三种免核酸提取PCR试剂盒检测乙肝患者血清HBV-DNA的临床对比研究

高洁 严敏 付婷 邵中军

近年来，我国乙型肝炎患者人数呈现逐年上升的趋势，现代医学已经证实，引发该病的主要原因是乙型肝炎病毒感染，血液传播是其最主要的传播途径[1]。针对乙型肝炎病毒，如何能够准确、迅速地作出诊断，及时治疗尤为关键，血清中的乙型肝炎病毒是诊断乙型肝炎患者是否患病的最精准、最可靠的指标[2]。为了寻找最为科学、合理、有效的检查手段，本研究选择了3种免核酸提取PCR试剂盒对24例乙肝患者血清进行检测，同时选择24例阴性血清作对比，比较3种试剂盒在乙肝病毒检测中的临床应用效果。现作如下报告。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经患者本人及其家属同意，选取乙肝防治示范区于2015年1月—2016年6月检测出的24例乙型肝炎患者血清标本，24例患者包括14例男性和10例女性，年龄在24～51岁，平均年龄在（40.1±3.7）岁。以《病毒性肝炎防治方案》（2000年）为诊断标准，HBsAg、HBeAg检测呈现阳性或抗HBe、抗HBc呈现阳性；另外要排除HAV、HCV、HDV、HEV感染病例。另外于我院体检中心选择24例阴性血清作为参比对照，包括14例男性和10例女性，年龄在21～49岁，平均年龄在（39.8±3.4）岁；经HBsAg检测均为阴性。

1.2 主要试剂

3种免核酸提取PCR试剂盒分别购自A、B、C三家不同的公司；DL2000 DNA Marker（宝生物工程有限公司）；SYBGreenⅠ染料（厦门百维信）；乙肝病毒荧光定量试剂盒（上海科华生物科技公司）；引物由上海生工公司合成。

1.3 检测方法

对24份乙肝患者血清及24份阴性血清，分别用3种免核酸提取PCR试剂盒单独检测。反应体系（25 μl）组成如下：引物0.75 μl，酶 0.5 μl，2×PCR Buffer 12.5 μl，待测血清 2 μl，使用RNase-free water 加至25 μl。反应条件如下：98℃ 2 min；98℃5 s，68℃ 30 s，35个循环。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳分析，实验结果用凝胶成像系统扫描成像记录。

1.4 统计学方法

2 结果

针对24例乙型肝炎患者血清检测，结果发现，3种免核酸提取试剂盒中，购自C公司的MightyAmp试剂盒阳性检出率最高，达到95.83%；3种试剂盒检测下的阳性结果经RTPCR检测，均为阳性。另外，检测24例阴性参比血清，结果显示均为阴性。3种试剂盒阳性检出率相比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

3 讨论

目前，慢性乙型肝炎患者在我国乃至全世界占有很大比例，研究发现，大约有15%～40%的乙肝病毒携带者会出现一系列的并发症，比如肝硬化、肝功能失常、肾衰竭等[3-4]。乙型肝炎的发生不仅严重危害患者自身的身体健康和生活质量，还会增加患者家庭经济负担以及家属精神压力。

当机体感染乙肝病毒时，外周血液乙肝病毒复制活动开始加剧，因此检测血清中的乙肝病毒对于乙肝的诊断具有重要意义[5]。当前临床应用的主要检测方法是荧光定量PCR技术，这种诊断技术有其独特的优势，同时也存在一定的局限性[6]。荧光定量PCR方法的优点是灵敏度和特异度都比较高，但样品前处理比较麻烦，需要进行核酸提取并纯化，耗时较长，检测费用较高[7]。

本研究选取3种免核酸提取PCR试剂盒，这样就弥补了荧光定量PCR检测方法的局限性，省略了核酸提取以及纯化的步骤，采集患者血清后直接加入反应体系，按照试剂盒说明操作即可，简化了操作程序，节约了检测时间，相比于荧光定量PCR检测方法更加方便快捷[8]。本试验研究结果显示，3种免核酸提取试剂盒中，购自C公司的MightyAmp试剂盒阳性检出率最高，达到95.83%；3种试剂盒检测下的阳性结果经RT-PCR检测，均为阳性。另外，检测24例阴性参比血清，结果显示均为阴性。3种试剂盒阳性检出率分别为87.50%（21/24），91.67%（22/24），95.83%（23/24），3种试剂盒，两两相比，阳性检出率均差异无统计学意义（P＞0.05）。综合分析本试验，由于本次试验的样本量较少，为了使免核酸提取PCR试剂盒应用于乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒的临床检测分析这一方法更具有说服力及可信度，下一步本试验欲将进一步加大试验的样本量。

表1 3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎病毒结果[n（%）]

综上所述，3种免核酸提取PCR试剂盒应用于乙型肝炎病毒的检测，具有检测方便快捷、特异性强、灵敏度高等优点，在乙型肝炎患者的临床诊断中发挥重要作用。

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