%。

关键词：海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）；莴苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）；斜纹夜蛾（Prodenia litura Fabricius）；杀虫活性

中图分类号：S435 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）16-3936-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.026

Preliminary Study on Insecticidal Activity of Extract from

Chonemorpha splendens Chun et Tsiang

QIAN Jun1，LIAO Feng-xian2，CHEN Guo-de1，LUO Yan-ping2

（1.Hainan Provincial Forestry Science Institute， Haikou 571100，China；

2. College of Environment and Plant Protection， Hainan University，Haikou 570228，China）

Abstrsct： The insecticidal activity of methanol crude extract and extracts of petroleum ether， chlorofom， ethyl acetate， n-butanol from Chonemorpha splendens Chun et Tsiang against Uroleucon formosanum Takahashi and Prodenia litura Fabricius were tested by contact-toxicity and antifeedant activity. The results showed that chloroform extracts displayed excellent activity against U. formosanum Takahashi and P. litura Fabricius， the corrected mortality of U. formosanum Takahashi increased with the increase of concentration and extending of time. The mortality reached 86.92% against U. formosanum Takahashi at concentration of 10 mg/mL for 72 h， and LC50 was 0.722 3 mg/mL， and the antifeedant rate reached 69.84% against 4th instar larvae of Prodenia litura Fabricius at concentration of 10 mg/mL for 24 h.

Key words： Chonemorpha splendens Chun et Tsiang； Uroleucon formosanum Takahashi； Prodenia litura Fabricius； insecticidal activity

随着人类生活水平的提高，人们对高效、低毒、环境友好的化学农药或生物农药的需求增加[1，2]。害虫抗药性问题导致农药的使用周期和使用年限不断缩短，因而，寻求更加高效的农药品种成为科研人员面临的一大难题。植物源农药来源于自然界，同时也是绿色农药先导化合物的理想挖掘材料，受到各国科研工作者的极大关注[3]。海南省具有丰富的热带植物资源，是南药植物的天然宝库，开展其研究具有深远的意义。

海南鹿角藤（Chonemorpha splendens Chun et Tsiang）为夹竹桃科（Apocynaceae）鹿角藤属（Chonemorpha G. Don）多年生藤本植物[4]。该属植物具有重要的药理活性，如《本草纲目拾遗》中用鹿角藤的老茎来治疗妇女黄疸病；漾濞鹿角藤的茎可治疗风湿骨痛、骨折筋伤、外伤出血等症[5]。Chatterjee等[6]发现鹿角藤碱对感染寄生虫的黄金鼠防效达100%，对肠道感染寄生虫的幼鼠防效为90%；2005年Roy等[7]报道了大叶鹿角藤作为骨骼肌松弛剂的研究机理；2009年Shende等[8]发现大叶鹿角藤根乙醇提取物对高血糖大白鼠具有降血糖的作用。农用活性表明，鹿角藤粗提物具有较好的杀虫活性。2005年刘红芳等[9]发现密脉崖鹿角藤叶的乙醇提取物对斜纹夜蛾四龄幼虫有较高的拒食活性。以上对鹿角藤属部分种进行了活性报道，但是关于海南鹿角藤鲜有研究，且作为南药和黎药的独特省份，海南岛孕育了大量的药用植物。为了进一步了解海南鹿角藤的农用活性，本研究对海南鹿角藤进行了研究，期望为该属植物的开发与应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试药剂 0.36%苦参碱水剂（陕西汇能达生物科技有限公司），0.7%印楝素悬浮剂（鹤壁陶英陶生物科技有限公司）。

1.1.2 供试昆虫 莴苣指管蚜（Uroleucon formosanum Takahashi）采自海南大学环境与植物保护学院基地的莴苣叶片上；斜纹夜蛾（Prodenia litura Fabricius）试虫为海南大学农药学实验室饲养，其卵块采自海南大学农业科研基地蓖麻上，在保湿培养皿内孵化成幼虫后，转入养虫盒中，用新鲜干净的蓖麻叶饲养幼虫。试验时选取健康活跃、虫体大小等生理条件一致的四龄幼虫为供试昆虫。

1.2 方法

1.2.1 供试药剂的制备 海南鹿角藤采自海南大学儋州校区周边。采用渗漉法[10]将采集的鹿角藤洗净，阴干，粉碎，过40目筛，称重后加入干粉5倍体积的甲醇，避光浸提3 d，反复浸提3次。合并浸提液，45 ℃减压浓缩成膏状物为甲醇粗提物。随后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂对甲醇粗提物进行萃取，45 ℃减压浓缩各萃取液获得鹿角藤4种萃取物，置于4 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 对莴苣指管蚜的触杀活性测定 采用浸渍法测定海南鹿角藤甲醇提取物和4种萃取物对莴苣指管蚜的触杀活性[11]，用含适量丙酮和0.5%吐温-80的去离子水将提取物和萃取物配制成质量浓度为10 mg/mL的药液，将含有25头莴苣指管蚜的莴苣叶片浸没到配制好的药液中，5 s后取出，用吸水纸吸去多余药液，移入干净培养皿中室温保湿饲养。以含等量的丙酮和0.5%吐温-80的去离子水作溶剂对照，以0.36%苦参碱水剂1 000倍稀释液作药液对照，每处理重复3次。分别处理12、24、48、72 h后，观察试虫死亡情况，计算死亡率。

1.2.3 对斜纹夜蛾的拒食活性测定 采用叶碟法测定海南鹿角藤提取物对斜纹夜蛾四龄幼虫的拒食活性[11]：用含适量丙酮和0.5%吐温-80的去离子水将提取物配制成质量浓度为10 mg/mL的溶液，用打孔器将新鲜洁净的蓖麻叶片打成直径为2 cm的叶碟，将叶碟置于药液中浸渍5 s，取出晾干，备用。以含等量的丙酮和0.5%吐温-80的去离子水作溶剂对照，以0.7%印楝素悬浮剂1 000倍稀释液为药剂对照。

选择性拒食测定：选取2片处理叶碟和2片对照叶碟交错地放置于直径为9 cm培养皿内。

非选择性拒食测定：选取4片相同处理叶蝶十字交叉置于培养皿内，将对照叶碟置于另一培养皿内。

将1头经饥饿处理4 h的斜纹夜蛾四龄幼虫移入上述培养皿内，皿内放置小团吸水的脱脂棉保湿，每处理20头虫，重复3次。于24 h后统计试虫取食面积，计算拒食率。

1.2.4 氯仿萃取物对莴苣指管蚜的毒力测定 用丙酮将氯仿萃取物配制成质量浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL的药液，参照“1.2.2”的方法，测定不同浓度下提取物对莴苣指管蚜的死亡率，绘制毒力回归曲线，求得毒力回归方程。

1.2.5 数据处理

死亡率=（死亡虫数/试虫数）×100%；

校正死亡率=[（药剂处理死亡率-对照组死亡率）/（100-对照组死亡率）]×100%

选择性拒食率=[（对照组取食叶面积-处理组取食叶面积）/对照组取食叶面积]×100%

非选择性拒食率=[（对照组取食叶面积-处理组取食叶面积）/（对照组取食叶面积+处理组取食叶面积）]×100%

用SAS软件对不同处理间的结果进行差异显著性分析，用Excel软件对毒力测定结果进行分析，求得毒力回归方程和相关系数，根据回归方程求得LC50。

2 结果与分析

2.1 粗提物对莴苣指管蚜触杀活性的测定结果

在10 mg/mL浓度下，采用浸渍法测定了海南鹿角藤粗提物对莴苣指管蚜的触杀活性，结果见表1。由表1可知，海南鹿角藤甲醇提取物和4种萃取物对莴苣指管蚜均有一定的触杀活性，且随着处理时间的延长，莴苣指管蚜的死亡率呈上升趋势。试虫受药12 h后，氯仿萃取物的校正死亡率最好，为69.33%；受药24 h后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的触杀活性较好，校正死亡率超过70%；受药48 h后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的触杀活性较好，校正死亡率超过80%；统计分析结果表明，氯仿萃取物的校正死亡率与0.36%苦参碱水剂的活性差异不显著。比较处理时间发现，药剂作用后，害虫死亡率逐渐增加。表明该植物提取物具有较好的持效期，随着时间的延长，活性逐渐体现出来。不同溶剂萃取物活性不一样，总的情况是，氯仿萃取物对莴苣指管蚜的活性最好，其次是石油醚萃取物。

2.2 粗提物对斜纹夜蛾拒食活性的测定结果

采用叶碟法测定了鹿角藤粗提物对四龄斜纹夜蛾幼虫的选择性拒食活性和非选择性拒食活性，结果见表2。由表2可知，海南鹿角藤5种提取物对四龄斜纹夜蛾幼虫取食行为表现出不同的拒食作用。在非选择性拒食试验中，24 h后氯仿萃取物的拒食效果最好，拒食率达69.84%，甲醇提取物次之，拒食率为64.72%，说明四龄斜纹夜蛾幼虫对这2种提取物表现出较敏感的取食反应。在选择性拒食试验中，24 h后氯仿萃取物和甲醇提取物的拒食作用比较强，其拒食率分别为78.13%、75.88%；各提取物的选择性拒食率比非选择性拒食的拒食率高，表明海南鹿角藤提取物对四龄斜纹夜蛾幼虫的选择性拒食活性比非选择性拒食活性好。与0.7%印楝素悬浮剂比较，发现各提取物的拒食活性不如对照药剂。

2.3 氯仿萃取物对莴苣指管蚜的毒力测定结果

由表1和表2可知，海南鹿角藤提取物对供试昆虫的活性测定中，氯仿萃取物的活性最强。对氯仿萃取物作进一步研究，测定该萃取物在不同浓度下对莴苣指管蚜的毒力，结果见表3。由表3可以看出，所获得毒力方程相关系数均大于0.9，说明方程数据的相关性好。LC50比较发现，不同观察时间供试药剂对莴苣指管蚜的致死中浓度不同，随着测试时间的延长，LC50呈下降趋势，其中72 h后，对莴苣指管蚜的LC50为0.722 3 mg/mL，进一步证实了海南鹿角藤提取物的持效性。

3 小结与讨论

莴苣指管蚜和斜纹夜蛾分别属半翅目蚜科和鳞翅目夜蛾科昆虫，食性杂，寄主种类多，分布广，特别是斜纹夜蛾的幼虫危害猖獗，可为害99科200多种植物[12]。本研究结果表明，海南鹿角藤提取物对莴苣指管蚜和四龄斜纹夜蛾幼虫均具有较好的杀虫活性；各提取物对莴苣指管蚜的触杀活性存在一定的浓度效应和时间效应，随浓度的增加和时间的延长，试虫的死亡率呈较明显的增大趋势；氯仿萃取物杀虫活性最明显，莴苣指管蚜受药72 h后，校正死亡率达86.92%，LC50为0.722 3 mg/mL，四龄斜纹夜蛾受药24 h后，非选择性拒食率为69.84%，选择性拒食率为78.13%，表明海南鹿角藤有望成为开发植物源农药的新资源。

研究发现，不同溶剂萃取物的杀虫活性不同，其中氯仿萃取物的活性稍好，可能是活性物质主要集中在氯仿中。在对莴苣指管蚜的触杀活性测试中，力度大小也影响试验结果，为此，本试验尽量不损坏测试对象，用毛笔轻轻触摸。叶碟法测试拒食活性时，为了减少叶片的干枯萎缩，试验中用滤纸和脱脂棉保湿。本试验暂时不能确定其杀虫活性的主要物质，在今后的研究中将对海南鹿角藤杀虫活性成分作进一步分离，明确具体活性物质的种类，并对其杀虫作用机制进行初步探讨。

参考文献：

[1] 俞晓平，吕仲贤，陈建明，等.我国植物源农药的研究进展[J].浙江农业学报，2005，17（1）：42-48.

[2] 屠予钦，袁会珠.农药和化学防治法前景广阔[J].农药，1996，35（5）：6-9.

[3] 翟金玲，张 鹏，宋淑霞，等.我国植物源农药研究现状[J].河北林业科技，2008（3）：34-35.

[4] 廖凤仙，王法红，骆焱平.鹿角藤属植物研究进展[J].广东农业科学，2013（2）：215-218.

[5] 赵学敏.本草纲目拾遗[M].北京：中国中医药出版社，2007.216.

[6] CHATTERJEE D K，IYER N，GANGULI B N.Antiamoebic activity of chonemorphine，a steroidal alkaloid，in experimental models[J].Parasitology Research，1987，74（1）：30-33.

[7] ROY R K，RAY N M，DAS A K.Skeletal muscle relaxant effect of Chonemorpha macrophylla in experimental animals[J]. Indian Journal of Pharmacology，2005，37（2）：116-119.

[8] SHENDE V S，SAWANT V A，TURUSKAR A O，et al.Evaluation of hypoglycemic and antihyperglycemic effects of alcoholic extract of Chonemorpha fragrans root in normal and alloxan induced diabetic rats[J]. Pharmacognosy Magazine，2009，5（19）：36-41.

[9] 刘红芳，符悦冠，王祝年，等.50种热带地区植物对斜纹夜蛾的拒食活性[J].华东昆虫学报，2005，14（1）：17-20.

[10] 徐任生，叶 阳，赵维民.天然产物化学[M].北京：科学出版社，2004.117-119.

[11] 骆焱平，朱朝华，谭仲清.九里香提取物对斜纹夜蛾拒食活性的初步研究[J].湖北农业科学，2005，44（6）：49-51.

[12] 杨新军，林华峰，鲍晓莉.6种寄主植物对斜纹夜蛾生长发育的影响[J].中国植保导刊，2006，26（9）：30-31.