复方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同时测定其4种有效成分的含量

韦玲 高淑红

（山东信谊制药有限公司 山东德州 253100）

复方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同时测定其4种有效成分的含量

韦玲 高淑红

（山东信谊制药有限公司 山东德州 253100）

目的：通过RH-HPLC法准确并同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分（包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平）的含量。方法：通过RH-HPLC法测定其4种有效成分含量，色谱柱 Eclipse XDB-C18；流动相：0.01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液（用冰醋酸将其PH值调整为3.0）；甲醇（40：60）；检测波长：265nm；流速： 0.8 ml/min。结果：氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶线性范围为0.04 ～0.25 mg/ml， 利血平线性范围为0.5～2μg/ ml；4种有效成分回收率96%～105%，平均回收率102%。结论：采用RH-HPLC法能够准确、简单、迅速的同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的含量，因此该种方法能够用于测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。

复方利血平氨苯蝶啶片 RH-HPLC 氢氯噻嗪 硫酸双肼屈嗪 氨苯蝶啶 利血平

复方利血平氨苯蝶啶片是一种复方制剂,它的主要成分包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平等,该制剂主要用于治疗轻中度高血压。按照国家药典委员会颁布的国家药品标准,采用不同波长和溶剂测定氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的方法难度大且费用昂贵。本文旨在研究通过采用RH-HPLC法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分的含量,具体情况报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

Empower色谱工作站；MettlerXP-205电子天平；Agilent 1200高效液相色谱仪；MODEL HN1006 超声波清洁器。

1.2 试药

氢氯噻嗪（批号：100309-200702）、硫酸双肼屈嗪（批号：100514-200301）、氨苯蝶啶（批号： 100429-200401）和利血平（批号：100041-200311）对照品均由中国药品生物制品检定所提供,除氢氯噻嗪纯度为99.5%外,其余三种成分纯度均为100%。水为二次蒸馏水,庚烷磺酸钠为分析纯,甲醇为色谱纯。

2 色谱条件

2.1 确定检测波长

溶解氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶及利血平,观察外波长200 ～400 nm的扫描图谱发现159nm,310nm,272nm,265nm附近均有强吸收。由于利血平含量很少,但在265nm波长附近仍有强吸收,因此确定检测波长为265nm。

2.2 色谱柱

色谱柱 Eclipse XDB-C18；流动相：0.01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液（用冰醋酸将其PH值调整为3.0）；甲醇（ 40：60）；流速： 0.81 ml/min；进样量： 10μl、50μl；柱温：30℃。

3 制备溶液

3.1 对照品溶液制备

对照品溶液1：精密称取氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶各12.5mg,置于100ml的量瓶中,向量瓶中加入40ml甲醇,进行15min超声处理,加入40ml 5%的醋酸溶液后进行15min超声处理,冷却至室温。混合对照品储备液：精密称取10mg利血平置于100ml量瓶中,加入适量乙醇后进行15min超声处理,冷却至室温后用甲醇稀释,精密量取2ml该溶液倒入对照品溶液1中后用5%的醋酸溶液稀释至刻度。

3.2 供试品溶液制备

精密称取复方利血平氨苯蝶啶片1片量,置于100ml量瓶中,加入40ml甲醇后进行15min的超声处理,将其冷却至室温,用5%醋酸溶液进行稀释后摇匀并过滤。

3.3 专属性试验

根据上述色谱条件,对比对照品溶液和供试品溶液的分离度,结果供试品溶液中各组分间的分离度更好。

3.4 线性试验

精密量取适量的对照品混合储备液,用5%的醋酸溶液稀释成氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶0. 05、0.0625、0.10、0.125、0.15、0.25 mg / ml 及利血平0.4、0.5、0.8、1.0、1.2、2μg / ml 的混合对照品溶液,分别吸取10μg / ml、50μg / ml注入高效液相色谱仪,详细测定并绘制峰面积。线性回归方程的纵坐标为峰面积,横坐标为对照品进样量。氢氯噻嗪 y =39 115 + 250.92,r = 0. 999 5； 硫酸双肼屈嗪 y= 9 545 6x - 41.353,r = 0.9996； 氨苯蝶啶 y = 37 831x+ 117.73,r = 0. 9999； 利血平 y = 100. 66x - 2.5421,r = 1。

3.5 精密度及稳定性、重复性、回收率试验

通过测量溶液RSD（氢氯噻嗪为0. 08% ,硫酸双肼屈嗪0.22% ,氨苯蝶啶0.05% ,利血平 0.38%）,表明RP-HPLC方法精密度良好；通过测定峰值RSD（氢氯噻嗪为0.23%,硫酸双肼屈嗪0. 44% ,氨苯蝶啶0.29% ,利血平 0.71%）,表明该样品溶液具有良好的稳定性；通过测定计算,样品中氢氯噻嗪含量为99. 17% ； 硫酸双肼屈嗪含量为109.29% ； 氨苯蝶啶含量为98.23% ； 利血平含量为92.63%,表明该方法重复性较好；4种有效成分96%～105%,平均回收率102%（利血平均回收率105.22%,氢氯噻嗪平均回收率99.6%,硫酸双肼屈嗪平均回收率101.04%,氨苯蝶啶平均回收率99.46%）

3.8 测定样品含量

随机选取批号为 101101A、110105A、101006C 的3批样品进行测定。

氢氯噻嗪：（12.87±0.21）mg/g；硫酸双肼屈嗪（12.39±0.11）mg/g；氨苯蝶啶（11.47±0.03）mg/g；利血平（0.093±0.002）mg/ g。

4 讨论

采用复方利血平氨苯蝶啶片现行标准对相同批号为 101101A、110105A、101006C 的3批样品进行测定,鉴定结果平均偏差较小,测定结果基本一致。

综上所述,RH-HPLC方法能够用于有效、快速的测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。

［1］金鹏飞，邝咏梅，邹定，等.HPLC 同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中 3 种活性成分的含量［J］.中国药学杂志，2011，46（ 02） ： 152 -155.

［2］WS-10001-（HD-1285）-20021Drug Standard of China by SFDA（国家药品标准：化学药品地方标准上升国家标准第十三册）［S］12002： 256-2571.

［3］潘静岚.HPLC 法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中3种活性成分含量［J］.广东药学院学报，2008，24（03）：238-246.

R9

A

1674-2060（2016）03-0228-01