蛋鸡H7N9亚型禽流感抗体监测与分析

白 晓 ，张 诚 ，崔 欢 ，王学静 ，高 磊 ，陈立功 ⋆，董世山 ，刘聚祥 ⋆

（1河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站，河北保定071001；2.迁安市农业畜牧水产局，河北迁安064400；3.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000）

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒所引起的各种家禽及野生禽类的感染和/或疾病综合征[1]。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)属于正黏病毒科、A型流感病毒属，是一种分节段的负链RNA病毒，由8个基因节段组成，根据AIV表面糖蛋白血凝素蛋白 (Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的抗原性分为不同的亚型，迄今为止，已经出现了18种HA亚型和11种NA亚型[2、3]。根据AIV致病性不同可将AI分为高致病性、中致病性和非致病性三类。家禽感染AIV后，有的不表现明显的症状，有的表现为呼吸道感染和产蛋严重下降，严重者甚至引起全身性感染，导致100%死亡[4]。2013年以前，H7N9亚型 AIV曾在国外禽类中偶有检出[5]。2013年3月中国出现了可感染人并造成较为严重临床后果的H7N9亚型AIV[6]，截止到2017年3月8日，人感染该病毒确诊病例达1476例，其中1473例来自中国[7]。研究表明，该病毒的 HA基因来源于鸭群中流行的H7亚型流感病毒，NA基因来源于鸭群或者野鸟中的 N9亚型流感病毒，内部基因来源于 H9N2病毒[6、8]。然而，我国早期发现的H7N9亚型AIV对家禽具有低致病性特点[9、10]，感染的禽类表现轻微的症状或不表现临床症状，该病毒能在人类毫无察觉和防范的情况下进行传播，仅通过临床症状观察不能了解家禽的感染情况，因此对非免疫鸡群进行血清学调查至关重要。本研究对2013年～2016年间河北省部分地区蛋鸡场进行了H7N9亚型AI抗体监测及分析，以为蛋鸡H7N9亚型AI的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 监测样品

于2013年～2016年，在河北省石家庄、保定、沧州3个地区71个蛋鸡场随机采集血清，共计1414份。采样鸡场均未免疫H7N9亚型AIV灭活疫苗。

1.2 试剂

禽流感病毒H7N9亚型HI试验用抗原及阳性血清来自哈尔滨维科生物技术开发公司。无菌采取健康公鸡血并用肝素抗凝，按常规制备1%红细胞悬液，4℃保存备用。

1.3 监测方法

1.3.1 血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)试验

所有血清经56℃灭活30min，参照禽流感病毒H7N9亚型HI试验抗原与阴、阳性血清说明书规定的微量法，进行血清中H7N9 AIV抗体检测。

1.3.2 判定标准

以能完全抑制4个单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度，即血清效价。当阳性对照血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性对照血清效价不高于2 log2时，试验方可成立。被检血清HI效价≤3 log2判为阴性；=4 log2判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥4 log2判为阳性，≤3 log2判为阴性）；≥5 log2判为阳性。

2 结果与分析

2013年～2016年共检测71个蛋鸡场，结果显示H7N9抗体阳性鸡群共23个，占总检测鸡群的32.39%。其中保定地区鸡群H7N9抗体阳性率最高，为36.36%，沧州地区鸡群H7N9抗体阳性率最低，为28.57%。3个地区不同年份，鸡群H7N9抗体阳性率也不一致，2014年最高，为42.86%，2015年最低，为 18.75%，详见表1。

表1 2013-2016年河北省3个地区鸡群H7N9抗体检测结果

2013年～2016年共检测1414份样品，H7N9抗体阳性血清共43份，占总检测样品的3.04%。监测的4年中，保定地区血清H7N9抗体阳性率最高，为3.42%，石家庄地区血清H7N9抗体阳性率最低，为2.64%。3个地区不同年份，血清H7N9抗体阳性率也不一致，2014年最高，为4.75%，2015年最低为0.94%，详见表2。

表2 2013-2016年河北省3个地区血清H7N9抗体检测结果

3 讨论

H7N9亚型禽流感1988年首先报道在美国流行，此后几年内被多次发现，但都是在部分地区禽类的小范围流行。后来在欧洲的野鸟及鹅群中也发现了该病毒，但均为低致病性病毒[5]，禽类感染后无任何临床症状，仅在血清检测结果阳性时短期出现病毒排泄，也不会引起人的感染。本研究用HI方法从临床健康非免疫蛋鸡群采集的样品中检测到了H7N9亚型阳性血清，从血清学角度证实了调查期间河北省部分蛋鸡群曾感染过H7N9亚型AIV。本次调查中曾采集鸡群的咽喉拭子和泄殖腔拭子，用荧光定量RT-PCR检测双拭子中的H7N9亚型AIV，然而病原学检测结果均为阴性。

病原学研究证实，2013年～2015年间我国少数养禽场存在着低致病性H7N9亚型流感病毒感染[10]。2017年1月以来，关于从我国家禽或环境采集样本中检测到H7N9亚型高致病性AIV的报道陆续增多[11、12、13]，这无疑对我国养禽业构成了巨大的威胁。由于高致病性禽流感具有传播速度快、波及范围广、防控难度大及对人类危害严重等特点，所以应对本病采取严格的综合性防控措施，尤其是指导养殖场户及时提高其生物安全水平。鉴于AIV存在变异风险，相关部门应对我国禽类间传播的所有流感病毒亚型从血清学、病原学等方面进行持续监控，以保障动物和人类健康。