消除血浆高脂血标本对生化项目测定结果干扰的方法研究

蔡丽君，林赟，陈凤平

（1.广州市天河区石牌街社区卫生服务中心检验科，广东510630；2.暨南大学附属华侨医院检验科，广东广州510630）

消除血浆高脂血标本对生化项目测定结果干扰的方法研究

蔡丽君1，林赟1，陈凤平2

（1.广州市天河区石牌街社区卫生服务中心检验科，广东510630；2.暨南大学附属华侨医院检验科，广东广州510630）

目的探讨采用高速离心法、乙醚抽提法及生理盐水稀释法消除高脂血标本对生化酶类指标测定结果干扰的可行性，并比较3种方法的优劣。方法收集2014年8月至2015年3月广东省广州市天河区石牌街社区卫生服务中心采集的明显高脂血标本52份，以3 000 r/min离心10 min得到原高脂血浆。采用MINDRAY BS-390全自动生化分析仪测定原高脂血浆、高速离心血浆、乙醚抽提血浆及生理盐水稀释血浆中丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶及淀粉酶水平，并分析比较3种方法对各种酶类指标检测结果的影响。结果原高脂血浆与高速离心血浆、乙醚抽提血浆及生理盐水稀释血浆中各种酶类指标测定结果比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；且各种酶类指标测定值由高至低依次为高速离心血浆、乙醚抽提血浆、生理盐水稀释血浆和原高脂血浆。结论高速离心法相对乙醚抽提法及生理盐水稀释法处理高脂血标本能明显减轻高脂血标本混浊对生化分析仪测定酶类结果的干扰和影响。

实验室技术和方法；标本；高脂血

我国随着改革开放，人民生活水平日益改善，近十多年来，国人生活方式及饮食结构发生了巨大变化，导致高脂血症发生率呈上升趋势［1］，当三酰甘油水平大于3.0 mmol/L时血液标本的外观可呈不同程度混浊。因此，高脂血标本在临床检验工作中较为常见，对临床生化各项指标、凝血功能相关指标、放射免疫多项指标检验的准确性均会造成不同程度的干扰和影响。轻度高脂血标本对各种生化指标的检测结果可能不会造成严重的干扰或影响，但严重高脂血标本则明显干扰或影响各项指标的检测结果［2］。本研究就高脂血标本对生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶（alanine amiotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartateaminotransferase，AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、γ-谷氨酰转移酶（gamma glutamyltransferase，GGT）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK-MB）及淀粉酶（amylase，AMY）等测定结果的影响通过采用高速离心法、乙醚抽提法及生理盐水稀释法处理高脂血标本，比较3种方法的优劣，并探讨消除高脂血标本对其他检验项目测定结果的干扰，现报道如下。

1　资料与方法

1.1标本来源选择2014年8月至2015年3月在广州市天河区石牌街社区卫生服务中心门诊就诊患者52例，采集空腹静脉血4.0 mL（肝素锂真空抗凝管），三酰甘油检测结果为10.2～24.5 mmol/L。

1.2方法将高脂肪乳糜标本3 000 r/min离心10 min得到原高脂血浆。然后将标本分为4份：第1份采用原高脂血浆测定；第2份采用高速离心法处理（13 000 r/min离心10 min），取下层清亮血浆测定；第3份采用乙醚充分振摇抽提后再以4 000 r/min离心10 min，取下层清亮血浆测定；第4份采用生理盐水进行5倍稀释后测定。所有标本同时在MINDRAY BS-390全自动生化分析仪上测定ALT、AST、ALP、GGT、LDH、CK-MB及AMY，所有指标的检测均严格按照仪器及试剂盒说明书操作。

1.3统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析与q检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

原高脂血浆与高速离心血浆、乙醚抽提血浆及生理盐水稀释血浆中各种酶类指标测定结果比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；且各种酶指标测定值由高至低依次为高速离心血浆、乙醚抽提血浆、生理盐水稀释血浆和原高脂血浆，见表1。

表1　原高脂血浆与3种不同处理方法血浆各种酶类指标测定结果比较（±s，U/L，n=52）

表1　原高脂血浆与3种不同处理方法血浆各种酶类指标测定结果比较（±s，U/L，n=52）

注：与原高脂血浆比较，aP＜0.01；与高速离心法血浆比较，bP＜0.01；与乙醚抽提法血浆比较，cP＜0.01。

血浆原高脂血浆高速离心法血浆乙醚抽提法血浆生理盐水稀释法血浆ALT 8.9±7.1 40.8±9.3a29.7±7.6ab23.1±6.0abcASTALPGGTLDHCK-MBAMY 10.8±9.6 47.6±10.2a36.8±9.3ab19.8±7.5abc24.7±13.5 84.6±15.2b60.5±14.1ab48.8±12.3abc8.1±4.2 35.6±8.4a24.7±7.3ab16.8±5.1abc58.1±20.2 143.0±27.6a108.8±24.3ab75.1±23.1abc2.1±1.0 13.2±4.3a8.1±3.8ab5.2±2.4abc45.9±15.2 143.2±25.3a102.2±22.1ab74.8±20.4abc

3　讨论

高脂血标本是临床生化检验工作中常遇到的棘手问题，其混浊的主要原因是三酰甘油、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、高密度脂蛋白及乳糜微粒等脂质增多，使血浆浊度增高所致，对临床检验项目造成的干扰极易影响临床对患者的诊治，甚至引发医疗纠纷。因此，在临床检验过程中应事先筛选标本，如通过目测法或自动化仪器对比筛选不符合检验要求的高脂血标本，确定干扰物性质和级别并进行处理，以降低其对临床检验项目的干扰和影响，从而提高临床诊断的准确性和为临床治疗提供可靠的实验诊断依据。

在临床检验工作中高脂血标本的主要来源通常有以下几方面：（1）高血压、心血管疾病及高脂血症患者；（2）长期高脂及高热量饮食者，患者在日常饮食过程中常摄入过量高脂和高热量食物造成消化道吸收过量脂质进入血液，使血液标本产生混浊外观（俗称乳糜血）［3-4］；（3）某些患者由于无法进食引起营养不良或有消耗性疾病需输注脂肪乳而导致血液脂质水平过高［5-6］。

高脂血标本对临床生化分析仪各项指标测定的干扰或影响机制：（1）由于高脂血标本的脂质含量过高导致混浊度增高，可增加生化分析仪测量各指标体系的本底，使仪器在测定过程中吸光度值的变化超出了仪器的光学测量范围，使仪器无法读取正确的测量数据，导致部分临床生化指标无法检测；（2）由于高脂血标本中过多的脂质微粒在反应杯中运动碰撞而干扰仪器对吸光值的检测，导致相应的检测指标结果不准确；（3）由于高脂血标本中过多的不溶性脂质微粒使标本混浊，增加了标本内各种物质成分的极性与非极性，导致生化分析仪产生光散射干扰［7-8］，从而影响临床生化指标测定的可靠性。

以往在临床检验工作中处理严重高脂血混浊标本时较多采用稀释、乙醚抽提2种方式进行处理。但稀释法在处理高脂血标本时较容易产生稀释误差，且随血标本稀释倍数增高稀释误差也随着倍增［9］，同时由于稀释后血标本脂质微粒依然存在，所以，对临床生化分析仪产生的光散射干扰并没有达到完全消除的效果。而乙醚抽提法中由于乙醚是一种较强的有机溶剂，较容易引起高脂血标本中蛋白质成分变性。特别是用乙醚抽提样本时容易使高脂血标本中的蛋白质酶类活性发生变化，使高脂血标本中蛋白质酶类的检测结果相对患者的真实检测结果偏低。另外乙醚有机溶剂在抽提高脂血标本时对其他的糖类物质、无机离子、非蛋白质化合物等指标的检测也同样会产生干扰或影响。目前，对高脂血标本较常用的是采用低温高速离心法，即将高脂血标本加盖密封进行高速离心，离心后可见标本分为2层，将下层血浆吸取出来再用生化分析仪进行各项临床生化指标的检测。但低温高速离心法对离心机性能要求较高，且对严重高脂血标本需离心的时间较长，这样可能会导致标本产生溶血从而干扰或影响相关临床生化指标的检测。同时低温高速离心机的购置费用也较高，对基层医院检验科而言不易配备和普及。而常温高速离心机因价格较低廉，且操作简单、方便，实验室也容易配备。本研究结果显示，原高脂血浆用生化分析仪所检测的各种酶类指标结果与高速离心血浆、乙醚抽提血浆及生理盐水稀释血浆的检测结果比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），且高速离心血浆、乙醚抽提血浆及生理盐水稀释血浆3种方法处理高脂血标本后检测结果比较，差异也均有统计学意义（P＜0.01），且各种酶类指标测定结果由高至低依次为高速离心血浆、乙醚抽提血浆、生理盐水稀释血浆和原高脂血浆。因此，作者认为，常温高速离心法是一种能较好地消除高脂血标本的干扰及影响临床生化分析仪检测结果的简便、有效且可行方法之一。

目前，在临床检验工作中如何寻找消除高脂血标本对临床检验项目的干扰对策是亟须重视的问题：（1）消除单项检验指标样本的干扰最好的解决对策是改变检测项目的实验方法、试剂或检测时间，如肌酐（serum creatinine，Cr）作为肌酸代谢的终产物，是临床疾病诊断中用于衡量肾功能的一项常规指标，其在血液中的变化主要由肾小球滤过能力决定。通常临床实验室检测Cr最常用的方法为苦味酸速率法，因此，在用该法进行检测时常需选择“窗口期”（即标本和试剂混合后25～60 s）进行测定，这样才能最大限度地消除快速反应假性Cr物质和慢速反应假性Cr物质的干扰。此外采用加入双试剂（抗坏血酸酶和亚硝基铁氰化钾）的肌氨酸氧化酶法（需去除镁离子的干扰）检测Cr也是一种良好的检测方法，可去除抗坏血酸和胆红素的干扰。同型半胱氨酸作为甲硫氨酸和半胱氨酸代谢过程中一个重要的中间产物，可直接或间接引起血管内皮细胞损伤，促进血管平滑肌细胞增殖，影响低密度脂蛋白的氧化，增强血小板功能，从而促进血栓形成。因此，在全自动生化分析仪中可采用荧光偏振免疫技术对血清同型半胱氨酸进行测定，可为临床诊治动脉粥样硬化性血管性疾病提供更高效、准确、可靠和可行的依据。（2）消除多项检测指标标本的干扰。在临床生化检测多项检测指标标本时需采用可行性强、无交叉干扰及操作简单、易行的实验方法，如利用依米试剂不溶于水的特性，将其与高脂血清（浆）混合后可将高浓度脂质分离出来。虽然经上述多种途径处理后的高脂血标本可消除高浓度脂质微粒对多种生化指标检测造成的干扰，但在某种程度上仍不能消除高脂血标本对清蛋白、GGT、血尿素氮等指标检测的干扰［10］。因此，在临床检验工作中应优先选择去脂混合剂，再采用常温高速离心法，密封分离标本，并对其下层清液进行测定，可有效降低因血中胆固醇浓度过高对各项指标检测的影响，为高脂血症患者提供准确、可靠的检验结果。（3）消除高脂血标本对凝血相关指标检测的干扰。凝血相关指标常采用胶体金或免疫比浊法进行检测，要求对高脂血标本进行适当比例稀释，即可避免或明显降低高脂血标本对凝血相关指标的干扰。

综上所述，在临床工作中采用一些简便、易行的方法预先处理高脂血标本可明显降低检验过程中各种干扰因素对各项指标检测结果的影响，从而提高临床检验结果的准确性，为临床疾病的诊治提供可靠的实验诊断依据。

［1］周菜珠，孙梅，梁巧莹，等.328例脂肪肝患者血脂和肝功能检测结果调查分析［J］.中国医药科学，2012，2（4）：135.

［2］彭华，戴盛明.高脂血标本对临床检验项目的干扰及消除［J］.国际检验医学杂志，2010，31（10）：1140-1142.

［3］刘小敏，唐恒锋，李文郎，等.高脂血、溶血标本对荧光定量聚合酶链反应测定低水平HBV-DNA的影响［J］.检验医学与临床，2015，12（21）：3217-3218.

［4］王波兰.高脂血症对生化检验项目的干扰及消除［J］.求医问药：下半月刊，2013，11（4）：171.

［5］林景涛，翟锬，代艳杰，等.高脂血对血清酶类活性测定影响及处理方法［J］.检验医学与临床，2010，7（15）：1542-1543.

［6］刘万彬，隆维东.聚乙二醇4000处理脂血后对生化结果的影响［J］.国际检验医学杂志，2012，33（4）：504-506.

［7］陆奉科，闭雄杰，韦祥灵.高脂血浆对血红蛋白测定的干扰及其校正［J］.检验医学与临床，2013，10（6）：738-739.

［8］张正云，何清.高脂血标本对血红蛋白的干扰及校正方法［J］.实验与检验医学，2014，32（5）：644-645.

［9］汤桂丽.高脂血症对生化检验项目的干扰及消除方法［J］.中国药业，2015，24（6）：94-96.

［10］朱征，丁显平，杨敏，等.消除高脂血对临床生化测定影响的方法研究［J］.西南军医，2013，15（2）：147-148.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.12.038

B

1009-5519（2016）12-1883-03

（2016-01-06）