小鼠心肌梗死模型建立的简化方法研究

史建伟

（南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210000）

心肌梗死动物模型的建立能够模拟心梗发生，有利于医疗界深入研究心肌梗死，提高心梗防治效果。为探讨简单易行、切实有效的小鼠心肌梗死模型建立对策，本研究小组开展了实验研究。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究动物

本次研究动物源自某实验动物中心养殖的昆明雄性小鼠，入选小鼠鼠龄11～12周，体重25～30 g，共选入35只。

1.2 器械和用品

本次研究所用医疗器械包括小动物呼吸机、心电图机；工具有眼科专用剪、镊，刀片、直/弯钳、大头针、缝合针、留置针、持针器及经皮冠状动脉球囊成形术导丝；医疗用品包括消毒碘酒/酒精，2%戊巴比妥钠溶液、医用胶带、动物手术台等。

1.3 方法

①术前监护。以50 mg/kg的标准，经腹腔为小鼠注射2%戊巴比妥钠溶液实施诱导麻醉，用药后5～7 min后，实施夹趾反射试验，若提示阳性结果则可继续注射麻醉药，以初始剂量的10%～20%为准；准备就绪后，摆放小鼠体位为右侧卧位，将5-0尼龙线系在小鼠前上切牙并连接操作台边缘，确保鼠鼻与边缘保持5～10 mm距离，同时，应用医用胶带将小鼠四肢、尾巴等部位进行妥善固定；借助刀片将手术部位毛发剔除，并使用碘酒、酒精进行全面消毒；启动心电图机，并妥善连接小鼠肢体与机器，实现导联监测。②人工气道建立。从双前肢上方5 mm与颈部中心线垂直点开始，用剪刀顺延向上剪开皮肤，切开大小为10 mm，将皮下组织进行钝性分离，使气管充分暴露；运用规格为24号的留置针实施气管穿刺，严格把控入针深度，稍有落空感便应及时拔针，从穿刺孔将导丝插入气管，并缓慢推送至口腔，打开小鼠口腔并注意观察导丝进入情况，可利用工具将导丝牵引而出；导丝归位后，借助导丝牵引，用规格为20号的留置针进行气管插管，成功后，将导丝撤出，并妥善连接呼吸机，完成人工气道建立，而后将切开关闭。呼吸机潮气量应保持1 mL，每分钟呼吸频率保持120次。③左前降支结扎。维持小鼠呼吸畅通，探寻小鼠心脏跳动最为明显（胸骨左侧）处，沿此处上方最近肋骨与下一肋骨间隙，将皮肤切开，切口大小为1 mm，而后全面分离并配合右侧胸部挤压手法，充分暴露左心腔及心脏；以介于左心耳与肺动脉圆锥间的左冠状静脉为主干，在弯钳的辅助下将心脏稳固，准备8/0缝线针，从左心耳根部下方2 mm处入针，进针深度以0.5 mm为宜，从心肌表层穿出；观察小鼠心电图走势，待恢复平稳10 min后，实施左前降支结扎；术后，及时复位心脏，以大潮气量使小鼠双肺迅速充盈并维持胸腔负压；使用7-0尼龙线缝合切口，持续应用呼吸机，待小鼠意识清醒后，将气管插管拔除。④术后管理。术后，监测小鼠体温变化，采取措施如60瓦灯照射维持其体温（36℃～37℃），避免其体温过低引发危险。若术中小鼠体温下降亦可采用此方法，照射保暖时，灯泡距离小鼠应在25～30 cm之间。另外，观察小鼠呼吸状态，若出现呼吸抑制迹象可应用呼吸兴奋剂或氧气吸入法恢复正常呼吸。此外，术后，连续三天为小鼠肌注青霉素，1次/d，每次8万U。术后十天，将缝线拆除。⑤左心室心肌HE染色。待心电图等指标资料收集完毕后，杀死小鼠，暴露心脏，将大血管、心房、心脏外结缔组织去除后提取心脏标本，实施心肌HE染色处理，并收集染色信息。

1.4 模型成功标准

以I、aVL导联ST段弓背向上抬高并持续30min以上为小鼠心梗模型建立成功的标志。

2 结 果

2.1 小鼠存活情况

术后一天，33只小鼠存活，1只死于心脏破裂，1只因肺部损伤过重而死；术后两周，共存活31只。

2.2 心电图走势

术后两周，存活小鼠心电图ST段恢复至基线水平，I、aVL导联呈QS波型。

2.3 心肌HE染色结果分析

33只小鼠心肌HE染色后，显微镜下可明确看到心肌细胞大量坏死、纤维化。另2只小鼠进行TTC染色，可明确分辨胞浆/核及其组织结构，且均为粉红色。

3 讨 论

冠状动脉前降支结扎术是心肌梗死动物模型建立较为常用的方法，且国内外诸多学者证实了该术式能够促使心梗模型成功建立[1]。气管插管是建立人工气道的前提，也是冠状动脉前降支结扎术的重要环节。气管切开与经口插管是当前国内外气管插管常用的两种方法，其中，气管切开会损伤气道，呼吸系统并发症发生风险较大，同时该项操作不可重复进行，在动物模型建立过程中并不推荐使用[2]。

部分国外学者提倡应用经口腔直接插管的方式，但是该项操作需要器械引导，否则极易误插至食管内。值得一提的是，模型建立所选动物一般体型较小，气管较细，因此误插率更高[3]。同时，在反复插管过程中易造成不必要的损伤，引发死亡事件。因此，从某种角度而言，经口腔插管亦非气管插管理想方案。在本次研究中，我们借助导丝经气管逆行而上，大大降低了气管插管对小鼠存活率的负面影响。同时，该项操作可重复操作，方便可行。另外，小鼠具有繁殖快、易于饲养、与人类心脏、血管等基因相关性强等优势，被广泛应用于国内外医疗界动物实验研究中。但是，小鼠血管较细，因此我们在术中合理摆放体位并开胸暴露前降支。同时，在术中、术后应用60瓦灯进行照射保暖，提高了小鼠存活率。本研究结果数据表明，导丝简化气管插管联合开胸式冠状动脉左前降支结扎术，操作简便，能够提高小鼠心肌梗死模型建立成功率，借鉴价值极高。