105例染色体多态性患者辅助生殖妊娠结局分析

姜永辉，孔伟，宦晴，闻姬*

(1. 山东中医药大学，济南　250014；2. 山东中医药大学第二附属医院生殖中心，济南　250001)



105例染色体多态性患者辅助生殖妊娠结局分析

姜永辉1，孔伟2，宦晴2，闻姬2*

(1. 山东中医药大学，济南250014；2. 山东中医药大学第二附属医院生殖中心，济南250001)

【摘要】目的探讨染色体多态性对辅助生殖技术妊娠结局的影响。方法接受辅助生殖治疗的不育夫妇中至少一方染色体存在多态性者105例作为多态组，随机选取同期行辅助生殖治疗且夫妇双方染色体均正常的患者260例作为对照组，比较两组患者助孕过程指标及妊娠结局。结果多态组原发性不育比例显著高于对照组(63.81% vs. 55.00%，P<0.05)；多态组自然流产史比例与对照组相仿(13.16% vs. 12.82%，P>0.05)；多态组与对照组比较，辅助生殖治疗中的受精率、优胚率、着床率、妊娠率、生化妊娠率、早产率、子代男女比例、子代畸形率等均无统计学差异(P>0.05)，但多态组早期流产率显著高于对照组(33.33% vs. 17.40%，P<0.05)。结论染色体多态性对辅助生殖治疗参数无显著影响，但可能会增加早期流产率。

【关键词】染色体多态性；辅助生殖；妊娠结局；早期流产率

(JReprodMed2016，25(4)：320-324)

染色体的多态性又称异态性(heteromorphism)，是指各种染色体形态的微小变异，多见于D/G组染色体随体区，1、9、16号染色体及Y染色体的异染色质区。早期研究表明染色体多态性在不孕不育夫妇中的检出比例高于染色体正常患者，其具体机制尚未明确[1-3]。近年来体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)等辅助生殖技术(ART)的广泛应用为生殖医学开启了革命性的创新，也为广大不孕不育患者带来了新的希望。染色体多态性对于ART助孕结局的影响目前尚无明确定论，大部分文献报道，此类患者ART助孕过程中，染色体多态性对助孕后的妊娠结局无显著不良影响[4-6]，但也有研究表明，大Y染色体患者的妻子行IVF-ET时，子代中女婴的比例更高[7]。

为研究染色体多态性对ART妊娠结局的影响，本研究收集了2011年1月至2013年9月于本中心(山东中医药大学第二附属医院生殖中心)接受IVF/ICSI-ET治疗的染色体多态性不育症夫妇的相关数据，并随机选择同期于本中心接受IVF/ICSI-ET治疗的双方染色体正常的不育症夫妇作为对照，进行回顾性研究分析。

资料和方法

一、研究对象

收集2011年1月至2013年9月于我院生殖中心初次接受IVF/ICSI-ET治疗的夫妇病例。其中任意一方染色体检查结果为多态性的夫妇作为多态组，共计105个周期；选择同时期接受IVF/ICSI-ET治疗的双方染色体均正常的患者夫妇作为对照组，共计260个周期。

所有入组患者年龄均在40岁以下，采用长方案进行控制性超促排卵治疗。

二、研究方法

1.染色体核型分析：接受ART助孕前抽取患者夫妇静脉血各2 ml，常规法进行外周血淋巴细胞培养，制备染色体标本，利用G显带技术进行染色，按照人类细胞学国际命名体制(ISCN)进行染色体核型分析确定核型。多态组核型经染色体C显带和/或N显带技术证实。

2.IVF/ICSI-ET助孕：采用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)降调节后促排卵，根据卵泡发育情况和血激素水平调整药量，当一个主导卵泡直径大于18 mm或者两个主导卵泡直径大于17 mm时停用促性腺激素(Gn)，测定雌二醇(E2)水平并于当晚肌注HCG 5 000 U或10 000 U(珠海丽珠)，36 h后取卵。女方取卵当日安排男方取精液，根据男方本次精液质量结合实验室检查决定行IVF或者ICSI授精，受精卵经实验室常规培养72 h后进行胚胎移植。移植后14 d测血HCG，血值阳性者于移植后35 d行阴道B超检查，发现孕囊者诊断为临床妊娠；并对临床妊娠夫妇进行电话随访直至胎儿娩出。

3.观察分析指标：观察分析两组患者一般情况、染色体多态性的分布情况、精液质量以及妊娠结局。其中受精率=受精卵数/获卵数×100%；优胚率=优质胚胎数/获得胚胎数×100%；着床率=B超观察到的妊娠囊数/移植胚胎数×100%；妊娠率=妊娠周期数/移植周期数×100%；生化妊娠率=生化妊娠周期数/妊娠周期数×100%；早期流产率=早期流产周期数/临床妊娠周期数×100%；早产率=早产周期数/分娩周期数×100%。

三、统计学分析

用SPSS19.0 Windows统计学软件对所得数据进行分析。计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、患者一般情况比较

两组患者女方年龄、男方年龄、不孕年限、体重指数(BMI)、女方基础卵泡刺激素(FSH)、基础雌二醇(E2)的比较均无统计学差异(P>0.05)(表1)。

多态组中原发性不育患者比例显著高于对照组[63.81%(67/105)vs. 55.00%(143/260)]，差异有统计学意义(P<0.05)；多态组自然流产史患者比例略高于对照组[13.16%(5/38) vs. 12.82%(15/117)]，但无统计学差异(P>0.05)。

表1　患者一般情况比较(x-±s)

二、多态组染色体多态性类别分布情况

染色体核型分析发现染色体多态性主要表现为：1、9、16号染色体的次缢痕(异染色质区)长度改变；D、G组染色体的随体或者随体柄的改变，包括双随体、双随体柄、随体增加、随体柄增长等；Y染色体异染色质增加或者减少(大Y或者小Y染色体)；以及9号染色体p12q13臂间倒位(表2)。

三、染色体多态性与精液质量

从精子的数量和活力两个方面来比较男方精液的质量。根据数量分为浓度正常组、少精子症组、严重少精子症组和无精症组；根据活力分为活力正常组、弱精子症组和严重弱精子症组。比较多态组和对照组中各种精液情况所占的比例，发现均无统计学差异(P>0.05)(表3)。

四、ART临床结局指标比较

多态组和对照组的受精率、优胚率、着床率、妊娠率、生化妊娠率、早产率、子代男女比例和子代畸形率等均无统计学差异(P>0.05)；多态组早期流产率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(表4)。

多态组随访到两例先心病患儿和一例唇裂患儿；对照组随访到一例脑瘤患儿、一例先心病患儿和一例唇裂患儿。

表2　染色体多态性的分布情况

注：多态性的具体分型中，以性染色体多态性较为多见

表3　染色体多态性与精液质量的关系

表4　ART临床结局比较[n(%)]

注：与对照组比较，*P<0.05

讨论

正常人群中，存在着各种染色体恒定的微小变异，包括结构、带纹宽窄和着色强度等。这类恒定而微小的变异是符合进化动力学且按照孟德尔方式遗传的，通常没有明显的表型效应和病理学意义，称为染色体多态。染色体多态性主要表现为异染色质的变异，特别是含有高度重复DNA的结构异染色质。结构异染色质集中分布于着丝粒、端粒、随体、次缢痕和Y染色体长臂。从分子水平上看结构异染色质所含DNA主要是“非编码”的高度重复序列，不含有结构基因，没有转录活性[8]。过去有学者认为异染色质是一种正常现象，通常不产生临床症状[9-10]，对妊娠结局也无显著影响[11]。但近年的研究[12-13]表明，异染色质在着丝粒功能等方面起着至关重要的作用，是姐妹染色单体结合和染色体分离所必需的，染色体多态性能使一些与生殖相关的基因沉默，从而引起生殖异常，继而产生流产、不育不孕、死胎及其它症状的临床效应[14]。

本研究重点在于对存在染色体多态性的不育症患者与染色体正常的不育症患者ART过程中妊娠结局的比较。既往研究发现，在有不良孕产史的人群中染色体多态性的检出率明显高于普通人群[15-17]。本次研究发现，多态组原发性不育的发生率高于正常对照组且有统计学差异(63.81% vs. 55.00%，P<0.05)，而自然流产史的比例略高于正常组但无统计学差异(13.16% vs. 12.82%，P>0.05)。韦波等[18]对1 684对夫妇的染色体多态性和不良妊娠关系进行过研究，他们同样认为染色体多态性与不良孕产史有密切的关系。因此，染色体核型的检查分析应作为优生检查常规项目，特别是一些不明原因造成的复发性流产[19]、不育不孕及其它症状的临床患者更应该考虑排查染色体因素。

多态组与正常对照组相比较，两组患者间的一般情况和男方精液质量均无统计学差异，这与戴小凡等[20]认为染色体多态性可能不影响男性精液质量的观点一致。从胚胎发育和妊娠结局的比较来看，两组患者的受精率、优胚率、着床率、妊娠率、生化妊娠率、子代男女比例以及子代畸形率等方面同样均无统计学差异。然而多态组的早期流产率明显高于正常对照组且有统计学差异(33.33% vs. 17.40%，P=0.021)。由于统计样本量、患者年龄的差异以及对自然流产定义的不一致性，文献报告ART妊娠流产的发病率也不一[21-24]。根据美国疾病预防与控制中心的统计数据显示：ART妊娠的自然流产率为14.7%，与调查的同期正常人群自然流产率比较无显著性差异，认为ART不会增加自然流产率[21]。多数研究[4，11，25]认为多态性患者和染色体正常患者ART后早期流产率无显著差异。吴正沐等[25]对5 345对接受IVF/ICSI治疗的不孕不育夫妇妊娠结局的研究发现，多态组早期流产率略低于正常组(12.20% vs.13.60%，P>0.05)；杨海燕等[26]认为引起IVF-ET早期妊娠丢失的原因复杂，可能与患者既往妊娠史、年龄、FSH/LH水平等因素有关；李柳铭等[27]认为，IVF与ICSI妊娠流产率无统计学差异。那么，本研究中多态组高流产率的原因可能与入组例数偏少有关，同时也受临床治疗方案以及实验室操作水平的变化和患者体质个体化差异的影响，也不能排除胚胎染色体异常[28]。

本研究共随访到一例脑瘤患儿、三例先心病患儿和两例唇裂患儿，其中多态组两例先心病患儿和一例唇裂患儿。虽然两组子代畸形的发生比例没有明显差异，但是本次研究尚无法说明染色体多态性与子代畸形的关系，这仍有待于进一步的分子水平研究。

综上所述，有不良孕产史的人群中染色体多态性的发生率明显高于普通人群。染色体多态性对于辅助生殖治疗的多项参数无显著影响，但可能会增加多态性患者的早期流产率。同时越来越多的研究表明，多态性患者妊娠后代发生染色体异常的比例更高[29]。本次研究的局限性是病例数太少，所得结论的说服力不足。下一步的工作中将完善病例收集工作，获得大样本的临床资料作进一步研究分析，从而为临床工作提供尽可能可靠的参考依据。为了获得较高的活产率，染色体多态性患者仍需引起重视，其对辅助生殖技术妊娠结局的影响仍需要大样本的荟萃分析做进一步验证。

【参考文献】

[1]Madon PF，Anthalye AS，Parikh FR. Polymorphic variants on chromosomes probably play a significant role in infertility[J/OL].4Reprod Biomed Online，2005，11：726-732.

[2]Minocherhomji S，Athalye AS，Madon PF，et al. A case-control study identifying chromosomal polymorphic variations as forms of epigenetic alterations associated with the infertility phenotype[J].Fertil Steril，2009，92：88-95.

[3]Sahin FI，Yilmaz Z，Yuregir OO，et al. Chromosome heteromorphisms：an impact on infertility[J].J Assist Reprod Genet，2008，25：191-195.

[4]周怡雯，洪燕，赵晓明，等.常见的染色体多态性与IVF-ET治疗的效果[J].生殖与避孕，2009，29：637-642.

[5]刘书华，田婷，宋兵，等.21例男性染色体多态性与ART妊娠结局分析[J].中国优生与遗产杂志，2013，21：48-50.

[6]敖良飞，徐望明，杨菁，等. 男性大Y染色体核型对辅助生殖疗效的影响[J]. 武汉大学学报：医学版，2010，31：357-359.

[7]范玲玲，颜军昊，李媛，等.大Y染色体对体外受精-胚胎移植结局的影响[J].山东大学学报：医学版，2010，48：15-17.

[8]Brothman AR，Schneider NR，Saikevych I，et al. Cytogenetic heteromorphisms：survey results and reporting practices of giemsa-band regions that we have pondered for years[J].Arch Pathol Lab Med，2006，130：947-949.

[9]Dunham I，Shimizu N，Roe BA，et al. The DNA sequence of human chromosome 22[J].Nature，1999，402：489-495.

[10]Nie H，Lu G. Long Y chromosome is not a fetal loss risk[J].J Assist Reprod Genet，2011，28：151-156.

[11]Hong Y，Zhou YW，Tao J，et al. Do polymorphic variants of chromosomes affect the outcome of in vitro fertilization and embryo transfer treatment[J].Hum Reprod，2011，26：933-940.

[12]唐冬生，李晓杰，陈志华，等. 染色体异态性与早期生殖障碍[J].生殖与避孕，2003，23：53-55.

[13]Zhimulev IF，Beliaeva ES.Heterochromatin，gene position effect and gene silencing[J].Genetika，2003，39：187-201.

[14]Buretic-Tomljanovic A，Rodojcic Badovinac A，Vlastelic I，et al.Quantitative analysis of constitutive heterochromatin in couples with fetal wastage[J].Am J Reprod Immunol，1997，38：201-204.

[15]常大黎，邓国良.染色体异态性与不良孕产史关系的探讨[J].中国妇幼保健，2012，27：4428-4430.

[16]Eiben B，Leipoldt M，Rammelsberg O，et al. High incidence of minor chromosomal variants in teratozoospermic males[J].Andrologia，1987，19：684-687.

[17]Nakamura Y，Kitamura M，Nishimura K，et al. Chromosomal variants among 1790 infertile men[J].Int J Urol，2001，8：49-52.

[18]韦波，杜鹃，蒙达华，等.1684对夫妇的染色体多态性与不良孕产史关系的分析[J].中国优生与遗传杂志，2011，19：33-35.

[19]Carp H，Toder V，Aviram A，et al. Karyotype of the abortus in recurrent miscarriage[J].Fertil Steril，2001，75：678-682.

[20]戴小凡，赵菁，刘凌云，等.染色体多态性对男性精液质量的影响[J].中国妇幼保健，2014，29：567-568.

[21]Schieve LA，Tatham L，Peterson HB，et al. Spontaneous abortion among pregnancies conceived using assisted reproductive technology in the United States[J]. Obstet Gynecol，2003，101：959-967.

[22]Wang JX，Norman RJ，Wilcox AJ. Incidence of spontaneous abortion among pregnancies produced by assisted reproductive technology[J].Hum Reprod，2004，19：272-277.

[23]Klipstein S，Regan M，Ryley DA，et al. One last chance for pregnancy：a review of 2，705 in vitro fertilization cycles initiated in women age 40 years and above[J].Fertil Steril，2005，84：435-445.

[24]Winter E，Wang J，Davies MJ，et al. Early pregnancy loss following assisted reproductive technology treatment[J].Hum Reprod，2002，17：3220-3223.

[25]吴正沐，陆湘，吴煜，等.辅助生殖治疗中染色体多态性对妊娠结局的影响[J].上海交通大学：医学版，2014，34：1210-1213.

[26]杨海燕，叶碧绿，林文琴，等.体外受精-胚胎移植后早期妊娠丢失相关因素分析[J].生殖医学杂志，2008，17：335-338.

[27]李柳铭，李慕军，吴惠梅，等.体外受精-胚胎移植助孕妊娠后流产的相关因素分析[J].微创医学，2008，3：85-87.

[28]黄颖，徐望明，罗增丽，等.IVF/ICSI治疗后早期自然流产的相关因素分析[J].医学研究杂志，2011，40：100-103

[29]Bonduleel M，Liebaers I，Deketelaere V，et al. Neonatal data on a cohort of 2889 infants born after ICSI (1991-1999) and of 2995 infants born after IVF (1983-1999) [J]. Hum Reprod.2002，17：671-694.

[编辑：罗宏志]

Pregnancy outcome of 105 patients with chromosomal polymorphism after assisted reproductive technology

JIANGYong-hui1，KONGWei2，HUANQing2，WENJi2*

1.ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250014 2.DepartmentofReproductiveMedicine，SecondAffiliatedHospitalofShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250001

【Abstract】

Objective： To investigate the influence of chromosomal polymorphism on the pregnancy outcome of assisted reproductive technology (ART).

Methods： All the patients undergone IVF or ICSI were randomly divided to two groups. The polymorphism group included 105 infertile couples，in whom at least one person of one couple had chromosomal polymorphism. The control group had 260 patients，and none of them had chromosomal polymorphism. The clinical outcomes were compared between the two groups.

Results： Primary infertility proportion in the polymorphism group is significantly higher than control group(63.81% vs. 55.00%，P<0.05). Spontaneous abortion rate in polymorphism group is similar with control group (13.16% vs. 12.82%，P>0.05). There were no significant differences in fertilization rate，good quality embryo rate，implantation rate，pregnancy rate，biochemical pregnancy rate，premature birth rate，sex ratio and descendant deformity rate of offspring between the two groups (allP>0.05). The early miscarriage rate in polymorphism group was significantly higher than that of control group(33.33% vs. 17.40%，P<0.05).

Conclusions： Chromosomal polymorphism does not have significant influence on the outcomes of ART，but it may increase the risk of early abortion.

Key words：Chromosome polymorphism；ART；Pregnancy outcome；Early abortion rate

【作者简介】姜永辉，男，山东郯城人，研究生，生殖与内分泌专业.(*通讯作者，Email：wj8197@126.com)

【基金项目】山东省医药卫生科技发展计划项目(2014WS0165)；山东省科技发展计划项目(2014GSF118064)

【收稿日期】2015-11-24；【修回日期】2015-12-14

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.04.006