黄芩苷在大鼠肝微粒体Ⅱ相代谢研究

顾纪锋

【摘要】葡醛酸化代谢是中药成分体内重要的代谢途径。黄芩苷为多酚类化合物，具有多个羟基，在大鼠肝微粒体能够生成葡醛酸化代谢产物，酶动力学符合米氏酶动力学过程，Km和Vmax分别为101μM、1371 pmol/min/mg protein。

【关键词】黄芩苷；Ⅱ相代谢；大鼠微粒体

【中图分类号】R285 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）07--01

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT） 是化学物质和中药成分在生物体内进行第Ⅱ相生物转化时最重要的一种酶。该酶能催化葡萄糖醛酸与大量的内源性和外源性化学物质进行葡萄糖醛酸结合反应，是药物在体内重要的解毒途径。阐明中药成分的代谢变化对指导临床合理用药很有意义。

黄芩（Scutellariae Radix）為唇形科植物黄芩（Scutellariae baicalensis Georgi）的干燥根，具有“清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎”功效，临床上单用或与其他中药配伍使用，如我院常用的院内制剂芩茜止血颗粒中主要中药就为黄芩[1]。黄芩苷是黄芩中最主要的有效黄酮类成分，具有多种药理作用[2]。已有研究表明，黄芩苷为多酚类化合物，具有多个羟基，易发生Ⅱ相代谢结合反应[3]，其在体内的葡醛酸化是主要的代谢途径之一。目前关于黄芩苷在大鼠肝微粒体的Ⅱ相代谢变化未见报道。

1.材料

WatersAlliance高效液相色谱系统。美国Finnigan公司LCQ离子阱型质谱仪。黄芩苷购自中国药品生物制品检定所；大鼠肝微粒体购自瑞德肝脏（上海）；甲醇购自Sigma公司；超纯水由MilliporeMilli-Q纯水仪制备；其他试剂为分析纯。

2.方法

2.1 黄芩苷葡醛酸化产物测定条件色谱条件

ThermoC18柱（250×4.6mm，5μm），流动相：A（0.1%磷酸）和B（甲醇），等度洗脱：50%B。流速：1ml/min，柱温：40℃，检测波长：277nm，进样量：10μL。

2.2 代谢稳定性研究

将磷酸盐缓冲液、MgCl2、大鼠肝微粒体、水解酶抑制剂和黄芩苷药液混合，37℃振荡水浴中预孵育5min，加入UDPGA启动反应，37℃振荡水浴中孵育，在30min时取样，同时做空白、灭活、及无UDPGA样品，通过HPLC比较上述几种样品找出可能的代谢产物，并通过LCQ离子阱型质谱仪确定分子量。

2.3 黄芩苷葡醛酸化代谢动力学研究

在肝微粒体温孵液中分别加入不同浓度黄芩苷标准液，使黄芩苷的浓度为1-300μM，经37℃水浴温孵振荡30min后，应用GraphPadPrism4.0软件对代谢产物生成速率与底物浓度进行非线性拟合，计算酶动力学参数米氏常数（Km）及最大反应速度（Vmax）。

3.结果

3.1 代谢稳定性结果

通过比较可以发现孵育30min后与阴性对照相比出现了1个新的色谱峰，经LC-MS/MS分析确定其分子量均为623，比原药的高176Da，主要二级碎片离子为m/z447（-176Da）。说明黄芩苷在大鼠肝微粒体中能够发生葡萄糖醛酸化代谢。

3.2 黄芩苷葡醛酸化酶动力学结果

黄芩苷（浓度1-300μM）在大鼠肝微粒体中葡醛酸化代谢产物酶动力学符合米氏酶动力学过程。Km和Vmax分别为101μM、1371pmol/min/mgprotein。

4.讨论

葡萄糖醛酸化是黄酮类化合物的重要代谢途径[4]，其原因是酚类和羧酸类化合物易于葡萄糖结合，而黄酮类化合物为多酚类化合物，因此是Ⅱ相代谢酶的重要底物。黄芩是临床上常用的中药，我们的研究结果表明，黄芩苷能够发生广泛的Ⅱ相代谢，提示在临床上避免与Ⅱ相代谢酶抑制剂联合使用，避免影响药效。

参考文献

[1]辛文妤，宋俊科，何国荣，杜冠华.黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展[J].中国新药杂志，2013，22（6）：647-659.

[2]李倩楠，葛晓群.黄芩苷的解热作用及对细胞因子的影响[J].中国中药杂志，2010，35（8）：1068-1072.

[3]Oliveira EJ，Wateon DG. Metabolism of guercetin and kaempferol by rat hepatocytes and the identification of flavonoid glycosides in human plasma[J]. Xenobiotica，2002，32（4）： 279-287.

[4]Guo MZ，Li XS，Xu HR，et al. Rhein inhibits liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats[J]. Acta Pharmacol Sin，2002，23（8）： 739-744.