HR-HPV在宫颈病变中的表达及不同治疗方法的转阴率分析

罗汝琼，唐　亮 ，谢　萍，胡艳梅

(四川省攀枝花市妇幼保健院妇产科，四川 攀枝花 617000)



HR-HPV在宫颈病变中的表达及不同治疗方法的转阴率分析

罗汝琼，唐亮 ，谢萍，胡艳梅

(四川省攀枝花市妇幼保健院妇产科，四川 攀枝花 617000)

目的分析高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)在宫颈病变中的表达及不同治疗方法对转阴率的影响。方法选择2010年至2015年在四川省攀枝花市妇幼保健院就诊并经病理检查确诊的400例HR-HPV阳性妇女，根据各患者不同的宫颈病变情况予以相应的治疗，其中50例患者未进行任何治疗，其余350例患者经单纯放置干扰素栓、宫颈锥切术、子宫全切术及宫颈癌根治术等不同治疗方法，3个月后复查各HR-HPV亚型转阴率情况。结果400例HR-HPV患者中，共检出亚型13种，其中检出率最高的5个为HPV16 型82例(20.05%)，HPV58型62例(15.50%)，HPV52型50例(12.50%)，HPV53型37例(9.25%)和HPV18型39例(9.75%)；HPV16的检出率随着CIN分级逐渐升高(χ2=6.720，P=0.035)；治疗后CINⅠ转阴率为59.39%，CINⅡ～Ⅲ转阴率为56.47%，宫颈癌转阴率为69.23%，组间差异无统计学意义(χ2=3.918，P=0.202)；不同宫颈病变治疗后HR-HPV亚型转阴率组间比较差异有统计学意义(χ2=18.625，P=0.001)，宫颈癌根治术后转阴率高于其他治疗方式(χ2=4.443，P=0.038)；HPV16亚型患者未经治疗以及经干扰素栓治疗、宫颈锥切术治疗、子宫全切术治疗和宫颈癌根治术治疗后转阴率分别为29.41%、42.86%、81.82%、80.00%、84.00%，组间差异具有统计学意义(χ2=4.810，P=0.031)，手术治疗患者转阴率高于单纯干扰素治疗和未经治疗者(χ2=6.013，P=0.015)。结论HPV16是各类宫颈病变中为常见的亚型，检出率随着CIN分级逐渐升高，手术治疗后转阴率高于保守治疗，对宫颈病变筛查以及预后判断具有积极意义。

高危型人乳头瘤病毒；宫颈病变；转阴率；亚型分布

[Abstract]Objective To evaluate the expression of high-risk human papilloma virus (HR-HPV) in cervical lesions and the influence of different therapeutic methods on negative conversion ratio. Methods From 2010 to 2015, 400 cases of HR-HPV-positive diagnosed by pathological examination were selected in Panzhihua City Women and Children Hospital, and appropriate therapeutic methods were given. Fifty patients did not accept any treatment, and the other 350 cases were provided with interferon alone, conization of cervix, total hysterectomy and radical hysterectomy, respectively. Negative rate situation were detected after 3 months. Results Totally 13 kinds of HR-HPV subtypes were detected in 400 patients, of which the highest detection rate were found in HPV16 type in 82 cases (20.05%), HPV58 type in 62 cases (15.50%), HPV52 type in 50 cases (12.50%), HPV53 type in 37 cases (9.25%) and HPV18 type in 39 cases (9.75%). HPV16 detection rate gradually increased with CIN grade increasing (χ2=6.720,P=0.035). After treatment negative rate of CINⅠwas 59.39%, CINⅡ-Ⅲ negative rate was 56.47% and cervical cancer negative conversion rate was 69.23% (χ2=3.918,P=0.202). There was statistical significance in HR-HPV subtypes negative conversion ratio after different therapies (χ2=18.625,P=0.001). Negative conversion ratio of radical hysterectomy was higher than other treatments (χ2=4.443,P=0.038). Negative conversion ratio of HPV16 subtype in patients without treatment, those with interferon therapy, cervical conization, hysterectomy and radical hysterectomy was 29.41%, 42.86%, 81.82%, 80.00% and 84.00%, respectively (χ2=4.810,P=0.031). Patients with surgery had higher negative conversion ratio than interferon therapy alone or no treatment (χ2=6.013,P=0.015).Conclusion HPV16 is a common subtype in cervical lesions and detection rate gradually increases with CIN grading. After surgery negative conversion ratio is higher than conservative treatment, and it is of positive significance for cervical lesions screening and prognosis.

[Key words]high-risk human papilloma virus(HR-HPV); cervical lesions; negative conversion ratio; subtype distribution

高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papilloma virus，HR-HPV)是一种嗜上皮病毒，广泛的存在于人和动物中，已被确定的有多种亚型。相关研究表明，不同地区的HR-HPV感染亚型感染率存在差异，同时感染率也随着年龄的变化呈现U型分布[1]。HR-HPV的持续感染是宫颈上皮癌变重要的高危因素，宫颈上皮内瘤变(CIN)不同病变程度中亚型的分布特点对该病的临床诊治具有重要意义[2-3]。本研究现以我院确诊的HR-HPV阳性患者中不同HR-HPV亚型进行检测及相应的治疗，并对其预后状态进行观察。现将研究结果报告如下：

1资料方法

1.1一般资料

病例来源于2010至2015年在四川省攀枝花市妇幼保健院进行体检和宫颈癌筛查女性，选择实验室检查证实HPV感染阳性，同时阴道镜检和组织病理学活检确诊宫颈病变，排除泌尿生殖系统活动性炎症、妊娠哺乳期女性、阴道肿瘤病史、其他性传播疾病及严重的心肝肾功能障碍者。

1.2方法

1.2.1人乳头状瘤病毒检测

标本的收集：嘱患者上妇科专用检查床摆好体位(膀胱截石位)，用阴道窥器暴露宫颈并擦净宫颈口或阴道残端分泌物，将宫颈刷插入宫颈管内或阴道残端，细胞采样器的无菌毛刷均匀散布于宫颈移行带上或阴道残端，顺时针旋转5圈采样，停留10秒后缓慢抽出宫颈刷，将其放入细胞保存液的取样管中，拧紧瓶盖。做好唯一标识编号，注明患者的姓名、年龄及取样时间，填写申请单，-20℃保存，5天内进行检测。使用美国Digene公司的第二代杂交捕获技术(HC2)法，利用基因杂交、信号扩大，确定RNADNA杂合体的含量，检测试剂盒来自上海莱特公司，首先将样本DNA双链释放并分解为可以杂交的核苷酸单链，然后利用核苷酸DNA单链与RNA 探针杂交，并特异抗体捕获DNA-RNA杂交体并固定，接着偶联有碱性磷酸酶的第2抗体与DNA-RNA杂交体结合，冲洗多次至干燥，最后信号放大，由DML2000微量反应板测量光的强弱，可一次性快速检测13种HR-HPV(包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型)，同时确定DNA-RNA杂交体的含量，即HR-HPV载量。以标本的相对光单位(RLU)与阳性定标域值(CO)的比值即为HR-HPV载量，<1为阴性，≥1为阳性[4]。

1.2.2组织病理活检

所有患者治疗前均进行组织病理学检查，采用阴道镜对患者进行检测，注意检查前3天内避免性生活、阴道冲洗上药、妇科检查及宫颈刮片等，检查时应充分暴露宫颈管以免漏诊，在表面涂抹醋酸和碘液，在可疑病变区进行取样活检。病理分级标准：CINⅠ级，相当于轻度和轻度不典型增生；CINⅡ级，相当于中度不典型增生；CINⅢ级相当于重度不典型增生和原位癌。

1.2.3治疗方法

参照第8版《妇产科学》和患者意愿，对宫颈炎症及CINⅠ患者采取干扰素治疗或单纯随访；对CINⅡ～Ⅲ患者采取宫颈LEEP刀或宫颈冷刀锥切术；子宫颈癌Ⅱb期以下行广泛子宫切除及盆腹腔淋巴结切除术。相应治疗1年后进行随访，采用高危型HPV联合细胞检测的方法，必要时行活检，以HPV检测结果载量0.00～1.00为HPV转阴[5]。

1.3统计学方法

采用SPSS 20.0对数据整理和分析，计数资料用率(%)，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1一般情况

共有1 043例女性进行筛查，其中HR-HPV为阳性且确诊宫颈病变的患者400例，年龄26～50岁，平均年龄(41.3±4.4)岁。按照国际标准进行CIN分级：CINⅠ级165例，CINⅡ级120例，CINⅢ级50例，宫颈癌65例。其中不予特殊处理50例，单纯放置干扰素栓治疗115例，宫颈锥切术104例，子宫全切术73例，宫颈癌根治术58例。

2.2 不同宫颈病变HR-HPV亚型检出情况

在400例患者中HPV16检出82例，占20.05%，HPV58检出62例，占15.50%，HPV52检出50例，占12.50%，HPV53检出37例，占9.25%，HPV18检出39例，占9.75%，为检出率最高的5个HR-HPV亚型。CNIⅠ病变中HPV16、HPV58、HPV52检出率分别为17.58%(29/165)、15.76%(26/165)、11.52%(19/165)，CINⅡ～Ⅲ病变中HPV16、HPV58、HPV52检出率分别为18.82%(32/170)、15.88%(27/170)、11.76%(20/170)，宫颈癌病变中HPV16、HPV58、HPV52检出率分别为32.31%(21/65)、13.85%(9/65)、16.92%(11/65)，其中HPV16的检出率逐渐升高，在不同的宫颈病变中检出率差异具有统计学意义(χ2=6.720，P=0.035)。所有患者经相应治疗后，CINⅠ转阴率为59.39%，CINⅡ～Ⅲ转阴率为56.47%，宫颈癌转阴率为69.23%，组间差异无统计学意义(χ2=3.918，P=0.202)，见表1。

表1　　不同宫颈病变HR-HPV亚型检出情况[n(%)]

2.3不同宫颈病变治疗后各HR-HPV亚型转阴率情况

不同宫颈病变治疗后HR-HPV亚型转阴率组间比较差异有统计学意义(χ2=18.625，P=0.001)，宫颈癌根治术后转移率高于其他治疗方式(χ2=4.443，P=0.038)；HPV16亚型患者未经治疗以及经干扰素栓治疗、宫颈锥切术治疗、子宫全切术治疗和宫颈癌根治术治疗后转阴率分别为29.41%、42.86%、81.82%、80.00%、84.00%，组间差异具有统计学意义(χ2=4.810，P=0.031)，手术治疗患者转阴率高于单纯干扰素治疗和未经治疗(χ2=6.013，P=0.015)，宫颈部分切除术、全子宫切除术及宫颈癌根治术两两比较差异无统计学意义(χ2值分别为1.930、2.223、2.017，均P>0.05)，见表2。

表2　　不同宫颈病变治疗后各HR-HPV亚型转阴率情况[n(%)]

3讨论

3.1人乳头状瘤病毒感染与宫颈病变的关系

人乳头状病毒(HPV)是一种DNA病毒，外观呈球形无包膜，目前该病毒的200余种临床亚型已经被临床证实并能进行DNA检测。国际上根据各种亚型导致疾病的类型和严重程度分为低危险型和高危险型[4]。相关资料表明，HR-HPV是宫颈上皮内瘤样病变发展为宫颈癌的主要危险因素，在大约83%的宫颈上皮内瘤变与92%的宫颈浸润癌中存在HR-HPV感染[6]。在对基因亚型分布的研究资料中，发现不同亚型在宫颈病变的分布中存在着统计学差异，且不同基因亚型HR-HPV在宫颈病变分布与CIN的病情程度有关[7-8]。部分研究资料显示，通过对高危亚型HPV16基因亚型所占比例分析可以对病情的判断具有预测意义[9]。临床HPV亚型的分布可能对病情程度的判断具有重要的指导作用，本研究发现随着宫颈病变级别的升高，HPV16亚型的感染率也随之上升，与既往Anglesio的研究一致[10]。

3.2不同宫颈病变分期与人乳头状病毒感染的关系

相关资料研究显示，在CINⅠ期的患者在发生HR-HPV感染的时候一般病情较轻，大多数的患者能够自行转阴，而对于发生了HR-HPV感染的CIN各级患者，机体的免疫应答不能有效清除宫颈上皮细胞内感染的HR-HPV，导致该病毒持续感染，可能进一步发生宫颈上皮内瘤变，甚至导致宫颈癌的发生。持续病毒感染在肿瘤的发生发展过程中有多方面的作用，可诱导基因的不稳定性，导致基因不适当表达，增强细胞增殖，抵抗细胞凋亡，促进肿瘤新生血管生成，侵犯肿瘤相关基底膜并发生转移。同时病毒感染持续存在还可引起宫颈上皮高级别病变，这时病毒基因组可能与宿主基因组整合，而不是单纯感染的病毒粒子状态，故不易清除，HR-HPV一般也不会自动转阴，一般需要临床治疗改善宫颈病变的微环境和减少HR-HPV宿主，以及术后的自身免疫力恢复会使HR-HPV转阴，HR-HPV在CIN发生宫颈癌变的过程中起到了重要的作用。本次研究400例HR-HPV患者中，共计检出亚型13种，其中HPV16、HPV58、HPV52、HPV53、HPV18为检出率最高的五个HR-HPV亚型，且HPV16、HPV58、HPV52、HPV53及HPV18亚型在同一宫颈病变中检出率差异具有统计学意义。CNIⅠ、Ⅱ、Ⅲ病变中，HPV16检出率逐渐升高，在不同的宫颈病变中检出率差异具有统计学意义。

3.3不同宫颈病变治疗方式与HPV感染的关系

目前，临床对于宫颈病变的治疗多以其病变程度为依据，依次采取药物治疗、宫颈锥形切除术、全子宫切除术以及宫颈癌根治术。本研究结果提示，对于宫颈HR-HPV感染而言，依据病情而采取的治疗方式均有一定疗效，但干扰素药物治疗相对较弱，这可能是由于药物抗病毒作用的发挥主要是通过激活宫颈细胞本身抗病毒蛋白基因，而无手术治疗则主要通过将病灶组织进行切除可较大限度祛除发生病变残留或者复发有关[11]。在本次研究中，不同宫颈病变分期患者经相应治疗后，HPV转阴率存在明显组间差异，提示不同程度宫颈病变与HPV感染程度有明显相关性。本次研究4种治疗方式都有的亚型中，HPV16在宫颈癌根治术后转阴率最高，猜测可能由于全部病灶及更大HR-HPV感染得到清除，故而残留及复发的可能性小，进而其预后较好有关[12-13]。

综上所述，不同亚型HR-HPV感染对不同宫颈病变的发展以及不同治疗方式的预后均有一定影响，HPV16亚型是各类宫颈病变中为常见的亚型之一，不但与宫颈病变的进展以及严重程度有关，还影响着患者的转阴情况，HPV16亚型感染的检测对于宫颈病变的筛查以及治疗后转归的预测具有积极意义。

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[专业责任编辑：安瑞芳]

Analysis of the expression of high-risk human papilloma virus in cervical lesions and negative conversion ratio of different therapeutic methods

LUO Ru-qiong, TANG Liang, XIE Ping, HU Yan-mei

(Department of Obstetrics and Gynecology, Panzhihua City Women and Children Hospital, Sichuan Panzhihua 617000, China)

2016-02-15

罗汝琼(1969-)，女，副主任医师，主要从事妇科临床工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.08.039

R711.32

A

1673-5293(2016)08-1018-04