消糜栓对非特异性阴道炎的治疗机制研究*

石 菊 于艳辉 徐 建 周俊佟 许艳茹 唐晓桐 白 冰

（吉林修正药业新药开发有限公司 长春·130012）

消糜栓为褐色至棕褐色的栓剂，气特异。主要成分含人参茎叶皂苷、紫草、黄柏、枯矾、儿茶、苦参、冰片，可以清热解毒，燥湿杀虫。用于湿热下注所致的带下病，症见带下量多、色黄、质稠，腥臭、阴部瘙痒，滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎、非特异性阴道炎见上述证候者。本文着重研究消糜栓对非特异性阴道炎的治疗作用。

1　材料

1.1　试药与试剂

消糜栓：消糜栓原药粉，由通药制药集团股份有限公司提供，批号：060701；双唑泰栓：云南白药集团股份有限公司，批号 ZlA1321；复方甲硝唑阴道栓：河北三石药业股份有限公司，批号150111018；水合氯醛：国药集团化学试剂有限公司，批号T20070725；阿拉伯胶：天津市光复精细化工研究所，批号20061204；苯酚：北京北化精细化学品有限责任公司，批号20060306；甲醛：沈阳力诚试剂厂，批号20140614；苯甲酸雌二醇：杭州动物药品厂，批号110202511；氢化可的松注射液：吉林省华牧动物保健品有限公司，批号141120；青霉素注射粉末：华北制药股份有限公司，批号F4032305

1.2　仪器

CO2培养箱6100型：日本SANYAN公司；离心机lDZ5-2型：北京医用离心机厂；倒置显微镜CDS-1型：重庆光学仪器厂；洁净工作台SW-CJ-IF型：苏净集团苏州安泰空气技术有限公司；精密电子天平ESJ60-4：沈阳龙腾电子称量仪器有限公司。蒸汽灭菌器（YXQ-lS-50SII型，上海博讯实业有限公司医疗器械厂），热空气消毒箱（GR-246型，上海博讯实业有限公司医疗器械厂）；酶标仪（SMP-500-18272-lSI0型，Manufactured in China Designed in California USA）；游标卡尺，上海台海工量具有限公司。

1.3　动物与菌株

1.3.1动物 清洁级Wistar大鼠，体重180-220g，购自吉林大学基础医学部实验动物研究中心，动物合格证号：SCXK( 吉) 2014-0003。

1.3.2饲料 鼠维持料，购自长春市绿园益生实验动物饲料厂，许可证号: SCXK(吉) 2010-0001。

1.3.3菌株 加德纳杆菌（ATCC14018）购于中国食品药品检定研究院。

2　实验方法

2.1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型的影响

2.1.1细菌性阴道炎模型的复制[1,2]

60只大鼠禁食不禁水16h后水合氯醛麻醉，分出10只为假手术组（只手术不摘除卵巢），其余大鼠无菌条件下摘除大鼠双侧卵巢，术后第4天开始皮下注射苯甲酸雌二醇10mg·kg-1，每天1次，连续4d，使大鼠进入假动情期。即日开始除皮下注射苯甲酸雌二醇外，再皮下注射氢化可的松注射液60mg·kg-1，隔日1次，连续3d，复制大鼠免疫功能低下模型。术后第9天将0.1ml（0.25×106个·ml-1）加德纳杆菌液注入大鼠阴道内，原位停留1～2min，防止菌液溢出。24h后相同方法再感染1次。感染后大鼠隔日交替皮下注射苯甲酸雌二醇或者氢化可的松注射液1次。注入加德纳杆菌4d后，可见模型大鼠外阴红肿，伴少量白色分泌物，取分泌物涂于血琼脂培养基表面，37℃培养72h，肉眼观察可见大小不等的类水泡菌落，即细菌性阴道炎大鼠模型复制成功。

2.1.2分组与给药

细菌性阴道炎模型大鼠随机分为模型（等体积生理盐水）、复方甲硝唑阴道栓（216 mg·kg-1）和消糜栓高、中、低剂量（540、270、135 mg·kg-1）组，每组10只。阴道给药，每天1次，连续7d。假手术组给予等体积生理盐水。

2.1.3指标的测定

于末次治疗后第7天，大鼠麻醉，取1ml大鼠阴道冲洗液显微计数。腹主动脉取血，采取的血样标本在4℃条件下离心25min（2500r·min-1）制备血清，对TNF-α和Il-2含量测定。

2.2　消糜栓对苯酚胶浆所致大鼠阴道炎的影响[3]

2.2.1分组和给药

健康Wistar雌性大鼠60只，随机分为：空白组、模型组、双唑泰栓组(135 mg·kg-1)、消糜栓高、中、低剂量组（540 mg·kg-1、270 mg·kg-1、135 mg·kg-1）。根据文献方法[6]，取苯酚15ml，阿拉伯胶20g，蒸馏水25ml配成37.5%苯酚胶浆，大鼠阴道注入苯酚胶浆0.2ml，1次/3天，共4次。造模成功后，各组大鼠阴道给药，1次/天，连续7天。

2.2.2指标 2.2.2.1 第11天所有大鼠腹主动脉取血，4℃条件下离心25min（2500 r·min-1）制备血清，对TNF-α和IL-1含量测定。 2.2.2.2 取出阴道,剔除脂肪组织及系膜等，称量阴道的重量，计算脏器指数。 2.2.2.3 用10%福尔马林固定，并进行病理组织学观察。

3　实验结果

3.1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型的影响

模型组细菌数明显多于假手术组，复方甲硝唑阴道栓组（216 mg·kg-1）和消糜栓高、中剂量组（540、270 、135mg·kg-1）细菌数明显少于模型组（P＜0.05），模型组大鼠血清中肿瘤坏死因子TNF-α水平高于假手术组(P＜0.05)，与模型组比较，消糜栓高、中、低剂量（540、270、135 mg·kg-1）能明显降低大鼠血清中肿瘤坏死因子TNF-α水平（P＜0.001），详见表1、表2。

表1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型细菌数的影响（±SD；n=100）

表1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型细菌数的影响（±SD；n=100）

与空白组比较##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.01。

组别　　剂量（mg·kg-1） 细菌数（*106） 细菌数(酶标法)假手术组　　——　1.32±0.47　0.28±0.10模型组　　——　6.35±1.28##　0.42±0.10##复方甲硝唑阴道栓组　216　1.45±0.23*　0.32±0.11消糜栓高剂量组　540　1.83±0.44*　0.27±0.06*消糜栓中剂量组　270　1.72±0.04*　0.29±0.09*消糜栓低剂量组　135　2.70±1.27*　0.30±0.16*

表1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型TNF-α和Il-2的影响（±SD；n=100）

表1　消糜栓对大鼠细菌性阴道炎动物模型TNF-α和Il-2的影响（±SD；n=100）

与空白组比较#P＜0.05；与模型组比较*P＜0.05、***P＜0.001。

组别　　剂量（mg·kg-1） TNF-α（U·ml-1）IL-2（U·ml-1）假手术组　　——　364.39±38.91　678.07±88.87模型组　　——　415.04±40.66#596.76±140.54复方甲硝唑阴道栓组　216　371.26±57.18518.18±108.67消糜栓高剂量组　540　316.49±53.97***563.71±111.15消糜栓中剂量组　270　327.61±33.15***　556.68±94.05消糜栓低剂量组　135　334.28±48.85***534.12±103.99

3.2　消糜栓对苯酚胶浆所致大鼠阴道炎的影响

3.2.1模型组大鼠阴道体指数高于空白组(P＜0.01)，模型组大鼠血清中白细胞介素Il-1水平高于空白组(P＜0.05)，模型组大鼠血清中肿瘤坏死因子TNF-α与空白组无差异。与模型组比较，消糜栓高、中剂量（540、270、135 mg·kg-1）能明显降低大鼠血清中白细胞介素Il-1水平（P＜0.001、P＜0.01、P＜0.05）。，详见表 3。

表3　消糜栓对苯酚胶浆所致大鼠阴道炎的影响（±SD；n=100）

表3　消糜栓对苯酚胶浆所致大鼠阴道炎的影响（±SD；n=100）

与空白组比较 ##P＜0.01；与模型组比较 *P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001。

（×10-3）　IL-1（U·ml-1）　TNF-α（U·ml-1）空白组　　—　1.55±0.7　1.48±0.09　16.66±1.48模型组　　—　2.43±0.37##1.61±0.14#16.74±2.00双唑泰栓组　135　1.94±0.28　1.57±0.31　17.20±2.34组别　　剂量（mg·kg-1）阴道体指数消糜栓高剂量组　540　1.89±0.42　1.36±0.08***18.32±1.60消糜栓中剂量组　270　1.93±0.38　1.39±0.16**17.57±1.98消糜栓低剂量组　135　2.86±0.24　1.44±0.15*17.42±2.08

3.2.2实验各组组织学观察结果显示，空白组、双唑泰栓组、消糜栓高、中、低剂量组均表现为上皮组织结构正常，个别病例偶见少量炎细胞浸润，毛细血管增生，但均未见明显异常。模型组均表现出细胞轻微不典型增生改变。双唑泰组、消糜栓高、中、低剂量组均对其有治疗作用，见图1-6。

4　讨论

女性生殖道感染是妇女的常见病和多发病，其病原菌既有厌氧菌、需氧菌、霉菌，又有阴道滴虫。致病者往往有两种以上病原体混合感染。消糜栓主要成分含人参茎叶皂苷、紫草、黄柏、枯矾、儿茶、苦参、冰片。

本中药复方重在于炎性的研究，一般炎性病理检查可以见到病变处有大量的炎细胞浸润及炎性充血，水肿，甚至出现粘膜溃疡[4-5]查阅大量的文献发现，用细菌感染和25%的苯酚胶浆致阴道炎，宫颈炎的模型中阴道，宫颈组织病理检查都会出现上述的变化[6]。本文选用简单易行，重复性好，成功率高的阴道常见治病菌加德纳杆菌所致的细菌性阴道炎模型和25%的苯酚胶浆造模进行研究。中草药治疗妇科疾病的优势在于调整机体的免疫功能[7-9]，调节阴道菌群。西药抗菌效果好，但在杀灭致病菌的同时也破坏了阴道的正常菌群，因此易复发。本研究中，探讨了消糜栓治疗非特异性阴道炎的机制，其中体内抑菌试验中，消糜栓可显著降低肿瘤坏死因子TNF-α水平，提示消糜栓可能具有提高机体免疫功能的作用。在对苯酚胶浆所致大鼠阴道炎的试验中，消糜栓显示出对阴道炎所致阴道不典型增生具有治疗作用，可能与可降低炎性因子白细胞介素Il-2有关。实验结果证实了消糜栓对非特异性阴道炎具有治疗作用。这为消糜栓进一步的研究提供了实验依据，并证明了其具有一定的实用价值。

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