HPLC法同时测定3种煎法下防风通圣方中的黄芩苷和栀子苷含量

吴宇锋+陈灵哲+林忠

摘 要 目的：通过定量分析比较不同煎煮途径对防风通圣方中主要成分含量的影响，判断各个方法的优劣。方法：HPLC法分别测定不同煎煮途径下防风通圣方中的黄芩苷和栀子苷含量。结果：代煎、自煎、免煎颗粒样品的黄芩苷含量分别为0.886、0.787、0.639 g/L；栀子苷含量分别为0.057、0.051、0.017 g/L。结论：防风通圣方不同煎煮途径的优劣可通过HPLC定量测定来区分；由黄芩苷和栀子苷含量均得出代煎途径最佳。

关键词 防风通圣方 煎煮 黄芩苷 栀子苷

中图分类号：O657.71； R289.5 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2018）01-0061-04

Simultaneous HPLC determination of the contents of baicalin and gardenoside extracted from Fangfengtongsheng prescription by different decoction methods

WU Yufeng 1*， CHEN Lingzhe 2， LIN Zhong1（1. Taizhou Hospital， Wenzhou Medical University， Taizhou 317000， China； 2. Renji College， Wenzhou Medical University， Wenzhou 325035， China ）

ABSTRACT Objective： To compare the effect of different decoction methods on the contents of main components in Fangfengtongsheng prescription by quantitative analysis so as to evaluate the merits of each method. Methods： The contents of baicalin and gardenoside were determined by an HPLC method. Results： The contents of baicalin were 0.886， 0.787 and 0.639 g/L and the contents of geniposide were 0.057， 0.051 and 0.017 g/L by three different decoction methods including the decoction by hospital， the self-decoction at home or oral ready granules from company， respectively. Conclusion： The merits of different decoction methods can be evaluated by HPLC determination of two main components in Fangfengtongsheng prescription and the contents of baicalin and gardenoside are the highest by the method of the decoction by hospital.

KEY WORDS Fangfengtongsheng； decoction； baicalin； gardenoside

中藥在几千年来为人类疾病防治做出了巨大贡献[1]。中药汤剂可以帮助患者调理身体，是很多患者喜爱的治疗方式[2]。但是随着社会节奏越来越快，中药煎煮繁琐的操作流程反而成为了部分患者的累赘，由此，传统的中药煎煮开始演变出新型的煎煮方式：医院代煎汤剂（多帖合并煎煮）和免煎颗粒[3-4]。这两种新型的煎煮途径不仅省去了患者煎煮中药的流程，而且使患者随时随地都可以服用中药汤剂。和传统煎煮途径相比，便利性大大提高。但是，正因为省去了部分煎煮环节，部分病人甚至医生对代煎汤剂和免煎颗粒持不信任或者怀疑态度，认为疗效和质量不如传统煎煮的汤剂[4-6]。本文以黄芩苷和栀子苷为指标，采用HPLC法，验证自煎、代煎、免煎颗粒这3种途径对防风通圣组方药汤质量的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

Waters高效液相色谱仪Waters 717自动进样器、1525四元泵、2487紫外检测器、Breeze数据获取处理系统和Waters ODS2（4.6 mm×250 mm，5 mm）色谱柱（美国Waters公司）；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为三重蒸馏水；磷酸为分析纯；防风通圣方草药及免煎颗粒药均购自浙江省台州医院中药房（草药：杭州华东中药饮片有限公司；免煎颗粒：江苏江阴天江药业）；黄芩苷对照品（批号：KA0801CA14，以98%计）和栀子苷对照品（批号：Y24S6H380S，以98%计），均为色谱纯，购自上海源叶生物有限公司。

自煎药：根据《中国药典》2015版一部防风通圣颗粒组方用量，取1帖防风通圣方草药，浸泡30 min，加入500 ml水，根据自煎中药先煎后下煎煮得400 ml药液。

代煎药：取上述5帖防风通圣方草药，浸泡30 min，加入2 500 ml水，使用煎药机煎煮得2 000 ml药液。

免煎颗粒：根据防风通圣组方1帖用量换算，混匀即得。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

1）黄芩苷 采用waters ODS2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 mm），流动相为甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）[7-9]；检测波长：278 nm；柱温30 ℃；流速：1 ml/min；进样量：20 ml。endprint

2）栀子苷 采用waters ODS2色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 mm）；流动相为乙腈-水（15∶85）[8-10]；检测波长：240 nm；柱温30 ℃；流速：1 ml/min；进样量：20 ml。

1.2.2 溶液制备

1）黄芩苷对照品溶液 精密称取黄芩苷对照品1.10 mg，加70%甲醇溶液制成浓度为0.110 mg/ml的对照品溶液。

2）栀子苷对照品溶液 精密称取栀子苷对照品1.16 mg，加70%甲醇溶液制成濃度为0.116 mg/ml的对照品溶液。

3）代煎和自煎供试品溶液 分别精密量取防风通圣方代煎和自煎样品溶液各10 ml，置于50 ml量瓶中，加70%甲醇水溶液至刻度，超声溶解30 min，放冷至室温，用0.45 mm滤膜滤过，即得。

4）免煎颗粒供试品溶液 取防风通圣方免煎颗粒样品适量，研细，精密称取0.25 g，置于50 ml量瓶中，加70%甲醇水溶液至刻度，超声溶解30 min，放冷至室温，用0.45 mm滤膜滤过，即得。

2 结果

2.1 系统适应性

黄芩苷和栀子苷的保留时间分别为17.833 min和5.853 min，目标色谱峰无干扰，分离度好，表明系统适应性良好。

2.2 线性关系考察

2.2.1 黄芩苷

精密吸取黄芩苷对照品溶液0.5、1、2、4、5和7 ml，置10 ml容量瓶中，用70%甲醇水溶液定容至刻度，与黄芩苷对照品各取20 ml进行HPLC测定并记录色谱图[11-12]。经分析得回归方程为Y=54.902X+0.260 4，r=0.999 4，线性范围为0.1～1.37 mg。

2.2.2 栀子苷

取对照品溶液，分别自动进样1、2、4、8、12和16 ml进行HPLC测定并记录色谱图[13]。经分析得回归方程为Y=19.496X+0.660 1，r=0.999 0，线性范围为0.11～2.27 mg。

2.3 稳定性试验

取防风通圣方自煎样品制成供试品溶液，分别在0、2、4、6和8 h进样，结果见表1。黄芩苷和栀子苷的峰面积的RSD分别为0.796%和3.735%，均小于5%，表明色谱条件和仪器稳定性良好。

2.4 精密度试验

将黄芩苷和栀子苷对照品溶液分别进样6次，计算黄芩苷和栀子苷的峰面积，RSD分别为0.09%和0.19%，均小于1%，表明仪器的精密度高。

2.5 重复性试验

取自煎供试品溶液6份（2 ml）连续进行HPLC测定。计算得黄芩苷和栀子苷的平均含量分别为0.747 g/L和0.043 g/L，RSD分别为5.56%和5.11% 。

2.6 加样回收试验

精密量取6份自煎供试品溶液（各1 ml），分别加入适量的黄芩苷和栀子苷对照品溶液进行HPLC测定，计算黄芩苷和栀子苷含量和回收率[13]（表1）。

2.7 样品含量检测

制备代煎、自煎、免煎颗粒供试品溶液各3份，分别进行HPLC测定，记录数据，使用外标法分析计算黄芩苷和栀子苷的平均含量（表2）。

3 讨论

防风通圣方是解表通里，清热解毒的经典方剂[14]，临床应用较多，且含有先煎、后下等特殊煎法的药物。中药汤剂煎煮兼具复杂性、专业性、随机性和系统性的一个中药制剂过程，内含复杂的物理化学反应过程[15]。不同煎煮途径对有效成分的影响较大，如患者拿回家自行煎煮，由于专业性不够，往往在火候或煎煮时长上有所不妥，甚至忘记了特殊煎法，则导致有效成分含量降低；而免煎颗粒剂是近年来新兴的中药制剂，但由于其是将每味中药分别煎煮提取有效成分，服用前直接物理混合，而忽略了各中药多种成分在煎煮过程中的化学反应过程，导致最终汤剂的成分可能与传统煎法差异较大，因此并未得到所有中医生的认可。综上，选择合适的煎煮途径对中药药效的发挥具有重要意义。就本研究结果来看，把中药交给专业机构，一次性煎煮好是最佳方案。本研究的创新之处在于，用具体的定量测定结果来考察各方法的优劣，相比综述型文章更直观可靠。但由于中药方剂成分的复杂性，本研究选取其中两个具有代表性的成分作为检测指标，存在一定的局限性，下一步将扩展到其他更多成分的定量测定，并选取更多的方剂进行比较，方能更加全面也更有说服力地窥探三种煎煮途径的优劣。

参考文献

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