慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中病原体的检测分析

孙 峰 张 静 张永娟 梅 倩 昝丽娜 刘广印

慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中病原体的检测分析

孙 峰 张 静 张永娟 梅 倩 昝丽娜 刘广印

目的 探究呼吸道病原体在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中的感染情况。方法 回顾性分析2015年5月～2016年4月住院478例慢性阻塞性肺疾病急性加重患者，应用间接免疫荧光法（IFA）检测病毒（流感病毒A/B、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒）和非典型病原体（嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体）8种呼吸道病原体IgM抗体，并进行痰培养细菌学鉴定。结果 患者呼吸道病原体检测总感染率为78.0%（373/478），病原体分类感染组合以单类病原体感染为主占41.2%（197/478），病毒类感染居多（占58.4%），病原体多重感染占58.7%（219/373），较单一感染多，其中流感病毒B、肺炎支原体、嗜肺军团菌、流感病毒A和念珠菌位于总阳性率和单一病原体感染者的前列；感染者中男性占54.7%（204/478），男性以单一感染为主63.0%（97/154），女性以2个或以上病原体的多重感染为主51.1%（112/219），病毒和非典型病原体的感染在性别间差异均有统计学意义（χ2=4.7，P=0.03；χ2=19.83，P=0）；真菌在不同季度间感染率的差异有统计学意义（χ2=11.85，P=0.008），其余病原体在不同季度间的差异均无统计学意义。结论 本研究中慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）患者的病原体感染主要由病毒和非典型病原体引起，以流感病毒B、肺炎支原体、流感病毒A、嗜肺军团菌和念珠菌的单一或混合感染常见。

慢性阻塞性肺疾病急性加重 呼吸道 感染 病原体

慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）是一种常见的危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，严重影响患者的生活质量，随着人口老龄化及环境污染的加重，其患病率逐年增高。慢性阻塞性肺疾病急性加重（Acute Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary Disease，AECOPD）是指COPD患者发生的急性状况，急性变化会损害肺功能，加速病情进展，其特征是患者呼吸道症状较平日恶化，且需要改变原药物治疗方案；减少AECOPD的发生，成为延缓COPD病情进展、改善患者生活质量的重要措施。AECOPD可由多种因素引起，最常见的为呼吸道感染，及时控制感染能缩短康复时间，减少治疗失败的危险和缩短住院时间。随着新检测技术的出现与推广，引起呼吸道感染的病原体检测为临床精准治疗提供参考，常见病原体主要有细菌、真菌、病毒、非典型病原体等，目前间接免疫荧光法（immunofluorescence assay IFA）具有检测方便快捷，成本低廉的优势，可进行定性检测，可检测患者血清中病毒的抗体如：流感病毒A/B （Influenzavirus A/B，F1uA / B ）、副流感病毒（Para Influenzavirus，PIV）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、腺病毒（Adenovirus，ADV）和非典型病原体如：嗜肺军团菌（Legionella Pneumophila，LP）、肺炎支原体（Mycoplasma Pneumonia，MP）、肺炎衣原体（Chlamydia Pneumonia，CP）等8种呼吸道病原体IgM抗体，可作为临床诊断病毒和非典型病原体的依据，常规细菌培养鉴定是诊断细菌和真菌感染的常用方法。为了解AECOPD患者中病原体的感染状况，现对2015年5月～2016年4月478例临床诊断为AECOPD患者的病原体（F1uA /B、PIV、RSV、ADV、LP、MP、CP）IgM检测结果和痰培养结果进行回顾性分析，报道如下。

资料与方法

1 一般资料 2015年5月～2016年4月诊断为慢性阻塞性肺疾病急性加重的本院住院患者478例，所有入选对象均符合慢性阻塞性肺疾病全球倡议（GOLD，2013修订版）中COPD的诊断标准[1]，符合慢性阻塞性肺疾病急性加重诊断标准，排除近期接种流感疫苗患者。其中男性273例，女性205例；年龄25～94岁，平均年龄（71.9±10.1）岁。本研究经亳州市人民医院伦理学委员会批准，涉及的临床资料均经过患者知情同意。

2 标本采集 抽取患者空腹静脉血3 ml，立即送检，3 000 r/min离心10 min取血清进行检测。痰培养要求患者清晨用清水漱口3次以上，用力咳出气管深部痰液至无菌标本盒内，立即送检。

3 仪器与试剂 奥林巴斯荧光显微镜；德国欧蒙8种呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒。严格按说明书进行操作和结果判读。细菌鉴定和药敏试验仪器检测采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK-2COMPACT全自动细菌分析仪及配套耗材，血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、念珠菌显色平板均购自梅里埃（上海）生物制品有限公司。

4 统计学处理 应用IBM SPSS20.0统计软件，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用卡方检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 病原体感染状况 478例慢性阻塞性肺疾病急性加重的患者呼吸道病原体检测总感染率为78.0%（373/478），病原体分类感染组合以单类病原体感染为主（41.2%），病毒类感染居多（占58.4%），复合感染中以病毒和非典型病原体的混合感染为主（占23.2%）；病原体的多重感染（占58.7%）较单一感染者多，其中流感病毒B、肺炎支原体、嗜肺军团菌、流感病毒A和念珠菌位于总阳性率和单一病原体感染者的前列，见表1、2。

2 性别分布 478例病原体感染者中男性占54.7%，感染类型在不同性别间的差异有统计学意义（χ2=7.28，P=0.007），其中男性以单一感染

为主63.0%（97/154），女性以2个或以上病原体的多重感染为主（51.1%），病毒和非典型病原体的感染在性别间的差异均有统计学意义（χ2=4.7，P＜0.05；χ2=19.83，P＜0.05），见表3。

表1 478例AECOPD患者病原体分类感染组合分布

表2 373例AECOPD病原体感染者检测结果

3 时间分布 不同季度间4类病原体只有真菌感染率的差异有统计学意义（χ2=11.85，P＜0.05），真菌以第三季度感染率较高（18.92%，7/37），本地区第三季度为夏季；其余3类病原体在不同季度间感染率的差异均无统计学意义，任一病原体在不同季度的感染率的差异也无统计学意义，见表4。

表3 不同性别间AECOPD患者感染情况分布表

表4 AECOPD患者病原体感染季度分布表

讨 论

感染是COPD反复急性加重的诱发因素之一，COPD患者大多每年会出现急性加重，发病患者肺功能受到损害，严重者危及生命，居死因构成第4位，给社会、家庭、医疗卫生体系带来负担和压力[2]。AECOPD作为一种呼吸系统病原体感染高发疾病，在以往的诊疗中往往局限以细菌类感染作为诊断，随着临床检验技术的发展，快速、便捷、经济的检测方法使病毒和非典型病原体进入临床诊断关注的视野。

病原体感染是COPD患者急性发作的重要诱因，本研究中78%的患者有各种不同的病原体感染，但仍有22%未发现病原体感染因素，或许与其他非感染因素有关，如雾霾、油烟、吸烟等[3]；或与使用的病原体检测方法的局限性有关。14%～40%的AECOPD与病毒感染相关[4]，本研究采用IFA技术对AECOPD患者血清中呼吸道病毒IgM抗体行定性检测，结果病毒类感染阳性率占52.6%，居首位，其中以FluB居多，FluB为主的感染在国内有报道[5，6]，与以往认为的流感病毒以FluA感染为主的观点不符，尚待进一步大规模流行病学调查证实。AECOPD患者病原体感染无论是单类或复合感染，病毒均为重要病原体。复合感染中以病毒与非典型病原体合并感染占优势，其中MP和LP在本研究中扮演非典型病原体的重要角色，近期国外研究报道MP与流感病毒共同感染具有重要意义[7]。本次检测中LP检出率21.8%，较文献偏高[8]，或许与空调、加湿器等设施的使用、本研究人群免疫力较低和长期患病活动范围有限有关。本研究中男性感染率高于女性，或与本研究人群年龄属于老龄（71.9±10.1岁）相关，老龄男性患者大多有抽烟习惯，而抽烟是公认的呼吸道感染的重要高危因素之一，因此戒烟是减少COPD患者呼吸道感染的有效途径[9]；女性COPD患者多重感染率高于男性，或与老龄女性常年从事家庭烹饪工作，长期接触油烟和燃料废气，在身体素质相当的情况下，女性肺功能下降较男性更明显[10]，易造成病原体的混合交叉感染，通过加强居室通风，减少有害气体及烟雾排放与暴露，对减轻女性COPD患者病情大有裨益。

高龄、基础疾病、并发症、长期应用激素等导致COPD患者机体免疫力差，本研究人群真菌感染率比有关文献高[11]。夏季气候湿热是真菌繁殖的良好环境，使得真菌感染呈本季节高发，应注意COPD患者环境的清洁卫生，减少感染机会。潮湿环境也是铜绿假单胞菌繁殖的沃土，作为AECOPD感染的最常见细菌之一，本次感染率居其他细菌之首。体弱或免疫低下的COPD患者作为高风险对象要注意混合感染的预防，本次有3例是单一感染，14例为多重感染。在流感流行季节COPD患者较易感染多种呼吸道病毒，导致病情急性加重，接种流感病毒疫苗成为当前尚无有效抗病毒药物时的预防AECOPD的重要手段[12]。呼吸道病毒及非典型病原体尤其是流感病毒与MP、LP等病原体的混合感染与AECOPD关系密切，可能与FluB感染时，分泌的酶和细胞因子有利于病毒和细菌在呼吸道黏膜繁殖，破坏呼吸道防御能力有关[13]，复合感染不容忽视。同时提醒COPD患者在呼吸道病毒及非典型病原体流行季节应做好如：避免接触相关病原体的传染源、疫苗接种、减少人口密集区活动等预防工作。

本研究为本地区AECOPD防治提供了病原学和流行病学的宝贵数据和理论依据，对于临床开展针对性治疗用药起到积极导向作用，为COPD患者预防感染导致的病情急性加重提供了诊断依据。由于个体差异，用IFA方法检测IgM时会出现IgM持续阳性；COPD患者长期应用免疫调节药物导致机体免疫功能低下，致血清IgM 类抗体延迟产生及病原体交叉反应的干扰，病原体特异性IgM抗体作为病原感染疾病的确诊依据尚有一定局限性，COPD患者常反复应用抗感染药物使得痰培养不能生长出满意菌落，对细菌检出也有一定局限性。在以后临床检测中可适时引入敏感性、特异性较高，检测用时短但价格较贵的分子生物学检测方法，检测呼吸道分泌物中的细菌、肺炎支原体、肺炎衣原体和流感病毒等病原体[14]（如PCR法、基因芯片法、基因测序法、质谱分析法等），以满足临床诊断的需求。

1 柳涛，蔡柏蔷. 慢性阻塞性肺疾病诊断、处理和预防全球策略2013年版介绍[J]. 中华结核和呼吸杂志，2013，36（11）：805-807.

2 蔡柏蔷. 科学认识、重视防治、勇于探索——评析国内外慢性阻塞性肺疾病诊断和治疗新指南[J]. 内科理论与实践，2007，2（5）：287-291.

3 Wilson R，Sethi S，Anzueto A，et al. Antibiotics for treatment and prevention of exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease[J]. J Infect，2013，67（6）：497-515.

4 徐少华，王伟，柏玉红，等. 病毒感染对慢性阻塞性肺疾病患者气道炎症的作用[J]. 中华医院感染学杂志，2004，14（11）：1209-1211.

5 谢红梅，胡必杰，马艳，等. 1647例呼吸道感染病原体的IgM抗体检测结果分析[J]. 中华医院感染学杂志，2012，22（12）：2696-2698.

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7 Mina MJ，Burke RM，Klugman KP. Estimating the prevalence of coinfection with influenza virus and the atypical bacteria Bordetella pertussis，Chlamydophila pneumoniae，and Mycoplasma pneumoniae[J]. European Journal of Clinical Microbiology，2014，33（9）：1585-1589.

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9 Feldman C，Anderson R. Cigarette smoking and mechanisms of susceptibility to infections of the respiratory tract and other organ systems[J]. Journal of Infection，2013，67（3）：169-184.

10 张阳，张庆，李洁，等. 不同性别的非吸烟COPD患者肺功能和疾病严重程度的比较[J]. 医学与哲学（B），2014，35（9）：28-30.

11 朱翠珍，刘春林，温新云，等. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期病原学分析[J]. 国际检验医学杂志，2016，37（15）：2159-2161.

12 童春堂，尤兰华，郭沛艳，等. 慢性阻塞性肺疾病急性加重患者呼吸道病毒及非典型病原体的检测分析[J]. 中华肺部疾病杂志（电子版），2014，7（2）：8-11.

13 李兵，李雪辉，陈杭薇. 慢性阻塞性肺疾病急性发作患者流感病毒检测结果[J]. 中国临床保健杂志，2012，15（3）：253-254.

14 胡晓武，周红艳，沈佐君，等. 一步法实时荧光RTPCR在快速检测甲型流感病毒中的应用[J]. 临床输血与检验，2010，12（4）：296-299.

Detection and Analysis of Pathogens in Patients with Acute Exacerbation Underlying Chronic Obstructive Pulmonary Disease

SUN Feng，ZHANG Jing，ZHANG Yong-juan，et al.
The people's Hospital of Bozhou 236800

Objective To detect respiratory pathogens in patients with acute exacerbation underlying chronic obstructive pulmonary disease （AECOPD） so as to provide evidences for clinical treatments. Methods A retrospective analysis was performed in the hospital from May 2015 to April 2016. 478 cases of AECOPD were examined for IgM antibodies by IFA，and pathogens by sputum culture for influenza virus A/B，para influenza virus，respiratory syncytial virus，adenovirus and atypical pathogens （Legionella pneumophila，Mycoplasma pneumonia，and Chlamydia pneumonia）. Results The overall positive rate of pathogens was 78.0% （373/478），single species infection accounted for 41.2% （197/478），viral infection accounted for 58.4%，and multiple pathogen infections accounted for 58.7%（219/373）. Among them，influenza virus B，M. pneumonia and L. pneumophilia，influenza virus A and Candidainfection dominates both in total prevalence and single species pathogen infection. Males had a higher positive rate of 54.7% （204/478） than females （45.3%，169/478） （χ2=4.06，P=0.044） Virus and atypical pathogen infections varied in gender （χ2=4.7，P=0.03，χ2=19.83，P=0）; fungus infection rate changedwith seasons （χ2=11.85，P=0.008）. Conclusions The causative agents in AE-COPD mainly are comprised of viruses and atypical pathogens，influenza virus B，M. pneumonia，influenza virus A，L. pneumophila and Candida，single species or mixed infections are common.

Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease Respiratory Infection Pathogen

R563 R373

A

1671-2587（2017）02-0162-05

2016-10-18）

（本文编辑：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.020

236800 安徽省亳州市人民医院检验科

孙峰（1984–）男，安徽亳州人，主管技师，硕士，主要从事临床免疫及分子生物学研究工作，（E-mail）sfbbmc@163.com。