单唾液酸四己糖神经节苷脂对缺氧缺血性脑病患儿血清NSE S-100B的影响

裴雪梅 高 然 张文武 张国英 万胜明

广东深圳市宝安区人民医院新生儿科 深圳 518101

单唾液酸四己糖神经节苷脂对缺氧缺血性脑病患儿血清NSE S-100B的影响

裴雪梅 高 然 张文武 张国英 万胜明

广东深圳市宝安区人民医院新生儿科 深圳 518101

目的 探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）对缺氧缺血性脑病（HIE）患儿血清NSE、S-100B水平的影响及其作用机制。方法 随机选择产科同期出生1d的健康足月新生儿20例作对照组，将40例HIE患儿随机分为常规治疗组（20例）和GM1治疗组（20例），GM1治疗组在常规治疗基础上于生后第2天加用GM1静滴，20mg/d，连续用药7d。常规治疗组进行常规治疗。3组新生儿均于生后第1天（治疗前）、第8天（治疗后）时采集血液标本，采用双抗体夹心ABC-ELISA法进行血清NSE、S-100B的检测。结果 治疗前，2组HIE患儿血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生儿（P＜0.01）；常规治疗组与GM1治疗组血清NSE、S-100B水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。2组第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天（P＜0.01）。治疗后，HIE患儿血清中NSE、S-100B水平高于正常对照组（P＜0.01）。GM1治疗组血清NSE、S-100B水平下降率大于常规治疗组（P＜0.01）。结论 HIE患儿脑组织中神经元和神经胶质细胞均有不同程度的损伤，动态检测血清NSE、S-100B水平，可能有助于HIE的早期诊断和判断HIE脑损伤的修复程度，GM1对神经元及神经胶质细胞均有修复作用。

单唾液酸四已糖神经节苷脂（GM1）；缺氧缺血性脑病（HIE）；神经元特异性烯醇化酶（NSE）；S-100B

新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是导致新生儿死亡和婴幼儿神经系统功能障碍的主要原因之一。单唾液酸四己糖神经节苷脂（monosialotetrahexosylganglioside，GM1）可促进神经重构，对缺氧缺血引起的脑损伤有修复作用，临床已广泛用于治疗HIE，并取得明显疗效［1-3］，但其修复机制尚不明确。神经元特异性烯醇化酶（NSE）是神经元和神经内分泌细胞产生的特异性生化标志物，S-100B是神经胶质细胞的标记蛋白。正常情况下，血中NSE和S-100B含量甚少。本研究通过检测HIE患儿在GM1治疗前和治疗后血清中NSE、S-100B水平的变化，了解神经系统不同细胞的损伤程度，探讨GM1修复作用的机制，为临床应用提供依据。

1 资料与方法

1.1 纳入对象 全部病例为2012-05—2013-08入住深圳市宝安区人民医院的HIE患儿，符合HIE诊断标准［4］和下列条件：（1）入院日龄≤24h，出生体质量≥2 500g的足月新生儿。（2）无严重先天畸形，如膈疝、脑发育不全。（3）无大量颅内出血、无严重呼吸道阻塞性疾病、无贫血。

按患儿出生时间编号，查随机表格分为GM1治疗组和常规治疗组各20例，2组一般情况和临床分度差异无统计学意义（HIE分度χ2＝0.410，P＞0.05）；随机选择产科同期出生1d的健康足月新生儿20例作对照组。保证3组性别、日龄、出生体质量、胎龄、生产方式差异无统计学意义（性别：χ2＝2.545；日龄：F＝0.517；出生体质量：F＝0.222；胎龄：F＝0.166；生产方式：χ2＝0.17；P均＞0.05）。

1.2 治疗方法 根据新生儿HIE治疗方案，对2组HIE患儿均进行相同的常规治疗（对症和支持治疗）。GM1治疗组于出生24h后（第2天）静滴GM1（申捷，齐鲁制药有限公司），20mg/d，连续用药7d。

1.3 检测指标

1.3.1 标本采集：2组HIE患儿均于出生后第1天和生后第8天（即GM1治疗前和治疗后）分别采取股静脉血3mL，同时采取正常对照组新生儿股静脉血3mL，置于无热原和内毒素的试管内，3 000rpm离心10min，分离血清，去除溶血标本，每份血清分为2份，按组标记，-70℃冰箱保存待测。

1.3.2 指标检测：采用NSE试剂盒，用双抗体夹心ABCELISA法进行血清NSE的检测；采用S100B蛋白试剂盒，用双抗体夹心ABC-ELISA法进行血清S100B的检测（ELISA试剂盒有上海恒远生物科技有限公司提供）。

1.4 统计学方法 应用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析。计量资料用均数±标准（¯x±s）表示，进行正态检验和方差齐性检验，组间比较采用配对设计的t检验，多组间比较采用单因素方差分析，均数的两两比较采用LSD检验。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前后各组血清NSE、S-100B水平变化比较（1）治疗前（第1天），2组HIE患儿血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生儿，差异有统计学意义（P＜0.01）；常规治疗组与GM1治疗组血清中NSE、S-100B水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）3组第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天，差异有统计学意义（P＜0.01）。（3）治疗后第8天，HIE患儿血清中NSE、S-100B水平高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 3组治疗前后血清NSE、S-100B水平变化比较（¯x±s）

2.2 治疗前后各组血清NSE、S-100B下降率比较 2组HIE患儿血清中NSE、S-100B水平下降率大于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；GM1治疗组血清中NSE、S-100B水平下降率大于常规治疗组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表2 治疗前后3组血清NSE、S-100B下降率比较（¯x±s）

3 讨论

NSE主要存在于神经元和神经内分泌细胞中，正常血液中NSE含量甚微，波动范围小，相对稳定；脑损伤后神经细胞受损，血脑屏障破坏，NSE释放入脑脊液及血液。研究表明，NSE是早期判断神经细胞损伤的灵敏指标，且与病情严重程度呈正相关［5］，血清NSE水平可以评估HIE的严重程度和神经系统后遗症发生率［6］。S-100B（S-100Bprotein，S-100B）是一种酸性钙结合蛋白，分子是由α亚基和β亚基组成，特异性地存在于中枢神经系统的星形、少突、大、小胶质细胞内，被认为是神经胶质的标记蛋白。研究表明，血清S-100B水平可作为脑损伤的敏感性和特异性标记物［7-8］。本研究结果显示，HIE患儿经历缺氧缺血以后，血清中NSE、S-100B水平均显著升高，表明HIE患儿的神经元及神经胶质细胞均受到不同程度的损伤。本文结果与上述文献报道一致。由此可见，临床上遇有缺氧缺血病史并有神经系统症状和体征的患儿，同时检测外周血中NSE、S-100B水平的变化，则有助于了解患儿有无神经元及神经胶质细胞损伤及其损伤程度。

本文结果显示，对照组健康新生儿和HIE组患儿第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天水平，表明在正常情况下和疾病状态下，NSE、S-100B水平在新生儿体内可能存在自然降解过程。尚未见文献报道这一现象，但新生儿属于特殊的群体，体内多种生化指标可随着日龄而变化（如白细胞、心肌酶、胆红素等）。因此，在把NSE、S-100B水平作为判断神经元和神经胶质细胞损伤及其损伤程度的指标时，应考虑新生儿日龄因素对其造成的影响。本文结果显示，治疗后（第8天），HIE患儿常规治疗组和GM1治疗组血清中NSE、S-100B水平高于正常对照组，表明经过7d治疗后，神经元和神经胶质细胞尚未完全恢复，仍需继续治疗。可能是因本研究选择的HIE患儿中重度的比例（65％）较大，脑损伤的恢复需要较长时间所致。

GM1是含唾液酸的糖神经鞘脂，存在于哺乳类动物细胞膜，是神经细胞膜的组成成分，在神经发生、生长、分化过程中起必不可少的作用，对于损伤后的神经修复也非常重要。研究表明，当受到缺氧缺血刺激时，新生大鼠脑内的GM1减少，从而引起神经细胞死亡和大脑发育延迟［9］；外源性GM1对缺氧缺血引起的脑白质损伤有保护作用，外源性GM1是唯一可以透过血脑屏障的一种节神经苷脂，可进入中枢神经系统，并整合到神经细胞膜发挥作用［10］；GM1在围生期缺血缺氧性脑损伤中具有双重作用，急性期可拮抗兴奋性氨基酸的兴奋性神经毒性，保护细胞膜完整性，抑制一氧化氮（NO）合成和凋亡；恢复期可增强神经营养因子的作用，促进修复［11］。本研究结果显示，GM1治疗组血清中NSE、S-100B水平下降率明显大于常规治疗组，即GM1对神经元及神经胶质细胞均有修复作用。其修复机制可能为：在HIE患儿中，缺氧缺血使神经细胞受到损伤，神经细胞膜上的GM1减少，细胞膜的完整性受到破坏，血脑屏障的通透性增加，NSE、S-100B释放入脑脊液及血液；而外源性的GM1可透过血脑屏障，进入中枢神经系统，与神经细胞膜结合，保证细胞膜的完整性，且能促进神经元萌发突起，提供充足的营养与能量，促进受损细胞的修复和再生；同时可对抗兴奋性氨基酸和自由基的神经毒性，并减少自由基对细胞膜的损害。GM1对HIE患儿脑损伤的具体修复机制，以及是否可通过动态观察血清中NSE、S-100B的水平调整临床治疗HIE的时间，为GM1的使用疗程提供实验室依据，有待进一步研究。

［1］吴立新.单唾液酸四己糖神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效及对血清TNF-α、IL-6的影响［J］.现代中西医结合杂志，2013，22（14）：1 524-1 526.

［2］刘静炎.神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察［J］.中国实用神经疾病杂志，2010，13（10）：77-78.

［3］牛淑娟，王宝风，张雪梅，等.单唾液酸四己糖神经节苷脂治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效观察［J］.实用儿科临床杂志，2004，19（8）：698-698，709.

［4］杨于嘉，姚裕家.新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准［J］.中华儿科杂志，2005，43（8）：584-584.

［5］Celtik C，Acunas B，Oner N，et al.Neuron-specific enolase as a marker of the severity and outcome of hypoxic ischemic encephalopathy［J］.Brain Dev，2004，26（6）：398-402.

［6］Dai HQ，Luo YH.Changes of electroencephalographic background patterns and serum neuron specific enolase levels in neonates with hypoxic-ischemic encephalopathy［J］.Chinese Journal of Contemporary Pediatrics，2009，11（3）：173-176.

［7］Muller B，Evangelopoulos DS，Bias K，et al.Can S-100Bserum protein help to save cranial CT resources in a peripheral trauma centre？A study and consensus paper［J］.Emerg Med J，2011，28（11）：938-940.

［8］Wojtczak-Soska K，Lelonek M.S-100Bprotein：An early prognostic marker after cardiac arrest［J］.Cardiol J，2010，17（5）：532-536.

［9］Ramirez MR，Muraro F，Zylbersztejn DS，et al.Neonatal hypoxia-ischemia reduces ganglioside，phospholipid and cholesterol contents in the rat hippocampus［J］.Neurosci Res，2003，46（3）：339-347.

［10］Rong X，Zhou W，Xiao-Wen C，et al.Ganglioside GM1reduces white matter damage in neonatal rats［J］.Acta Neurobiol Exp（Wars），2013，73（3）：379-386.

［11］曹云.神经节苷脂对缺氧缺血性脑损伤的保护作用［J］.新生儿科杂志，2002，17（3）：133-136.

（收稿2014-03-05）

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1673-5110（2015）04-0064-02