不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷d的含量影响

2016-12-27 16:42董金石
科学与财富 2016年29期
关键词:测定炮制

董金石

摘 要:本文对不同炮制工艺对北柴胡中成分含量的影响进行研究。固定相为:依利特hypersil BDS C18色谱柱(4.6*250*5u),以乙腈、水梯度洗脱为流动相,检测波长为203nm;柴胡皂苷d在50~950μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好、回收率高,可用于不同北柴胡炮制品中柴胡皂苷d的含量测定。

关键词:北柴胡;炮制;测定

北柴胡(BupleurumchinenseDC.)别名:硬苗柴胡(东北药用植物图志)、竹叶柴胡(植物名实图考)、韭叶柴胡(安徽)、津柴胡等。北柴胡分布于我国东北、华北、华东、中南、西南及陕西、甘肃等地。柴胡属多年生草本药用植物,能解表和里、升阳、疏肝解郁。柴胡主治感冒、上呼吸道感染、肋痛、肝炎、胆道感染、胆囊炎、疟疾、寒热往来、脱肛等。《本草正义》记载:“约而言之,柴胡主治,止有二层,一为邪实,则为外邪之在半表半里者,引而出之,使达于表而外邪自发;一为正虚,则为清气之陷于阴分者,举而升之,使返其宅,胃中气自振。”本文对不同炮制工艺对北柴胡中成分含量的影响进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器RephiLe Direct-Pure Genie 超纯水系统(上海乐枫生物科技有限公司);LC3000分析等度高效液相系统(北京创新通恒科技有限公司);德国美诺G7883实验室清洗消毒机(科德恩(北京)科技发展有限公司);HX-06超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司);UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司);TGF-9075A电热恒温鼓风干燥箱(上海喆图科学仪器有限公司);普利赛斯 EP125SM 电子天平(上海天美天平仪器有限公司)。

1.2 试药:三乙胺(天津市康科德科技有限公司)、冰乙酸(山东佳泰石油化工有限公司)、乙腈(成都三维化工有限责任公司)、磷酸(济南世纪通达化工有限公司)、盐酸(济南世纪通达化工有限公司)、甲醇(济南世纪通达化工有限公司)、磷酸氢二铵(天津市康科德科技有限公司)、冰醋酸(天津市康科德科技有限公司)。

2 含量测定

2.1 色谱条件:依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱(4.6*250*5u);流动相以乙腈为A,水为B,按下表梯度洗脱;检测波长为203nm;流速1.0mL·min-1;柱温:30℃。理论板数按柴胡皂苷d峰计算应不得低于2000。

2.2 炮制品的制备

2.2.1 醋制。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥,加醋拌匀,焖透,置锅内,用文火炒干,取出,放凉。每公斤柴胡,用醋0.2公斤。

2.2.2 鳖血制。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥,置大盆内,淋入用温水少许稀释的鳖血,拌匀,焖润,置锅内用文火微炒,取出,放凉。每公斤柴胡,用活鳖2个取血。

2.2.3 酒制。取柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥,用黄酒拌匀,焖润手诱,置锅内用文火加热炒干,取出,放凉。每公斤柴胡,用黄酒0.1公斤。

2.2.4 炒制。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥,用文火炒至微焦,取出,放凉。

2.2.5 制炭。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥,用文火炒至外黑内褐黄色,喷入少量水,取出,晾干。

2.2.6 蜜制。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥.取蜜置锅内,加热至沸,倒入柴胡片,用文火炒至深黄,不粘手为度。

2.2.7 蜜麸制。柴胡除去杂质及残茎,洗净,润透,切厚片,干燥.将麦麸炒热,加入蜂蜜,炒至不粘手时,加入柴胡片,炒至药材表面显黄色为度,取出,过筛,晾凉。每公斤柴胡,用麦麸0.03公斤,蜂蜜0.01公斤。

2.3 供试品溶液的制备

取北柴胡适量,粉碎成粗粉,精密称定至容量瓶内,加适量5%浓氨试液的甲醇流动相超声20分钟,放凉,过滤,用甲醇多次冲洗残渣和容器,将冲洗液和滤液合并,水浴蒸干,残渣用50%乙腈溶解并转移至10毫升容量瓶内,用50%乙腈定容,过0.45μm的滤膜,即得。

2.4 对照品溶液的制备

精密称取柴胡皂苷d对照品约10mg,置5毫升棕色容量瓶中,用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度,摇匀,精密吸取1毫升,置10毫升棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL溶液中含柴胡皂苷d 200μg)。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为50μg·mL-1、150μg·mL-1、250μg·mL-1、350μg·mL-1、450μg·mL-1、550μg·mL-1、650μg·mL-1、750μg·mL-1、850μg·mL-1、950μg·mL-1的对照品溶液,分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A(μg)为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,柴胡皂苷d对照品在50~950μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取柴胡皂苷d对照品溶液10μL重复进样6次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的RSD为0.69%。结果表明,本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批北柴胡样品6份,分别制备成供试品,按色谱条件测定含量,并计算样品的RSD值为0.63%,结果表明,此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液,分别在0,1,2,3,4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪,进样测定,供试品柴胡皂苷d峰面积积分值的RSD为0.56%。结果表明柴胡皂苷d至少在4h内稳定。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法,测定北柴胡三批样品中柴胡皂苷d的含量,结果柴胡皂苷d含量生柴胡〉蜜麸制〉蜜制〉醋制〉酒制〉鳖血制〉炒制〉制炭。

参考文献

[1]李媛媛,秦雪梅,张丽增,郭小青.不同品种柴胡药材和饮片中皂苷类成分的质量评价[A].2006第六届中国药学会学术年会论文集[C].2006.

[2]谭铭铭,晁志.广州市售柴胡药材中柴胡皂苷a的ELISA检测[A].广东省植物学会第十九期学术研讨会论文集[C].2010.

[3]刘伟,郭蕾,范婷,董诚明,陈志红.生长期不同施肥方法对柴胡中柴胡皂苷a、d含量的影响[J].中国实验方剂学杂志,2010年01.

[4]胡杰,刘晓节,秦雪梅,张丽增,郭小青.HPLC法测定柴胡皂苷前处理酸化条件的优化及相关分析方法的评价[A].2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C].2008.

[5]李军,姜华,张延平,王新胜,李晓明,尹卫平,王忠东.柴胡皂苷b2对照品的制备研究[A].第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].2009.

猜你喜欢
测定炮制
水蛭炮制前后质量分析
3种姜汁炮制后厚朴对大鼠胃黏膜损伤的抑制作用
清半夏炮制工艺的优化
假新闻炮制不出真实的社会冷暖
汽车发动机容积效率的计算与测定
赣南脐橙叶片中氮含量的测定研究
对环境监测中水质总磷测定标准方法的探讨
水中BOD5分析应注意问题解析
探讨常用藏药材的炮制方法
希特勒炮制的『罗姆事件』